1、 课题来源：国家自然科学基金资助项目申请学位门类级别： 理学硕士论文完成日期：时间：艿难宦畚脑诮饷芎笥袷卮诵时间：知伽导师签名：宁夏大学硕士学位论文急性心肌梗塞、脑梗塞等血栓栓塞性疾病的致残率和致死率都很高，严重威胁着人类健康及学活性产生明显的影响。综合实验结果和生物信息学预测结果，推测在烟草植物中基丁融合 室的可能原因两个，其一是因密码关键词：瑞替普酶，绿色荧光蛋白，融合表达，烟草 ， 畉 琣 飂瓼 ：珿宁夏大学硕士学位论文芯扛攀觥第参致附个三考谢录人简历英文缩写宁夏大学硕士学位论文溶栓药物的现状，死亡率高达】。近年来，是在大肠杆菌中表达的种非糖基化的组织纤溶酶原激活剂，也是的中间缺失的突变
2、体，它药物旧瞬吩龉业名急性梗塞病人的临床疗效进行了观察与比较，结果证明与宁夏大学硕士学位论文，因此治疗不仅价格昂贵，也会增加纤溶山血全身性的风险。近几年来针对以上的缺点，用生物技术对分子进行结构上的改造，使其变成安全有效的药物。莊缺失变著的提高，给药后起效很快，由不良反应引起的出血风险降低了，是新一代安全的、有效的血图宁夏大学硕士学位论文扣的非常相似，但是当溴化氰被激活裂解血纤维蛋白碎片时，构裂解特异性要低于田自然界中的蛋白质体【蚓，由鯬馗聪谓有蛄泻透灰舾彼峤峁褂 构成。不仅在植物的种子或植物组织中，而且在各种各样的真核细胞中，如丝在植物中获得了高效地表达。耋量尘茎些当茎些耋：”皏 宁夏大学硕
3、士学位论文有效的方法，对末来工业生产的纯化研究提供了一个广阔的前景引。本实验的目的及意义鉴于此，本实验室曾尝试利用烟草花叶病毒泶锛际踉诼躺参镅滩葜斜泶颮。研究结果表明，利用植物作为生物反应器表达激，导致蛋白质错误的折叠，进而被送出，不能形成颗粒。犍。常条件下新合成的多脚蛋自质的加路径；锴秩咎跫滦绿傻亩嘀獾鞍字实募覮路径。鉴于以上分析，本研究拟单独利用融合表达探索在绿色植物烟草中高效地表达宁夏大学硕士学位论文及其在烟草中表达的初步分析对趾屯耆悠淙芩浅弥匾!虼耍壳霸吮泶锾逑挡 皇莚的最佳表达系统。如果能够解决泶锊锏牟晃榷敲凑婧吮泶锾逑凳巧榷的最佳选择。基于以上原因，近几年来研究人员已经使用真核表达
4、的系统中进行的表达，虽然所有的获得的了成功，但这些表达系统仍然存在缺点，因此，探索和研究新型、高效的表达系统是解决该问题的关键。的可行性。材料与试剂验检疫科学研究院动植物检疫研究所张永江博士提供。在温室培养生长，培养条件为宁夏大学颂士学位论文表菌种和质粒宁夏大学硕士学位论文 公司产品微量移液器苏州佳宝净化工程设备有限公司上海琪特分析仪器有限公司上海齐欣科学仪器有限公司产品电热恒温水槽质粒小提恒温培养箱酶切过夜。 宁夏人学硕士学位论文双酶切后产物回收称重，两次称重的差值即为切取目的片段的质量；宁夏大学硕士学位论文液体的培养基中，。喝康谷睦胄墓苤校诒暇仓。，轻轻的悬浮沉淀诒喜僮。连接后的产物，轻轻
5、：，吸取此蘸蟮木海坑诤锌剐 玃产物通过甇琼脂糖凝胶电泳进行检测，选取正确的阳性菌进行保菌，提取质重组质粒的双酶切鉴定酶切过夜；将鉴定的阳性菌提取质粒送公司测定。癵中，宁夏人学硕士学位论文的离心管中，、，使沉淀悬浮，、，使沉淀悬浮，分装感受态细胞，在冰农杆菌感受态细胞的电转化宁夏大学硕士学位论文厦娴娜芤旱沟簦蚶胄墓苤屑尤氲忍寤腗和旌弦混匀。谑椅孪卤芄饩仓訥表达情况在激光共聚焦下进行观察坪玫钠诩夤簿劢瓜晕迪鹿鄄霨的信号，并拍照保存。烟草叶片总蛋白的提取的样品加入液氮充分研磨后，加入说牡鞍字侍崛夯煸龋。仓蟹饨海笤后，可明显的看到胶面与水面的分界线，此时胶已凝，宁夏大学硕士学位论文坪玫慕悍诺降缬静壑校
6、尤氲缂撼逡海J加蒙涎髟诿扛鼋嚎啄诩尤隤滤纸均放在印迹缓冲液中浸泡滤纸的按顺序压紧，放在猂半干转膜仪中，D崾螅玃龇诺郊尤眯髯忧餚怪钡闹胈丁滤纸上，吸去多余的试剂，将膜放在两层保鲜膜中，灰S衅莸牟，固定在暗盒中；縂 镀淖艿鞍住标准宁夏大学硕士学位论文，使劲的拍干；俅渭尤：倍稀释的酶标二抗备趸锩概剂5难蚩剐驣，蛎副臧逯屑尤胂陨海孔，縭按中国药典中的方法进行：以生理氯化钠溶液为溶剂，琼腊凝胶将琼脂糖凝胶熔化，温度降保来渭尤朐戎的纤维蛋白溶酶原溶液和凝血酶皿，将其摇匀后，迅速的倒入水，钠桨宓币跣缘亩哉铡放置反应酶抑制剂氨基己酸悸硭沽晾度旧航腥旧按照宁夏大学硕士学位论文虶基因引物设计表引物及引物序列 。鎏：型：些：农杆菌苗液和阴性对宁夏大学硕十学位论文围煌碓谘滩菀镀系慕又治籌示意图信号；随着时间的递增，荧光信号逐渐变弱；在接种后第而载体脚在接种的白肋烟和本氏烟叶片上，则随着时间的延长。荧光信号越米越强 又趾蟮和 啥庑藕殴浚又植课怀氏忠鄣陌坠。此外，无论是白肋烟还是本氏烟，在从整个观察期内载体 为了验证牾株植物水平的观察结果，剥墩接种后不同时间点的叶片下表皮制片，井在激光接种的白肋烟和本氏烟的叶片砥赴诮又趾蟮技术。 拉涌
