1、第十次全国中西医结合血瘀证及活血1匕蝣研究学术大会益气活血解毒方对球囊损伤颈动脉后大鼠血清炎症因子及TGFp的影响常宏1赵明镜1雷环1赵一舟1吕唏滢1赵保胜21北京中医药大学东直门医院国家教育部重点实验室(北京，100700)2北京中医药大学(北京，100029)摘要目的：观察益气活血解毒方对球囊损伤颈动脉7天后大鼠血清中炎症因子瓶P一1、CRP及TGFB的影响。方法：雄性sD大鼠随机分为假手术组、模型组、他汀组和益气活血解毒组，每组6只。模型组与给药组动物行左颈总动脉内膜球囊拉伤术，假手术组只分离左侧颈外、颈内和颈总动脉，不做球囊拉伤。假手术组和模型组动物术后灌服生理盐水，给药组动物术后分别
2、灌服阿托伐他汀和益气活血解毒方，7天后腹主动脉取血，采用放免法检测血清中单核细胞趋化因子一1(MCP一1)、C反应蛋白(CRP)、转化生长因子一B(TGFB)的浓度。结果：与假手术组相比，模型组血清中MCP一1、CRP、TG卜B含量显著升高(卢0006，卢O000，仁0000)；与模型组相比，益气活血解毒组能显著降低血清中CRP、TGFB的含量(卢0002，户0001)，阿托伐他汀组显著降低血清中TGFB的含量(p0038)，有降低CRP的趋势，但无统计学差异(户0。067)。结论：大鼠颈动脉损伤后，血清中MCPl、CRP、TGFB的含量显著上升，益气活血解毒方能显著降低血清中cRP、TGFB
3、的含量，为防治血管重构性疾病提供实验依据。血管重构性疾病如PCI后再狭窄、动脉粥样硬化、高血压、糖尿病血管病变等严重威胁人类健康，是危害人类健康的第4大杀手。尽管这些疾病的病因各有不同，但它们均会引起血管形状和结构发生改变，血管内中外膜细胞生物学和功能的变化。非特异性炎症参与了血管重构的早期反应，研究表明，动脉粥样硬化和高血压等疾病中，炎症反应发挥了重要作用，MCPl、CRP等炎症因子及TGFB在血管重构性疾病的发生发展过程中的作用不容忽视。本研究用球囊拉伤大鼠颈总动脉内膜，造成血管内皮损伤，观察造模7天后血清中MCP一1、CRP、TGFB含量的变化，并用他汀类药物和益气活血解毒方进行干预，观
4、察药物的非特异性抗炎作用。1材料与方法11实验材料111动物雄性SD大鼠24只，体重380420克，SPF级，购于北京维通利华实验动物技术有限公司SCXK(京)2012 0001，饲养于北京中医药大学SPF级动物房，随机分为假手术组，模型组，他汀组和益气活血解毒组。每组6只大鼠。221第十次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究掌术大会112药物阿托伐他汀钙片(立普妥)：辉瑞制药有限公司生产，20mg片，批准文号：国药准字J20070061；益气活血解毒方(水煮)：药物浓度为129生药ml；戊巴比妥钠：北京化学试剂公司，进口分装，批号：020919；低分子肝素钠(吉派林)：杭州九源基因工程有限公司
5、，03ml瓶，批准文号：国药准字H19990035；青霉素钠：华北制药股份有限公司，80万u瓶，批号：D0801320。113主要实验试剂及仪器McPl、cRP、TGFB放免试剂盒由北京华英生物技术研究所生产；y一911全自动放免计数仪，由中国科技大学实业总公司生产；球囊导管及压力泵：美国Medtronic公司，规格：2mm1 5mm。12实验方法121动物造模方法大鼠于造模前一小时背部皮下深部注射吉派林，剂量500 ukg，一小时后戊巴比妥钠40mgkg体重腹腔注射麻醉，颈部备皮，局部消毒，分离左侧颈外、颈内、颈总动脉，暂时阻断颈内动脉，从左侧颈外动脉插入球囊导管，至颈总动脉近心端，导管插入
6、约4cm，以生理盐水充盈球囊(压力05 atm07 atm)，缓慢向远心端回拉，球囊至颈总动脉分叉处，球囊泄压至0 atm，重新插入球囊导管到相同的部位，如此反复操作3次。结扎左颈外动脉，开通颈内动脉和颈总动脉血流，缝合伤口。术后每只大鼠腹腔注射青霉素40万ud3d，皮下深部注射吉派林500 ukgd2d。假手术组动物只分离左侧颈外、颈内、颈总动脉，不做球囊拉伤处理。122给药剂量与方法术后连续灌胃给药7天。假手术组和模型组给等体积生理盐水。他汀组动物按1333mgkg给药，相当于人临床用量的10倍。益气活血解毒组的药物浓度为129生药m1，按100mlKg给药，相当于人临床用量10倍。123
7、血清中脚一1、CRP、TGFp含量韵检测采用放免法检测血清MCP一1、cRP、TGFB的含量，严格按照产品说明书操作步骤进行检测。13统计学方法使用SPSSll0软件进行统计，计量资料用均数标准差表示，三组以上均数的比较采用方差分析，尸005)。表1 球囊损伤后7天各组大鼠血清McP一1含量的变化(is，pgm1)注：与假手术组比较，。K00122球囊损伤后7天各组大鼠血清CIlP含量的变化如表2所示，与假手术组相比，模型组7天血清中cRP含量显著升高，差异有统计学意义(户0000)；与模型组相比，益气活血解毒组明显降低血清中CRP的含量(户0002)，他汀组有降低CRP的趋势，但无统计学意义
8、(仁0067)。表2 球囊损伤后7天各组大鼠血清CRP含量的变化(is，pg1)注：与假手术组比较，4尸001；与模型组比较，“尸00l23球囊损伤后7天各组大鼠血清rG卜B含量的变化如表3所示，与假手术组相比，模型组7天血清中TGFB含量显著升高(仁O000)；与模型组相比，他汀组与益气活血解毒组均显著降低血清中TGFB的含量(卢0038，仁0001)。表3 球囊损伤后7天各组大鼠血清TGF_B含量的变化(is，pgm1)注：与假手术组比较，。尸00l；与模型组比较，+K005，”尸0013讨论血管重构是由血管的各种内外因素造成血管内皮损伤，进一步导致的血管壁厚度和管腔223第十次全国中西医
9、结合血蛹证及活血化瘀研究掌术大会大小等血管结构的改变，以及血管壁细胞活化、增殖、迁移和分泌，细胞外基质沉积等细胞生物学的变化。在血管重构过程中，非特异性炎症反应启动和促进了血管重构。血管损伤后半小时即可在外膜检测到中性粒细胞，而术后2小时至第3天才可在内、外弹性膜处发现中性粒细胞，中性粒细胞在外膜的浓度远高于在中、内膜的浓度。MCP一1是一种对单核细胞的迁移起重要作用的炎性细胞因子，可使巨噬细胞向血管内皮的炎症部位聚集，从而促进动脉粥样硬化的进展。在临床再狭窄患者中，术后3日和6个月的血浆MCPl水平显著高于术前和同期对照组(尺005)，术后6个月McP一1水平与动脉重构指数呈负相关， 提示M
10、CP一1通过影响血管重构而参与冠脉支架术后再狭窄的发生过程。细胞与动物实验亦提示，MCP一1不仅可以促进平滑肌细胞增殖，而且在蛋白酶c一6的刺激下，还可以在外膜过度表达，使外膜细胞迁移到内膜，参与内膜增生。研究表明，当机体受到创伤和产生炎症反应时，CRP会显著升高，并被作为急性期炎症反应的重要标志。在动脉粥样硬化疾病中，CRP能促进疾病的进展并影响斑块的稳定性。其可呈剂量和时间依赖性促进THP细胞表达基质金属蛋白酶及基质金属蛋白酶抑制剂一1，也能促进氧化低密度脂蛋白的摄取，促进基质金属蛋白酶9的释放，这些表明CRP不仅仅是血管事件的危险因子，还直接参与血管重构和动脉粥样硬化斑块不稳定性的机制。
11、多功能的细胞因子转化生长因子B，广泛地调节机体的生长、发育、炎症、创伤修复和免疫等许多生理和病理过程。大量研究表明TGFB能调节血管平滑肌细胞的增殖、迁移及分化。在正常生理状态下TG卜B可以抑制血管平滑肌细胞增生，而在损伤或炎症等病理状态下，TGFB表现为促进平滑肌细胞的增生。因此认为TGF_B对血管平滑肌细胞具有双向调节功能。TGFB具有减少胶原酶的合成和刺激组织金属蛋白酶抑制剂(TI佃)的表达的功能，抑制细胞外基质的降解。此外，TGFB还能促进外膜的纤维化，并使内膜增生，管腔狭窄，参与血管的适应性重构。我们以往的研究发现，球囊损伤血管后7天，损伤的颈动脉内膜轻度增生，外膜显著增厚；内膜、中
12、膜和外膜均有单核巨噬细胞的标记物CD68的表达，尤其以外膜明显。本实验观察到，大鼠血清中炎症因子MCP一1、CRP及TGFB含量均明显增加，表明炎症反应早期参与了血管重构。MCP一1、CRP及TGFB水平的增加可促进单核巨噬细胞的聚集，刺激血管壁细胞的迁移和增殖；同时破坏基质金属蛋白酶及其抑制剂的平衡性，早期促进细胞向内膜的迁移，后期促进细胞外基质的沉积。中医将“毒”分为外毒和内毒，著名中医专家王永炎教授指出：“邪气亢盛，败坏形体即转化为毒”，姜良铎等认为内生之毒即由生理物质产生过多或者代谢废物蓄积或者生理物质异位而形成。血管重构过程中，伴有炎症反应及细胞的活化、增殖、分泌和迁移，以及细胞外基
13、质的形成，这些导致管腔的增厚和狭窄，其过程包括了生理或者病理产物的堆积或异位，属于中医的内生之毒。这些内生之毒蕴积局部及全身，使病变更加复杂化。PCI术后再狭窄即体现了上述过程。针对疾病过程中的特点，中西医结合心血管病专家廖家祯教授在传统益气活血治疗的基础上，加用解毒之法，用益气活血解毒方防治血管重构。该方由黄芪、224第十次全国中西医结合血蛹证及活血化蝻研舅：学术大会丹参、金银花、丹皮等组成，其组方用药体现了益气活血解毒这一基本治法。在此基础上，我们前期完成了一系列的相关课题研究，结果表明：益气活血解毒方可抑制血管狭窄和新生内膜的增生、减少细胞外基质的沉积。尤其明显抑制外膜成纤维细胞的活化增
14、殖迁移和分泌的能力，还能减少外膜炎症细胞的浸润。益气活血解毒方中君药黄芪，臣药丹参和金银花的主要有效单体组分分别是黄芪多糖、丹参素和绿原酸。现代药理研究表明，黄芪多糖和丹参素均能抑制平滑肌细胞的增殖，绿原酸具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、免疫调节、降糖等多种作用。应用益气活血解毒方进行干预后，CRP及TGFB两种因子的含量显著降低，说明益气活血解毒方能早期降低炎症反应及调节细胞外基质平衡的效应，为其防治血管重构提供依据。他汀类药物除具有降低血脂作用外，其抗炎和稳定斑块的作用受到极大重视，但本研究中，阿托伐他汀只表现为降低TGF_B的含量，对于CRP有降低趋势(卢0067)，但无统计学差异，可
15、能与动物只数和剂量有关。总之，益气活血解毒方能明显降低球囊损伤后早期动物血清中cRP和TGFB，结合以往的研究工作，其能减少内膜厚度和面积，减少管腔损失，减少胶原含量，降低血管局部炎细胞浸润，特别是减少血管外膜成纤维细胞的活化迁移和分泌，说明在活血化瘀基础上的解毒作用，可以通过减少炎症反应、减少细胞外基质的沉积和抑制内膜增生，从而防治球囊损伤后血管重构，为中医药防治血管重构性疾病提供了新的思路和手段。针刺放血法对切除卵巢大鼠行为学和海马ERa mRNA的表达影响研究谢洪武付勇曾利元陈日新夏雷翔黄蔚云熊俊江西中医药大学附属医院针灸康复科(南昌，330006)摘要目的：研究针刺放血法对去卵巢大鼠行
16、为学及海马区雌激素受体Q(ERa)mRNA的表达影响。方法：采用卵巢切除大鼠模型，造模低雌激素记忆障碍，去势2周后进行针刺放血刺激，连续治疗3个月。Morris水迷宫测试空间学习记忆能力，酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清雌二醇(E2)浓度，实时荧光定量PcR检测ERa mRNA的相对表达量。结果：与假手术组比较，模型组大鼠逃避潜伏期时间延长，跨越平台次数减少(尺005)；与模型组比较，针刺放血组治疗后逃避潜伏期缩短，跨越平台次数增加(尺005)；与假手术组比较，模型组大鼠血清E2浓度显著降低(尺001)；与模型组比较，针刺放血组和电针组血清E2浓度升高，但针刺放血组升高更明显(尺001)；与假手术组比较，模型组大鼠海马ERa mRNA表达降低(尺005)；与模型组比较，针刺放血组和电针组ERa mRNA表达均升高，但针刺放血组225益气活血解毒方对球囊损伤颈动脉后大鼠血清炎症因子及TGF-的影响作者： 常宏， 赵明镜， 雷环， 赵一舟， 吕晞滢， 赵保胜作者单位： 常宏,赵明镜,雷环,赵一舟,吕晞滢(北京中医药大学东直门医院国家教育部重点实验室 北京,100700)， 赵保胜(北京中医药大学 北京,100029)引用本文格式：常宏.赵明镜.雷环.赵一舟.吕晞滢.赵保胜 益气活血解毒方对球囊损伤颈动脉后大鼠血清炎症因子及TGF-的影响会议论文 2013
