1、霍 乱 弧 菌!“#蛋 白 运 输 系 统 基 因 簇 的 确 定与 功 能 阻 断 分 析张 丽 娟!， 高 守 一!， 景 怀 琦!， 阚 飙!，!， 祁 国 明!， 刘 延 清!， 吴 龙 飞“， 徐 建 国!（ !# 中 国 疾 病 控 制 和 预 防 中 心 传 染 病 预 防 控 制 研 究 所 卫 生 部 医 学 分 子 细 菌 学 重 点 实 验 室 ， 北 京 !$“$%；“# 法 国 科 学 研 究 院 细 菌 生 化 研 究 室 ， 马 赛 ! ,87 生 物 型 菌 株 、 ?、 同 源 蛋 白 进 行 了 氨 基 酸 和 基 因 序 列 的 同 源 比 较 ， 对 大
2、 肠 杆 菌 !“!#、 !“!$、 !“!% 具有 同 源 性 的 基 因 采 用 自 杀 质 粒 同 源 重 组 原 理 缺 失 了 这 + 个 连 续 排 列 基 因 的 大 部 分 开 放 阅 读 框 架 序 列 ， 从 而 进 行 了 蛋白 分 泌 阻 断 的 初 步 研 究 与 分 析 。 结 果 表 明 ， 该 推 测 基 因 簇 缺 失 后 ， ,-. 分 泌 阻 断 ； 生 长 特 性 易 发 生 粗 糙 型 改 变 ， 由 光 滑型 菌 落 或 菌 苔 转 化 为 粗 造 型 ， 且 霍 乱 弧 菌 粗 糙 型 抗 血 清 凝 集 实 验 阳 性 ； 钼 酶 （ 三 甲 胺
3、 氮 氧 还 原 酶 ） 分 泌 完 全 阻 断 ；!2半 乳 糖 、 天 门 冬 酰 氨 、 甘 氨 酰 2A2天 门 冬 酸 及 2A2!2磷 酸 甘 油 等 * 项 生 化 反 应 由 阳 性 转 为 阴 性 。 此 研 究 在 霍 乱 弧 菌 中确 认 了 .-. 基 因 簇 ， 并 鉴 定 了 功 能 ， 为 进 一 步 探 索 ,-. 分 泌 对 霍 乱 弧 菌 蛋 白 因 子 分 泌 的 影 响 奠 定 了 遗 传 学 基 础 。关 键 词 ： 霍 乱 弧 菌 ； ,-. 蛋 白 运 输 ； 分 泌 阻 断中 图 分 类 号 ： B)+ 文 献 标 识 码 ： = 文 章 编 号
4、 ： $+C)D *!C“（ “$“） !$D $)+%D $E$%“#)*%FG=0-8!， !， BN HJ82P014!，AN;57+3“/4( (7!+,7， %+7“ %(7!(* 0,* (7!+,7 “72 %,7!*,4， = ? $, E， %“76)+76 $(+A+76 !$“$%， %+7“； “# %(7!(* B“!+,7“4*02(： H+/*+, 3,4(*“(； ,-.2V5X51V51. X38.501 5YX83. 6T6.5U收 稿 日 期 ： “$“ D $+ D !*； 修 订 日 期 ： “$“ D $% D !“基 金 项 目 ： 中 法 先 进
5、 计 划 研 究 项 目 （ (= )2$+） 、 国 家 科 技 部 “ )C+” 项 目 （ )2$+） -1V“ )C+” -609 (565-39L（ #?教授惠赠。 #? 教授惠赠。!“# 实验用 $% 的 ( 片段。采用 )#*1!及+,-!双酶切 ( 片段及 的 ; 片段，采用 ./%!及 0!$!双酶切 ; 片段及克隆子 ! 构建的质粒，而后连接。以 BC!D: 为受体菌克隆，获得克隆子 -。以 处所固有的1,3!酶切位点进行酶切，获得“同源 (0氯霉素 0同源 ;”片段，与此同时利用自杀质粒 ?8 缺失子示意图AB/) 2 /C- DE =?8 FG.G?BDH -H?H?I
6、 DE ?H?F?D = !“!#$% 9:A:EE 分泌系统有着明显差别。前者运输底物为含有特征性双精氨酸结构域（ OPJM#M#MQM5MNMR）信号肽的完全折叠蛋白质（其中双精氨酸结构域中的两个相连的精氨酸在进化中相当保守）。而后者运输底物是以线性延伸构型被运输的。无论是经典 D: 分泌系统还是 J?， 而 在 同 一时 间 内 ， 大 肠 杆 菌 9:; 途 径 运 输 “- - 个 氨 基 酸 8。尽 管 如 此 ， 由 于 原 核 细 菌 普 遍 存 在 固 有 %G:?B BL ;BL&;BG6;BE:G?;E?BI? DGO:M ? %ETIGBC?BIBHJ EBIBHJ， 8-，8： “/$ N “.$2（ 责 任 编 辑 ： 周 素 ）-3$ 遗 传 学 报 8$ 卷
