1、巴 马 活 泉 饮 品 有 限 公 司化验室监测检验方法文 件 编 号 ： PK-12生 效 日 期 ： 2011.02.01版 本 号 ： A0文 件 分发 部 门（ ）总经办 （ ）行政部 （ ）营业厅 （ ）销售部 （ ）品控部 （ ）生产部 修 改记 录编 写 核 准日 期 日 期化验室监测检验方法目录1、 有关说明2、 监测取样方法3、 水质监测内控标准4、 感官指标检验方法4.1 色度检测方法：铂钴比色法（参见国标 GB8538-2008 之 4.3）4.2 臭和味（参见国标 GB8538-2008 之 4.4）4.3 肉眼可见物（参见国标 GB8538-2008 之 4.5）4.
2、4 浑浊度（参见国标 GB8538-2008 之 4.6）5、 理化指标检验方法5.1.PH 值检测方法：电位计法5.2 电导率检测方法：电位计法5.3 臭氧检测方法：色阶比色法5.4 消毒剂有效氯检测方法：碘量法5.5 净容量检测方法5.6 余氯含量检测方法：目视比色法6、 卫生指标检验方法6.1 细菌总数检测方法（参见国标 GB4789.2-2010）6.2 大肠菌群检测方法：多管发酵法（参见国标 GB8538-2008）6.3 霉菌检测方法7、瓶盖及空瓶检测方法 公司内控标准1、关于化验室监测检验方法的有关说明1.适用范围：本方法适用于本厂工艺过程、成品水的检测及原材料卫生指标检测。本法
3、参考标准 为 GB8538-2008；2.容器的洗涤2.1.新启用的硬质玻璃瓶、比色管等应先用（1+1）硝酸溶液浸泡一昼夜，然后用一般洗涤法洗涤。2.2.玻璃器皿的洗涤：玻璃器皿用前须彻底洗净。一般洗涤方法，先用自来水冲洗残留物，再用洗涤剂洗涤，然后用自来水彻底冲洗，最后用纯水冲洗三次，晾干备用。3.准确称量：指称重准确至 0.0001 克。4.吸取：指用分度吸管或吸管。5.量取：指用量筒。6.定容：指在容量瓶中用纯水或其它溶剂稀释至刻度。7.试剂及浓度表示7.1.本方法所用试剂均指分析纯（A.R） 。有需要其他规格试剂，另做明确规定。7.2.本方法中一些试剂浓度用摩尔/升以 mol/L 表示
4、，必须注明其基本单元。8.本方法配制试剂和稀释用水均指纯水。9.配制好的试剂，容器上必须贴上标签，标签上需注明试剂名称、浓度、配制日期。10.标准曲线制作及试剂配制有关规定：内容 使用周期 责任人 备注PH标准缓冲液 一个月 化检员PH 电极电解液 六个月 化检员更换硅胶（分析天平，干燥器）至颜色全部变红时进行更换 化检员微检用品 随时 使用者臭氧标准色列 三个月 化检员 备标准储备液11、检测废液处理：11.1.理化检测废液应做中和处理后指定地方排放，废试剂空瓶及作废化学试剂等应收集公司专门处理。11.2.微生物培养废物与生活垃圾一起处理。需直接向水体排放含菌培养废液时，应先灭菌后排放。2、
5、监测取样方法1、理化取样方法：将取样口打开排放 1-2 分钟，采样前要用所取水样冲洗采样瓶及瓶盖至少三次，取样时应缓缓使水流入采样瓶中。采样时瓶口要留有 1%-2%的空间。采好后立即盖好瓶盖。2、微生物取样方法：2.1、瓶盖：取 250mL 广口瓶用牛皮纸扎好瓶口，于高压灭菌锅中灭菌，待瓶子冷却后，用无菌镊子迅速夹取 5 个瓶盖放入瓶子中，盖好并用牛皮纸扎好。 2.2、 空瓶：将所取瓶迅速用无菌盖子密封好。3、无菌室操作人员手：于 250mL 广口瓶中加入 50mL 生理盐水，加入一根棉签或一小团棉花，盖好盖子，于高压灭菌锅中灭菌，待瓶子冷却后，打开瓶子取出棉签或用无菌镊子夹出棉团于操作人员手
6、部擦拭，再放回瓶中盖好盖即可，做细菌总数及大肠菌群。4、 成品水：取样：每天开机取 2 支,其余时段每 1 小时取 1 支；留样:每天开机时段、结束时段各留 2 支水样；其余时段每 1 小时取 1 支；每个生产批次要有 6 支水样留样;如生产时间不足,则尽量均匀间隔时间段留足 6 支；微生物样品测试时间段：每 1 小时检测 1 支；理化测试样品: 每 1 小时检测 1 支；肉眼可见物检验：每小时 1 支水样目测；3、监测内控标准分 类 检 测 项 目 单 位 内 控 参 考 标 准 检测周期水源 DB45/T118 瓶装饮用天然泉水标准 外送检细菌总数（0.2 后） cfu/mL 0霉菌计数（
7、0.2 后） 个/mL 0工艺过程污染指标 大肠菌群（0.2 后）MPN/100mL 0每周一次细菌 cfu/mL 3霉菌 个/mL 0环境操作工手部（细菌/大肠菌群） 细菌总数50cuf/皿，大肠菌群不得检出2 周一次无菌室泡脚池消毒水浓度 mg/L 120-180 mg/L每 2 周随机抽检一次臭和味 无异臭、异味浑浊度 5色度 15，并不得呈现其他异色肉眼可见物 允许有少量天然矿物盐沉淀，但不得有其它异物感官指标净含量 mL 产品规格容量每批一次pH 值 以产地水源特征为依据理化指标 电导率 S/cm 以产地水源特征为依据每批一次细菌总数 cfu/mL 50霉菌计数 个/mL 不得检出成
8、品污染指标大肠菌群 MPN/100mL 3每批一次5、理化指标检测方法5.1.pH 值检测方法：电位计法5.1.1 方法提要PH-3C 型 PH 计以玻璃电极为指示电极，饱和甘汞电极为参比电极，插入溶液中形成原电池，在 25时，每单位 pH 相当于 59.1mV 电动势变化值，温度差异在仪器上有补偿装置。5.1.2 试剂及配置(1) pH4.00 标准缓冲液。配制方法参见商品说明。用无 CO2水配制（将纯水煮沸使水量蒸发 10%以上，加盖放冷即得） ，并贮存于塑料瓶中。(2) pH6.86 标准缓冲液。同上。5.1.3 测定步骤（1） 校准仪器a 打开 pH 计电源，设备默认在测量状态，按“、
9、”键，此时“”会闪耀，把“温度”档调至室内相等温度，按“ENTER” ，仪器内的“”停止闪耀，仪器回到测量状态；b 按“CAL”键，仪器“定位”符号闪现，进入第一点标定；c 用纯水淋洗电极三次以上，用滤纸吸干电极上的水，将电极浸入 pH4.00 标准缓冲溶液，待pH 稳定读数为“4.00”后（如未达到标定值，则按“、”键进行调整到此值） ，按“ENTER”键，仪器“斜率”符号闪耀，再按“ENTER” 键，仪器“斜率”符号消隐，进入第二点标定；d 第二点标定取 pH6.86 标准缓冲溶液进行标定，方法重复第一点标定，标定完取下电极用纯水淋洗电极三次，用滤纸吸干电极上水待用；（2） 水样的测定a.
10、 将待测水样倒入小烧杯，将电极浸水样浸洗，取出电极倒掉水样，反复浸洗三次。b. 将电极浸入盛有待测水样的小烧杯中，待屏幕显示的数字稳定后即为水样的 pH 值。c. 用纯水淋洗电极三次并吸干，关掉仪器，将电极浸泡于浸泡液中。5.1.4 注意事项（1） 标准缓冲液最长保存期限为 1 个月。（2） 标定和测量过程中应用磁力搅拌器或者轻晃测试杯对样品进行搅拌。（3） 浸泡液配置方法：250mL pH6.86 标准缓冲液加 1.25 克氯化钾（KCl） 。（4） pH 电极电解液为饱和 AgCl 的 4M KCl，使用期半年，每次更换均应用新配置的电解液浸泡24 小时；。（5） 电极头接触污物后，可用医
11、用棉花轻擦试，或者用 0.1 摩尔每升的稀盐酸清洗;5.2.电导率检验方法5.2.1 方法提要本方法采用相敏检波技术和电导率温度补偿技术，利用数字 DDS-11A 电导率仪进行水质电导率测量。5.2.2 测定步骤（1） 接通电源，仪器预热 15min 以上。（2） 根据产品公司产品特性，将“量程转换开关”置于“20Scm -1”；（3） 将仪器的选择开关调至“CAL”档， “常数”调至电极棒上标注的电极常数，直至仪器显示该电极常数值；例如电极常数为 1.028，则仪器显示调至 1028；（4） 将电极用待测水样淋洗三次以上，然后浸入待测水样中，将选择开关旋至“meas”档，测量数据稳定后，仪器
12、读数即为水样电导率（S/cm） 。（5） 关掉仪器，电极用纯水淋洗三以上，浸入纯水中保存。5.3 臭氧O 3浓度测定(色阶法):5.3.1 试剂的配制5.3.1.1 MnSO4 溶液：称取 3.1g MnSO4 加水定容至 1000mL。5.3.1.2 邻联甲苯胺：称取 5g 邻联甲苯胺，将其研磨成细粉后，加入少量 20% HCl 溶解，装入棕 色试剂瓶，再加入 2500mL 20% HCl 和 2500mL H2O，总共为 5000mL。5.3.1.3 K2CrO7-K2CrO4 贮备液。5.3.1.4 0.5N 磷酸盐缓冲液：称取磷酸氢二钠 22.86g、磷酸二氢钾 46.14g，混合后，
13、用去离子水 定容至 1000mL。5.3.1.5 0.1N 磷酸盐使用液：将 0.5N 磷酸盐缓冲液稀释 5 倍。5.3.1.6 浓 K2CrO7-K2CrO4 贮备液：称取 1.55g 重铬酸钾和 4.65g 铬酸钾，混合后，用 0.1N 磷酸盐使用液定容至 1000mL。5.3.1.7 K2CrO7-K2CrO4 使用液：将 K2CrO7-K2CrO4 贮备液 5 倍稀释。5.3.2 标准系列的配制O3 （mg/L）：0.1， 0.2， 0.3， 0.4， 0.5， 0.6， 0.7， 0.8， 0.9；吸使用液 （mg/L）：3.6，7.2，10.8，14.4，18.0，21.6，25.
14、2，28.8，32.4；再加缓冲使用液至 50 mL。5.3.3 O3 的测定50 mL 比色管取约 46mL 多 O3 水样，加入 1.5 mL MnSO4 溶液摇匀，再加入 2.5 mL 邻联甲苯胺，显色后目视比色。5.4 消毒剂有效氯含量的测定：碘量法5.4.1 方法提要测定消毒剂有效氯的含量，在酸性条件下与过量碘化钾作用析出游离碘，以淀粉作指示剂，用硫代硫酸钠滴定析出碘，可计算有效氯的含量(泡脚池消毒水测试)。5.4.2 试剂及配制（1） 10%碘化钾溶液：称取 100 克 KI，用蒸馏水溶解并稀释至 1000mL，贮于棕色试剂瓶。（2） 6mol/L(HCl)溶液：量取 500mL
15、浓盐酸，倒入盛有 500mL 蒸馏水的烧杯中，搅匀，贮于1000mL 试剂瓶中。（3） 0.5%淀粉指示剂： 称取 0.5g 可溶性淀粉，加少许纯水调成糊状，用煮沸的纯水冲稀至100mL，冷却后加入 0.1g 水杨酸或 0.4g 氯化锌防腐，贮于 100mL 棕色滴瓶。（4） （1+5）硫酸溶液：量取 40mL 浓 H2SO4于烧杯中，缓慢加入 200mL 纯水，不断搅拌，冷却后贮于 250mL 试剂瓶中。（5） 0.1mol/L（1/6K 2CrO7）重铬酸钾标准溶液：准确称量于 105-110烘干 2 小时并冷却的重铬酸钾 1.2258g 溶于水，移入 250mL 容量瓶中，用水稀释至标线
16、，摇匀。（6） 硫代硫酸钠溶液：称取 12.41Na2S2O35H2O 溶于煮沸放冷的水中，加入 0.1g Na2CO3，定容至 500mL。贮于棕色试剂瓶中待标定（若发现溶液浑浊需重新配制） 。每月标定一次。5.4.3 硫代酸钠溶液的标定方法于 250mL 碘量瓶中加入 100mL 蒸馏水和 2 克碘化钾，吸入 10.00mL 0.1mol/L 重铬酸钾标准溶液，5mL（1+5）硫酸溶液，密塞，摇匀。于暗处静置分钟后，加 100mL 水稀释，用待标定的硫代硫酸钠标准溶液滴定至溶液呈浅黄绿色，加入 2mL0.5%淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好消失呈亮蓝绿色，记录硫代硫酸钠溶液的用量。5.4.4
17、计算：Na 2S2O3(mol/L) = 10.000.10/V式中：0.10重铬酸钾标准溶液浓度 mol/L（1/6K 2Cr2O7）10.00吸取重铬酸钾标准溶液体积 mLV消耗的硫代硫酸钠标准溶液体积 mL5.4.5 样品测定（1） 根据消毒剂有效氯含量将消毒剂配成约 200ppm 的溶液，量取 50mL 消毒剂溶液于具塞三角瓶中，加入 10mL 10% KI，3mL 6 mol/L HCl，加盖摇匀于暗处放置 5 分钟。（2） 用已标定的硫代硫酸钠标准溶液滴定至溶液呈浅黄色，加入 2mL 0.5%淀粉指示剂，继续滴定至蓝色刚好消失，记录消耗的硫代硫酸钠标准溶液体积。5.4.6 计算：C
18、 （cl） = NV 硫代硫酸钠 35500/V 水式中： C （cl） 有效氯含量 mg/LN硫代硫酸钠标准溶液浓度 mol/LV 硫代硫酸钠 消耗的硫代硫酸钠标液体积 mLV 水 水样体积 mL5.5 成品水净容量检测方法5.5.1 瓶装成品水每条生产线质检员根据品控部提供的容量标准液位样进行目测检验，样品由品控部用经计量器具制作。5.5.2 瓶装水每天每线抽一支做成品水净容量监测，结果记录在成品水净容量检测记录上。6、微生物指标检验方法6.1 细菌总数检验方法6.1.1 方法提要每种细菌都有它一定的生理特性，在不同的营养条件及其它外界条件（如：温度、PH、给氧及培养时间等）下才能培养出各
19、种细菌。但在实际工作中，一般只采用一种常规方法来检测细菌，即在营养琼脂培养基中，于 37经 48 小时培养后所生长的菌落总数，我们称之为细菌总数。6.1.2 准备工作 培养基制备：按使用说明要求称一定量的营养琼脂培养基置于 500mL 三角瓶中，用棉塞及牛皮纸封口。 器皿准备：将 1 mL 吸管、9cm 培养皿等按无菌要求进行包扎。 灭 菌：将培养基及器皿放入高压灭菌锅内，在 121条件下灭菌 20 分钟或按相应培养基标签规定进行灭菌。待冷却后将培养基放入 4冰箱备用，将器皿放入烘箱烘干备用。6.1.3 操作步骤 采用无菌接种方法，于 9cm 无菌培养皿中用 1mL 无菌吸管吸取 1mL 充分
20、摇匀的水样，在培养皿上做上记号。 将培养基加热融化冷却至 40-50左右，采用无菌操作方法注入已接种 1mL 测试水样的培养皿中，每皿约 10mL 左右，迅速旋摇培养皿使水样与培养基充分混匀。每批次做一个空白无菌培养皿. 待培养基凝固后，皿底朝上置于 361的生化培养箱中培养。6.1.4 菌落计数及报告方式培养皿培养 48 小时后取出肉眼或借助菌落计数器计数，每皿中的菌落数即为该样品 1mL 水样的细菌总数，以 CFU/mL 表示。6.1.5 注意事项 培养基在规定的条件下最长只能保存一周。 成品水样在 8 小时后才能接种，如急需则另采用“快速检测法” 。 培养基分装到培养皿中时切忌温度过高，
21、以免杀死水样中的细菌。6.2 大肠菌群检测方法：多管发酵法6.2.1 方法提要根据大肠菌群细菌（如革兰氏阴性无芽胞杆菌）具有的生物特性，在 37培养 24 小时能发酵并产气的特点，经培养后根据阳性反应结果，可测出大肠菌群的 MPN 值。6.2.2 准备工作（1） 培养基配制：将乳糖胆盐培养基置于 500mL 三角瓶中，按使用说明配制（双料） ，混匀。按每管 10mL 分装试管（每支试管中倒置一支小倒管）并加塞。（2） 器皿准备：将 10mL 吸管按无菌要求进行包扎。（3） 灭 菌：将上述试管及器皿置高压灭菌锅内，在 115条件下灭菌 20 分钟或按相应培养基标签规定进行灭菌，冷却后将试管放入
22、4冰箱备用。器皿放入烘箱烘干备用。6.2.3 操作步骤（推测性检验）（1） 采用无菌操作方法吸取 10mL 水样，接种到盛有 10mL 双料乳糖胆盐发酵培养液的试管中，共接种 5 份。（2） 将上述试管置 361培养箱中培养 24 小时，观察每支管产气情况，如有气体产生，则认为推测性检验阳性，如不产气则为大肠菌群阴性。（3） 报告方式检验阳性以“+”报告结果，阴性则以“”报告结果。（4） 说明：推测性检验只是定性检测水样中是否有大肠杆菌，参照我厂大肠杆菌为零的内控标准，推测性检验即可,结果以 MPN/100mL 表示。6.3 霉菌检验方法6.3.1 方法提要每种霉菌都有它一定的生理特性，在不同
23、的营养条件及其它条件（如：温度、PH、给氧及培养时间等）下，才能培养出各种霉菌。但在实际工作中，一般都只能采取一种常规方法来检测，培养出来的霉菌我们称之为霉菌总数。6.3.2 准备工作 培养基配制：将虎红琼脂培养基置于 500mL 三角瓶中，按使用说明进行配制，用棉塞及牛皮纸封口。 器皿准备：将 1mL 吸管、9cm 培养皿等按无菌要求进行包扎。 灭 菌：将培养基及器皿放入高压灭菌锅内，在 121条件下灭菌 20 分钟或按相应培养基标签规定进行灭菌，冷却后将培养基放入 4冰箱备用。器皿放入烘箱烘干备用。6.3.3 操作步骤 采用无菌接种方法，吸取 1mL 充分搅匀的水样于 9cm 无菌培养皿并
24、在培养皿上编号。 将培养基加热融化，冷却至 4050左右，采用无菌操作方法分别注入已接种的培养皿和一个空白培养皿中，每皿约 10mL，迅速旋摇培养皿使水样与培养基充分混匀。 待培养基凝固后，皿底朝上置于 271生化培养箱中培养。6.3.4 菌落计数及报告方式培养皿培养 72 小时后取出肉眼或借助菌落计数器计数，每皿中的菌落数即为 1mL 水样中的霉菌总数。以个/mL 表示。6.3.5 注意事项 培养基在规定条件下只能保存一周。 成品水样在生产 8 小时后才能接种，如急需则采用“快速检测法” 。 培养基分装到培养皿中时切忌高温，以免杀死水样中的霉菌。7、瓶盖及空瓶检测方法7.1 取样：1、瓶盖取
25、样用无菌镊子取 5 个瓶盖放入无菌瓶中并注明批号或生产日期2、空瓶取样用无菌盖将所取空瓶盖紧并注明取样点及冲洗情况7.2、检测方法1、方法提要本法用于检测样品中含有细/霉菌数量（适合本公司要求） 。2、准备工作、培养基配制：根据培养基说明书要求配制培养基。、灭 菌：将已配好的培养基放入高压灭菌锅内，在 121条件下灭菌 20 分钟或按相应培养基标签规定进行灭菌，冷却后将培养基放入 4冰箱备用。7.3 操作步骤、在瓶盖或空瓶中加入 50mL 无菌水，摇动使之充分混和后进行检测；、无菌方法各取 1mL 做细菌总数/霉菌测试 （需做大肠杆菌时需单独 10 mL 取样按前述大肠菌群检测方法做）;、霉菌 27培养 72 小时后肉眼观察培养基计数，报告结果。、细菌 37培养 48 小时后肉眼观察培养基计数, 报告结果。
