1、 微生物 實 習 報 告 班級： 組別： 學號： 姓名： 實驗十三 蛋白質的分解 3 97學第 1 學期微生物實驗 2008/ / 一 實驗目的 蛋白質 (Proteins) 為含有碳、氫、氧及氮的有機化合物，有些 含有。蛋白質是由胺基酸 (Amino acids) 的次單位經胜肽鍵 (Peptide bond)，組合而成小鏈或大分子的聚胜肽 (Polypeptide)。同的蛋白質由於同的功 能而使其產生同 的結構及同的三空間形。 當碳水化合物沒法被微生物用，而蛋白質分子太大沒法通過 細胞膜時，某些微生物為生存，即產生細胞外的蛋白酵素及 胜肽酵素分解蛋白質為能通過細胞膜的胺基酸。使蛋白質及 胺
2、基酸轉變為碳源及能源。 二 前言 1. 明膠的水解作用 將明膠混入同的培養基中，測定微生物產生明膠蛋白分解酵素的 能。換言之即是測定存有明膠的水解或液化的情形。 2. 蛋自水解作用 將脫脂乳粉混入洋菜中，測定微生物產生蛋白水解酵素的能。 換言之，即是測定蛋白被水解而使培養基由乳白色變成澄清的 情形。 3. 吲哚之形成 測定微生物分解色胺基酸產生。吲哚的能。當微生物釋放 色胺基酸分解酵素，則分解色胺基酸產生日吲哚。柯瓦克試劑含有 4 97學第 1 學期微生物實驗 2008/ / 的對-二甲基氯基苯甲 (p-Dimethylaminobenzaldehyde) 能與 吲哚作用而得到紅色。 4. 化
3、氫之形成 測定微生物是否能排出分解含胺基酸的酵素，使含胺基酸分解 而釋出 H 2 S，並與培養基的亞鐵子作用而形成黑色的化 亞鐵 (FeS) 的能。 5. 胺基酸脫氨基作用 微生物排出胺基酸的脫氨基酵素，而此酵素可催化促使胺基酸產生 氧化作用而脫去氨基，本身則由於沒有氨基而轉變成有機酸， 而釋出的有機酸與鐵子混合而形成色混合物。 6. 胺基酸脫羧基作用: 其原為測某一微生物排出胺基酸脫羧酵素，將一胺基酸脫去 羧酸而形成胺並使其培養物呈鹼性。 三 實驗材及設備 接種環 ( 針)，各 1 支/組。 酒燈及火柴，各 1 個/組。 無菌培養皿：內含 10% 脫脂奶粉洋菜培養基，1 片/組。 菌種：(1
4、) 黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)、 (2) 大腸桿菌 (Escherichia coli)、(3) 黑麴菌 (Aspergillus niger)、(4) 啤酒酵母菌 (Sacchammyces cerevisiae) 續 2 天 移植 NB培養 液，1支/組。 四 實驗藥品 5 97學第 1 學期微生物實驗 2008/ / 5 mL 明膠營養培養液，4支/組。 5 mL 胰化蛋白腖培養液，4 支/組。 5 mL TSI Agar斜面，4支/組。 5 mL 含 1% Phenylalanine NA 培養液各 4支/組。 5 mL 含 1% Lysine Mol
5、ler 營養培養液，4支/組。 明膠營養培養液 (Gelatin Nutrient Broth， GNB)。 脫脂奶粉洋菜培養基 (Skim milk agar)。 胰化蛋白腖培養液 (Tryptone ofTryptophone Broth)。 三鐵洋菜培養基 (Triple Sugar Iron Agar，TSI Agar)。 苯丙胺基酸培養基 (Phenylalanine agar)。 牟脫羧酵素培養液 (Mollefs decarboxylase broth)。 五 實驗步驟 1. 明膠的水解作用 (The hydrolysis of gelatin) (1) 選取 4 支無菌明膠營養
6、培養液試管。於每支試管上分別寫上 想接種的菌名 (黃色葡萄球菌、大腸桿菌、黑麴菌、及 啤酒酵母菌)。並將每支試管上寫上明膠的水解試驗。 (2) 以無菌接種環從菌液中取菌，依標記接種到相對應菌名之 培養液中。 (3) 將接種完成之培養液，放入 35 o C 的恆溫箱中培養。 (4) 於 48 2 小時後，將含有 10% 明膠培養液放入冰水中 靜置 5 分鐘。觀察及記黃色葡萄球菌、大腸桿菌、 黑麴菌、及啤酒酵母菌的培養液之結果，正反應為呈液體， 負反應為固體。 2. 蛋白的水解作用 (The hydrolysis of casein): 6 97學第 1 學期微生物實驗 2008/ / (1) 選
7、取無菌的脫脂奶粉洋菜培養皿 1 片，將其分成 4 等分。 每等分寫上想接種的菌名。並將每支試管上寫上蛋白的 水解試驗。 (2) 以無菌接種環從菌液取菌，依標記劃線到相對應預先標記之 脫脂奶粉洋菜培養皿上。 (3) 將接種完成之脫脂奶粉洋菜培養皿底部朝上，放入 35 o C 的 恆溫箱中培養。 (4) 於 48 2 小時後，觀察及紀黃色葡萄球菌、大腸 桿菌、黑麴菌、及啤酒酵母菌的結果。正反應為無色透明， 負反應為變。 3. 吲哚的形成(The formation of indole) (1) 選取 4 支無菌膜化蛋白腺培養液試管。於每支試管上分別 寫上想接種的菌名。並將每支試管上寫上吲哚的形成試
8、驗。 (2) 以無菌接種環從菌液中取菌，依標記接種到相對應菌名之 培養液中。 (3) 將接種完成之培養液，放入 35 o C 的恆溫箱中培養。 (4) 於 48 2 小時後，將含有胰化蛋白臉培養液放入 0.3 mL 柯瓦克試 劑靜置 3 分鐘。觀察及記黃色葡萄球菌、 大腸桿菌、黑麴菌、及啤酒酵母菌的培養液之結果，正反應 為呈紅色，負反應為黃色。 4. 化氫之形成 (The formation of hydrogen sulfide) (1) 取用 4 支無菌三鐵洋菜培養基斜面試管。各取 1 支試管 寫上黃色葡萄球菌、大腸桿菌、黑麴菌、及啤酒酵母菌， 並將每支試管上寫上化氫 (H 2 S) 之形
9、成試驗。 (2) 分別以無菌接種針從斜面鉤取少黃色葡萄球菌、 大腸桿菌、黑麴菌、及啤酒酵母菌，接種到三鐵洋菜 7 97學第 1 學期微生物實驗 2008/ / 培養基斜面，以表面試管內劃線，並用穿做深層接種。 (3) 將接種完的試管，放入 35 o C 的恆溫培養箱中培養。 (4) 於 48 2 小時後，觀察及記黃色葡萄球菌、 大腸桿菌、黑麴菌、及啤酒酵母菌的結果，成黑色則為 正反應，負反應則沒黑色發生。 5. 胺基酸的脫氨基作用(The deamination of amino acid) (1) 取用 4 支無菌萃丙胺基酸培養基斜面試管。各取 1 支試管 寫上黃色葡萄球菌、大腸桿菌、黑麴菌
10、、及啤酒酵母菌， 並將每支試管上寫上胺基酸的脫氨基作用試驗。 (2) 分別以無菌接種針從斜面鉤取少黃色葡萄球菌、 大腸桿菌、黑麴菌、及啤酒酵母菌，接種到苯丙胺基酸 培養基斜面，以表面試管內劃線。 (3) 將接種完的試管，放入 35 o C 的恆溫培養箱中培養。 (4) 於 48 2 小時後，於斜面上滴加 4-5 滴氯化鐵試劑，使 試劑散佈到所有微生物生長的斜面上。觀察並記黃色 葡萄球菌、大腸桿菌、黑麴菌、及啤酒酵母菌的結果， 成深色則為正反應。 6. 胺基酸的脫羧作用 (The decarboxylation of amino acid) (1) 選取 4 支無菌牟脫殼酵素培養液試管。於每支試
11、管上分別 寫上 想接種的菌名。並將每支試管上寫上胺基酸的脫羧作用 試驗。 (2) 以無菌接種環從菌液中取菌，依標記接種到相對應菌名之 培養液中。 (3) 將接種完成之培養波，放入 35 o C 的恆溫箱中培養。 (4) 每天觀察並記續四天，黃色葡萄球菌、大腸桿菌、 黑麴菌、及啤酒酵母菌之結果，正反應為呈黃色或紅色， 負反應為紫色。 8 97學第 1 學期微生物實驗 2008/ / 結果 七 討 八 問題 9 97學第 1 學期微生物實驗 2008/ / 九 考文獻 方式華、吳字、莊榮豐、項千芸、昭君、鍾景光。微生物學 實驗。新文京開發出版股份有限公司。台灣，中和。 吳全耀、吳黃素月。2003。普通微生物實驗。九州圖書 文物有限公司。台灣，台。 陳幸臣。2003。食品微生物學實驗法。華香園出版社。台灣， 台。 陳彩雲、江春梅。食品微生物實習。台灣文興業股份有限公司。 台灣，台南。
