1、300 山西医药杂志2009年4月第38卷第4期下半月 Shanxi Med J，April 2009，Vo138，No4 the Second 基质金属蛋白酶一2和9在混合性结缔组织病 单个核细胞中的表达 晋中市第二人民医院(030800) 化红霞王香弟 李锦艳 【摘要】 目的探讨基质金属蛋白酶(MMP)一2和9与混合性结缔组织病(MCTD)的关系。方法 采用 Western印迹方法，检测MCTD患者外周血单个核细胞(PBMC)中MMP一2和MMP-9的蛋白表达水平。结果 MMP-2、MMP-9在MCTD患者外周血PBMC中的蛋白表达水平明显高于健康对照组。结论 MMP-2和 MMP-9可能
2、在MCTD的发生中起作用。 【关键词】基质金属蛋白酶类； 混合性结缔组织病 混合性结缔组织病(mixed connective tissue disease，MCTD)是一种为临床上具有系统性红斑 狼疮(SLE)、系统性硬皮病和多发性肌炎特征的， 血清中有高滴度RNP抗体，对皮质类固醇反应良 好的一组疾病，目前认为是一种独立的疾病。本病 女性发病较多，女性与男性之比为4：l，3O岁左右 多见，儿童和老年都可发病。临床表现有多发性关 节痛和关节炎、手肿胀、雷诺现象、肌无力、肌痛、间 质性肺炎和肺纤维化等。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMP)在细胞外基质的蛋
3、白分 解中具有重要作用1_3。本研究采用Western印迹 方法对MCTD患者的外周血单个核细胞(PBMC) 中MMP一2和MMP一9的蛋白表达水平进行检测， 探讨MMP在MCTD发生、发展中的可能机制。 1 对象与方法 11对象 MCTD患者选自我院皮肤科和风湿科2006年1月至 2008年9月门诊及住院患者，诊断依据Sharp(1983)的标 准，以临床表现、抗RNP抗体滴度升高及抗核抗体、抗Sm 抗体阳性，补体沉积改变综合判断疾病的活动性。检测前， 患者至少3个月内未接受糖皮质激素、免疫抑制剂或具有 免疫调节作用的药物治疗。健康对照组来自健康志愿者。 12仪器和试剂 鼠抗MMP-2抗体、
4、鼠抗MMP-9抗体以及鼠抗 肌动 蛋白抗体均购自美国Santa Cruze公司，抗鼠lgG(抗)购自 美国SantaCruze公司，淋巴细胞分离液Fioll(上海试剂二 厂)，蛋白相对分子质量标准(中国科学院上海生物化学研究 所)，硝酸纤维素膜和偏二氟乙烯(PVDF)膜(美国Pierce公 司)，尼龙膜(美国Pall corporation，Life science公司)。 13方法 131标本采集：征得患者及健康志愿者同意后均于上午 8：OO9：00抽取空腹静脉血8 mL，其中5 mL肝素抗凝， 采用FicollHypaque密度梯度离心法分离，离心后管内分 为三层，上层为血浆和Hank液，
5、下层主要为红细胞和粒细 胞，中层为淋巴细胞分离液，在上、中层界面处有一以单个 核细胞为主的白色云雾层狭窄带，单个核细胞包括淋巴细 胞和单核细胞。分离获得单个核细胞。3 mL血分离血清 后保存于一7O，用于血清蛋白提取及Western印迹检 测。 132血清MMP-2、MMP一9检测：按照文献4所述方法 稍加修改后检测血清MMP-2、MMP一9。血清15 000 rmin 离心10 min后，取1 mL血清加入100 L肝素琼脂糖凝 胶，缓慢旋转振摇2 h；3 000 rmin离心5 min，去除上清， 磷酸盐缓冲液(PBS)清洗沉淀1次，离心沉淀中加入4O肛L 2聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)加
6、样缓冲液，100煮沸5 min，离心，取上层液体点样。经1O 十二烷基磺酸钠一聚 丙烯酰胺凝胶电泳(SD PAGE)电泳分离、转膜、封闭后， 依次J JIl八鼠抗MMP一2、MMP一9多克隆抗体4过夜，二抗 (抗鼠IgG)室温孵育12 h，用Pierce公司的ECL试剂盒 进行化学发光检测。x线片压片、显影、定影。 14统计学方法 数据采用SPSS130统计软件处理，MCTD患者年龄 分布与健康对照组年龄分布比较采用KruskalWallis H 检验(方差不齐，非正态分布)。两组间性别分布分析采用 Fisher精确检验(n005)。 22 MMP一2、MMP-9在MCTD患者PBMC中的蛋白
7、表 达：我们随机选取4名健康对照以及4例MCTD患者进行 Western印迹检测分析，结果发现：MMP-2在4例MCTD 山西医药杂志2009年4月第38卷第4期下半月 Shanxi Med J，April 2009，Vo138，No4 the Second 患者外周血PBMC中表达明显上调，其表达水平明显高于 健康对照组。同样，MMP-9在4例MCTD患者外周血 PBMC中表达水平也明显高于健康对照组。 3讨 论 MMP是一类锌依赖性内肽酶，目前已发现2O 余个成员，是降解细胞外基质最重要的酶系。 MMP家族中的明胶酶，包括A(MMP一2)和B (MMP一9)两类，其作用底物包括明胶、V、
8、X型胶原和弹性纤维，它们是降解型胶原最主要 的酶。A类为MMP-2，相对分子质量为7 200，来 源于间质细胞、肿瘤细胞等，分解底物1 。MMP 是胚胎发育、组织再生等正常生理过程中不可缺少 的物质。， 本研究结果显示：MMP-2、MMP-9在MCTD 患者外周血PBMC中的蛋白表达水平明显高于健 康对照组。这一结果提示MMP一2、MMP-9在 3O1 MCTD的发生发展中起着作用。 参考文献 1杨荫昌单纯性多发性肌炎23例临床观察中华神经精神科杂 志，1983，16(6)：340 2 Koh ET，Ong BAdult pdynryositis；clinical and laboratory
9、 lea tures and treatment response in 75 patientsAnn Rheum Dis， 1993，52：857-861 3 Ram M，Sherer Y。Shoenfeld YMatrix metalloproteinase-9 and autoimmune diseasesJ Clin Immunol，2006，26(4)：299307 4 Rouhiainen A，Imai S，Rauvala H，et a1Occurrence of ampho terin(HMGB1)as an endogenous protein of human platele
10、ts that is exported to the cell surface upon platelet activationThromb Haemost，2000，84：10871094 (收稿日期：20081119) 作者简介：化红霞，女，1967年6月生，主治医师，晋中市第 二人民医院，030800 左氧氟沙星致过敏性休克一例 河北省滦南县医院(063500) 李敬东 患者女，17岁，因咳嗽、发热7 d人院，既往体健，否认 药物过敏史。查体：体温385、脉搏96次min、呼吸21 次min、血压159 kPa，神志清楚，频繁咳嗽、无痰，唇无紫 绀，胸廓对称无畸形，右肺尖部扣浊音，呼吸音
11、略低。胸片 报告：右肺上叶炎症。遂以肺炎收人院，按医嘱给予左氧氟 沙星氯化钠注射液(商品名：舍奇，辽宁海神联盛制药有限 公司，批号：200706141，规格：100 mL：乳酸左氧氟沙星02 g与氯化钠09 g)，约2 min后，患者突然出现胸闷、气短、 口唇紫绀、大汗、周身皮疹，立即停止左氧氟沙星静脉滴点， 更换液路，静脉滴注5 葡萄糖氯化钠注射液，苯海拉明2O mg肌肉注射，吸氧，地塞米松5 mg入壶，之后，全身皮疹渐 消退，胸闷、气短缓解，10 min后，患者出现周身发冷、寒 战，伴上腹部疼痛。查体：体温385，血压测不到，颜面 青紫，脉搏110次min，给予山莨菪碱10 mg、安痛定3
12、 mI 病例报告 肌肉注射，706代血浆静脉滴注，地塞米松注射液10 mg入 壶，症状逐渐缓解。 讨论左氧氟沙星为第三代喹诺酮类药物，属于广谱 杀菌药，为氧氟沙星的左旋体，其抗菌活性约为氧氟沙星的 2倍，它的主要作用机制是通过抑制细菌DNA旋转酶(细 菌拓扑异构酶)的活性，阻碍细菌DNA的复制而达到抗菌 作用，临床应用广泛。常见的不良反应有恶心、呕吐、腹痛、 腹泻等胃肠道症状，头晕、头痛等神经系统症状。出现过敏 性休克并不多见，应引起临床重视。对有左氧氟沙星过敏 史患者，应避免使用以免引起严重的后果。 (收稿日期：2008-11-12) 作者简介：李敬东，男，1972年3月生，主管药师，河北省滦 南县医院，063500
