1、第十一届(2014年)学术研讨会注射用甲磺酸萘莫司他热原检查方法学研究祝清芬a，魏霞，张娟(山东省食品药品检验研究院，济南250101)摘要：目的对注射用甲磺酸萘莫司他进行热原检查法方法学研究，建立本品热原检查法质量标准。方法根据本品临床用量确定本品热原检查剂量；观察静脉注射本品对正常家兔体温的影响；采用内毒素造成家兔发热模型，观察药物对家兔热原反应的影响。结果注射用甲磺酸萘莫司他对正常家兔体温无明显影响，对静脉注射细菌内毒素引起的家兔热原反应无明显影响。结论本品适应于热原检查法，并建立了本品热原检查法标准。关键词：注射削甲磺酸萘莫司他；质量标准：热原检查Establishment of th
2、e Cdteria for毋，咿拧Z包甜ofN幽岫。醴砒Mesilate for lnjectionAbsIract： Obj伏tive：To eS油liSh the Pygen TeSt cri橱ia of Nafl锄ostal Mesi|ate for Injection值ods：the dosage for Pyrogen Test ofNa胁oStat Mes订ate for l啦ection w签d面ned on the basis of jtSclinical doseThe influence 0n the rabbit body tempe豫tu陀of the dn撂by in
3、臼训enous i啊ection waSstlIdi暑dThen we studied the infIuence of the drug on the riSe in body temperature caused by bacteriaIendotoxinR鹤uIts：the drug neither influence the body tempe魁ture of nomlaI rabbits nor influence thetanpe枷re rise cauSed by endotI。Xin obviouslyCoclusio：This p刚uct is suitable for P
4、yreogen Testand像e句厅o尹疗殛，Ctea for this product was eStablished1皿Y WORDS：Na蟊硼ostat M鼯iIate for lnjcction；q嘲il)r咖nda一；PylIogen TeSt甲磺酸萘莫司他(na蠡瑚ostatmesilaIe)为非肽类蛋白酶抑制剂，化学名为4(氨基亚氨基甲基)氨基】苯甲酸6-(氨基亚氨基甲基心萘醋二甲磺酸盐，由日本鸟居药品株式会社首先开发，上市厂商为鸟居药品株式会社及万有制药株式会社，于1986年10月在日本上市，临床用于治疗急性胰腺炎、慢性胰腺炎急性恶化，胰管造等胰腺炎症以及弥散性血管内凝血(D
5、IC)等【110目前我国尚未批准上市。本研究对注射用甲磺酸萘莫司他进行热原检查法方法学研究，建立本品热原检查法质量标准。材料1动物家兔，新西兰品系，体重173Okg，雌雄兼用，由山东鲁抗医药股份有限公司质监中心实验动物室提供，许可证号：SC(鲁)2013 000l。饲养于普通级实验动物室，实验动物使用许可证号：SCXK(鲁)2013 0012。l作者简介】：祝清芬，药理学博士，副主任药师，研究方向：药检药理及食品药品安全性评价，Tel：1 39691 2801 8，E-mail：zhuqingf电n731 63com205第十一屑(2014年)学术研讨会2仪器与试剂注射用甲磺酸萘莫司他，规格：
6、50mg，批号：120421(用于方法学研究)、201208叭、20120802、20120901，北京阜康仁生物科技有限公司；细菌内毒素国家标准品，批号：150600200707，规格：10000EU支，中国药品生物制品检定研究院；WRY2000型微机热原测温仪，上海达亿公司。试验用相关器具及与供试品溶液接触的器皿，均为无热原或采用250加热30分钟以上去除热原。方法与结果1热原检查法限值的计算按照化学药品注射剂安全性检查法应用指导原则的要求【2，热原检查限值可参照临床剂量计算，一般为人用每千克体重每小时最大供试品剂量的25倍，供试品注射体积每千克体重一般不少于05ml，不超过10ml。本品
7、热原检查剂量设为家兔每埏体重注射2n鸣，相当于成人一次用量的10倍。2方法学验证【34】本试验选用家兔的要求和测温方法均参照中国药典2010年版热原检查法的规定。取健康新西兰家兔，按热原检查法进行挑选，取符合规定的家兔用于实验。家兔固定在固定箱内至少1h后，每隔30min测肛温1次，2次测温体温之差不得超过02，以此两次测温的平均值(均温)作为该兔的正常体温(0时体温)。取正常体温在380396的家兔20只，按均温随机区组法分成4组，空白对照组、供试品对照组、模型对照组、模型+供试品组，每组5只。在测定其正常体温15分钟以内，空白对照组耳缘静脉注射给予灭菌注射用水，供试品对照组给予2m鲋叫供试
8、品溶液，模型对照组给予10EUlIll内毒素溶液，模型+供试品组给予含10董胁ml内毒素的供试品溶液，注射剂量均为1m。注射后每隔30nlin漶量肛温一次，共记录6次。比较6次所测体温与正常体温的差值，以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔的最大升温值。比较各组家兔的体温变化及最大升温值，模型对照组和供试品对照组与空白对照组比较，模型+供试品组与模型对照组比较。结果表1表明，模型对照组家兔耳缘静脉注射细菌内毒素可以引起稳定的发热反应，每只家兔最大升温均超过06。与空白对照组比较，15h及以后各时间点以及升温值均有显著差异，说明模型成立。供试品组家兔在观察过程中未见明显升温或降温现象，与空
9、白对照组无显著差别，模型十供试品组家兔耳缘静脉注射细菌内毒素也可引起稳定的发热反应，每只家兔最大升温均超过06，与模型对照组无显著性差别。说明本品静脉注射2mgl【g对热原检查法无影响作用，本品可以采用热原检查法。3供试品热原检查206第十一届(2014年)学术研讨会按照拟定的质量标准对4批供试品进行热原检查，结果均符合规定。4统计学处理试验数据采用均数士标准差表示，采用单因素方差分析进行组问比较。表l各组家兔各时间点体温变化及升温值(，x士s，n=5)升温空白对388士037 387士044 387048 387士052 386士O42 387士o47 386士O50 O02士O04照组供试
10、品390士044 39O士041 39Q036 389士041 388士O34 38。8士026 38蛀0。36 O。08士O18对照组模型对387士0-37 387士038 391士O36 394士O4039s士O4239铀O35394士049量O94士029照组模型+供试品387士054 391士o28 393026394士O30395士o38393o42叠393土o59100士O32。击组与空白对照组比较+Po05，十4P901讨论致热物质检查是控制注射剂安全性的重要检查项目。常用的检查法有家兔热原检查法和细菌内毒素检查法。近年来，虽然越来越多的注射剂采用了细菌内毒素检查法，但由于热原法
11、可以反应动物复杂的升温过程，同时对于一些不能采用细菌内毒素检查法的品种，如中药注射剂、对内毒素检查有严重干扰作用的供试品，热原检查法仍具有不可替代的作用。按照中国药典20lO年版二部附录XM化学药品注射剂安全性检查法应用指导原则的要求，热原检查应做适用性研究，求得对家兔无毒性反应、不影响正常体温和无解热作用的剂量。但由于缺乏具体的实验方法，目前此方面的研究工作也少见报道。本文对注射用甲磺酸萘莫司他进行了热原检查法适用性研究，并建立了本品热原检查法质量标准。本品热原检查采用2mg触的溶液，按家兔体重每l埏注射lml，相当于临床每小时最大用量的10倍。静脉注射本品后未见对家兔明显毒性作用，对家兔正
12、常体温无明显升高或降低作用。为了考察药物对家兔热原反应的影响，我们采用了内毒素作为致热原来制各家兔发热模型。发热是内毒素的最主要生物活性之一嘲，而内毒素又是人类最-207第十一届(2014年)学术研讨会为常见的一种致热原。一般认为，在符合GMP的生产条件下，药物中的热原就是细菌内毒素。实验中采用了细菌内毒素国家标准品制作发热模型，由试验结果可知，用细菌内毒素制备的该模型是稳定且高温持续时间长，其发热高峰一般在注射内毒素后12h，与文献报道一致【67】。结果表明，家兔耳缘静脉注射细菌内毒素可以引起稳定的发热反应：药物对细菌内毒素所致家兔发热反应也无明显影响，说明本品适合热原检查法。按拟定的质量标
13、准对2种规格共8批供试品进行热原检查，检查结果均符合规定。采用上述模型对热原方法进行验证，基本采用了热原检查法的实验技术，技术成熟，方法可行，可操作性强。缺点是注射内毒素的家兔只能使用一次，成本较高，因此在方法学研究中要正确设计剂量和分组，减少实验动物使用。本品热原检查质量标准：【检查】热原取本品，加灭菌注射用水制成每lml中含甲磺酸萘莫司他2mg的溶液，依法检查(中国药典2010年版二部附录D)，剂量按家兔体重每1蚝注射1ml，应符合规定。参考文献：【l】陆美贞胰腺炎药甲磺酸萘莫司他四国外医药合成药，生化药，制剂分册，1988，9(4)：234-235【2】国家药典委员会中华人民共和国药典中
14、国药典【S2010年版二部北京：中国医药科技出版社，20lO：附录213阿国家药典委员会中华人民共和国药典中国药典【S】2010年版二部北京：中国医药科技出版社，2010：附录99【4】中国药品生物制品检定研究院中国药品检验标准操作规范嗍20lO年版北京：中国医药科技出版社，2010：306309【5】郭萌，李冠民，黄清泉细菌内毒素研究进展【J】中国实验动物学报，2009，17(5)：397401【6】沈娟，武向锋，王文俊，等家兔细菌内毒素致热的灵敏度变化研究叨解放军药学学报，2009，25(5)：441443【7】祝清芬，侯传香，国明双金颗粒主要药效学试验【J】中国医院药学杂志，2007，27(10)： 14691470注射用甲磺酸萘莫司他热原检查方法学研究作者： 祝清芬， 魏霞， 张娟作者单位： 山东省食品药品检验研究院,济南250101引用本文格式：祝清芬.魏霞.张娟 注射用甲磺酸萘莫司他热原检查方法学研究会议论文 2014
