1、I临床口腔医学杂志2008年10月第24卷第10期J Clin Stomatol,Oct，2008，V0124No10基础研究唾液中防御素HBD一2的表达初探王海燕，周永梅，吴岚，沈雪敏，周曾同”(上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔黏膜科上海市I=腔医学研究所上海市口腔重点实验室上海200011)摘要 目的：防御素在机体的免疫防御系统中发挥着重要的作用。本研究比较防御素HBD一2在正常人，口腔扁平苔藓，口腔白斑及口腔念珠菌感染患者唾液中的分泌情况。方法：共采集40份唾液(男性18例，女性22例，年龄2055岁)，其中扁平苔藓20例，白斑lO例，口腔念珠菌感染10例。另外收集20例健康志愿者
2、唾液作为对照组，平均年龄25岁。采用免疫印记法检测唾液样本中HBD一2的分泌情况。结果：对照组中有12例HBD一2为阳性，40例实验组样本均为HBD一2表达阳性，且蛋白含量均较对照组增高。结论：唾液中HBD一2的分泌有可能与感染程度有关。HBD一2有可能与癌前病变有相关性。关键词 防御素；HBD一2；扁平苔藓；白斑；口腔念珠菌感染中图分类号 R786 文献标识码 A 文章编号 10031634(2008)10-057903Expression of liBD-2 in saliva of oral dise删 WANG Hai-yanzHoU Yongmei，WU Lan，SHEN Xuemi
3、n。ZH0u Zeng-tongDepartment of Oral Medicine；Shanghai Research Institute of Stomatology；m Ninth People 3 Hospital：School ofMedicine：Shanghai Jiaotong University鼬删咖i 200011，ChinaAbstract Objective：Human beta defensins play a important role for their antimicrobial activity in mucosa immunesystemThis st
4、udy aims to detect human beta defensin 2 in whole unstimulated saliva(WUS)of oral lichen planus(OLP)，oral leukoplakia(OLK)and oral candidiasisMethod：The WUS samples were collected in a group of 40 patients(1 8 men，22 women)with 20 ca目gs of OLP，10 cases of OLK，10 cases of oral candidiasis，age range 2
5、055 yearsControl groupconsisted of 20 healhy controls，mean age 25 yearsSaliva beta defensin 2 was detected by Wcstern BlottingResult：HBD一2 was detected in l 220 controls and all patients which wag higber than that in controlsConclusion：These resultsshow that the change of HBD一2 in oral diseases refl
6、ects the infection degree，but also indicate that there mayrbe relationshipbetween human beta defensins and premalignant diseasesKey wordsdefensins；HBD一2；oral lichen planus(0LP)；oral leukoplakia(0u0：oral eandidiasis口腔黏膜上皮时刻受到各种微生物的侵袭和机械性刺激，易发生牙周组织和口腔黏膜的感染和其它病损。为保护机体免受有害物质入侵，防止疾病的发生，口腔黏膜组织、唾液及其中的各种免疫细
7、胞和一些抗微生物肽等形成一道防御性屏障，防御素就是其中的重要组成之一。防御素13(Human Bdefensins，HBDs)作为一种重要的上皮抗微生物肽越来越受到口腔基础研究者和临床工作者的重视。HBDs在免疫方面的研究已经相当深入，它广泛分布于口腔黏膜、唾液腺上皮及唾液中，具有高度的抗菌活性。另有报道指出，在口腔鳞癌和一些癌前病变(如扁平苔藓和白斑)患者唾液中的防御素0【(HNPs)水平均较正常人高23J。鉴于此，本研究通过检测口腔癌前病变和感染性疾病唾液中HBD一2的分泌情况，初步探讨HBD一2与感染，及癌前痘变的羞丕!基金项目：国家自然科学基金资助(30500561)t通讯作者：周曾同
8、材料和方法5791材料11样本来源共采集40份唾液样本，男18例，女22例，年龄20一55岁。其中扁平苔藓20例，白斑10例，口腔念珠菌感染10例。另外收集20例健康志愿者唾液样本作为对照组，平均年龄25岁。12主要仪器和材料硝酸纤维素薄膜(02斗m；BioRad，USA)，兔抗人HBD一2抗体(Santa Cruz，CA)，羊抗兔ISG(bioantiM)，小牛血清(Sigma，USA)，蛋白酶抑制剂(Sigma，USA)，蛋白显色试剂盒(Amemh一舳，USA)。2方法21唾液采集餐后2 h采用吐唾法收集无刺激全唾液23 ml，12000 rmin离心20min，吸取已分离掉细胞的上清液，
9、加入蛋白酶抑制剂，置于一20冰箱保存至检验分析。22免疫印迹法检测HBD一2蛋白含量580 临床口腔医学杂志2008年10月第24卷第10期J Clm Smmatol，Oct，2008，V0124No10将样本5 p,1点样置硝酸纤维素薄膜上，等量PBS缓冲液为 白，免疫印迹条带较对照组明显加深(见图4)。空白对照，加10福尔马林固定2 h，加TBS(含5脱脂奶)阻断1 h，加入适量兔抗人HBD一2抗体(1：1000稀释)(含5脱脂奶，3血清，005tween一20，002叠氮钠)室温下孵育过夜，漂洗3次后，加入辣根过氧化物酶偶联的羊抗兔IgG(1：2000稀释，含5脱脂奶)，平稳摇动孵育1
10、h，漂洗3次，按化学发光法常规显影、定影并检测膜上印迹。结 果1健康对照者唾液中HBD一2分泌情况在20例健康对照者样本中，有12例出现深浅不一的免疫印迹条带，另有8例未见有条带出现(见图1)。其中有3例条带明显加深。在空白对照孔中无条带出现。田1正常对照组中HBD一2表达2 口腔扁平苔藓患者唾液中HBD一2分泌情况本组20例扁平苔藓患者唾液样本中均检测出HBD一2蛋白，其中大部分样本的免疫印迹条带明显加深(见图2)。图2口腔扁平苔藓组中HBD一2表达3 口腔白斑患者唾液中HBD一2分泌情况本组10例白斑患者唾液样本中均有HBD一2蛋白分泌，免疫印迹条带明显增粗加深(见图3)。图3口腔白斑组中
11、HBD一2表达4 口腔念珠菌感染患者唾液中HBD一2分泌情况本组10例念珠菌感染患者唾液样本中均检测出HBD一2蛋图4口腔念珠菌感染组中HBD一2表达讨 论正常情况下，口腔内栖息着大量的微生物菌群，各种微生物互利共存，相互协调。口腔组织的各种被覆上皮产生人类防御素B的多种抗微生物活性分子，同时口腔内时刻受到唾液的机械性冲洗，唾液本身也含有丰富的抗菌物质，如乳铁蛋白、溶菌酶及防御素，因而在口腔微生态平衡中起到了重要的作用。到目前为止，口腔三大唾液腺及其它小唾液腺中HBDs表达情况均有报道。HBD一1在唾液腺中的表达率为100，HBD一2在唾液腺中的表达则有很大差异3】。相比较而言，HBD一1表达
12、水平比较恒定，不因正常或急慢性炎症感染而发生明显变化，而HBD一2表达受各种炎性介质或细胞因子刺激发生明显变化，也有报道正常腺体及炎症腺体都可以出现HBD一2的表达4t5】。曾有研究表明，在口腔扁平苔藓，口腔白斑和口腔念珠菌感染的病损组织中HBD一2蛋白表达增高，但就这几种相对常见的口腔黏膜病唾液中的HBD一2分泌报道较少。有研究发现，在食管和胃念珠菌感染时，HBD一2大量增高【训。在本研究中，部分正常人唾液中可有HBD一2蛋白，但含量不等，在念珠菌感染患者的唾液中，均检测到了HBD一2蛋白，并且含量明显增多。这与以往的研究一致【8】，也从另一个侧面说明了HBDs的抗真菌特性。对于防御素和肿瘤
13、的关系研究已有很多报道，有学者发现在恶性肿瘤中经常出现HBD一1不表达，如前列腺癌93。但对防御素与癌前病变的关系研究却鲜有报道。本研究中，我们发现在扁平苔藓和白斑患者唾液中，HBD一2的含量也较正常人有所增多，提示其可能与口腔癌前病变有某些联系。但此两组间并未见明显差异。本研究中的扁平苔藓和白斑患者，虽然均已被临床和病理证实，但在上皮异常增生方面未作进一步细化分组。因此，癌前病变的类型或程度与HBD一2的分泌及含量是否有关，扩大样本量是否会出现不同的结临床口腔医学杂志2008年10月第24卷第10期J Clin Smmatol，Oct，2008。V0124No10GFAP与仪一SMA在涎腺腺
14、样囊性癌中共表达的免疫电镜研究木吕成鹏-，孙沫逸-”，陈伟-，李建虎-，黄晓峰：，于华z，王春梅：(1第四军医大学15i腔医学院颌面外科陕西西安710032；2第四军医大学电镜教研室)581摘要 目的：研究雪旺氏细胞标志物胶原原纤维酸性蛋白(GFAP)和肌卜皮细胞标记物ot一平滑肌肌动蛋白(俚一SMA)在涎腺腺样囊性癌(ACC)中的共表达情况，探讨GFAP、otSMA与ACC嗜神经侵袭的关系。方法：利用双重胶体金标记的免疫电镜技术从超微结构水平研究GFAP和仅一SMA在腺样囊性癌中的共表达。结果：在ACC组织中，GFAP蛋白与dSMA蛋白均有表达，GFAP和otSMA共表达的细胞符合肌上皮细胞
15、的超微结构特点。结论：ACC中肿瘤性肌上皮细胞样发生雪旺氏细胞分化可能是ACC嗜神经侵袭的组织病理学基础。关键词腺样囊性癌；胶原原纤维酸性蛋白；a一平滑肌肌动蛋白：双重胶体金标记；免疫电镜中图分类号Q786 文献标识码A 文章编号 10031634(2008)10-0581-03Coexpresslon of GFAP anda-SMA in salivary adenoid cystic carcinoma：蛐immunoelectron microscopicanalysisLV Cheng-peng，SUN Me-yi，CHEN Wei，LI Jian-hu，HUA NG Xiao-en
16、g，YU Hua，WA NG Chun-meiDepart-meat ofMaxiUofacial Surgery，Stomatologicd co如酽，Fourth Military Medwd Unwe瑙毋，Xi“an 710032 ChinaAbstract Objective：To explore the expression of Schwann cell marker GFAP and myoepithelial cell nla矗er ct-SMAin salivary adenoid cystic carcinoma CACC)，and to evaluate the rela
17、tionship of GFAP，dSMA and perineural invasion inACCMethod：all immunoelectron microscopic of double labeling colloidal gold method was used to detect the expression ofGFAP anda-SMA in salivary ACC tissue samplesResult：In salivary ACC tissue samples,both GFAP anda-SMA proteinswere positiveThe cell in
18、which GFAP andctSMA coexpressed accorded wim the characteristics of myoepithelial ceHsConclusion：There may be Schwann cell differentitation in onco-myoepithelial cell of salivary ACC，and it may be thepathological base of perineural invasion in salivary ACCKey words adenoid cystic carcinoma；collageno
19、us fibril protein；a-smooth mu8cle actin；double labeling colloidalgold；immunoelectron microscopy基金项目：国家自然科学基会资助(30271424)；国家自然科学基金资助(30772428)：陕两省自然科学基金资助(2002C2-0D”通讯作者：孙沫逸：Tel：02984772502E-mailmoyisuntmmueducn果还有待深入研究。 圈Bonass WA，High AS，Devine DAExpression of-defensin genes12234参考文献Eswarappa SM，Pa
20、nguhri KK，Hensel M，el a1强e yejABEF operonof Salmonella confers resistance to antimicrobial peptides and contributes to its virulenceMicrobiology2008，154(Pt 2)：666-678Mizukawa N。Sugiyama K，Ueno T，el a1Defensinl an antimicmbialpeptide present in the saliva of patients with oral diseases DOralDis，1999，
21、5(2)：139-142Mizukawa K，Suglyama K，Fukanaga T，el a1Defensin-1，a peptidedetected in the saliva of oral squamous cell carcinoma patientsJAntican Ros。1998，18(6B)：46459Sahasrabudher KS，Kimball JR，Morton TH，et a1Expression of theantidcrDbial peptidehuman 13-defensin一1，in the duct cells of minor salivary g
22、lMds and detection in saliva DJ Dent Res，2000，79(9)：1669-74by human salivary glandsJOral Microbial Immunol，1999，14：37l一3746Abiko Y，Jinbu Y。Noguchi T，et a1Upregulation of human kta卅e-femin 2 peptide expression in oral lichen planus，leukoplakia andcandidiasisan immunohistochemical study DPathol Res Pr
23、act2002，198(8)：537-5427 鼬eIIIle K，Bmllke G，Meyer D，et a1Oesophageal defensin expres-sion during Candida infection and reflux disease啪Seand J Gas-troenterol，2005，40(5)：501-50783 Chunyi Yin，Hoa N Dang，Farzad Gazer，et a1Mouse salivary glandsand human 13-defensin-2 as a study model for antimicrobial genetherapy：technical considerations啪Int J Antimicrob船euts2006，28“)：352360D Bullard Rs，Gibmn W，Bose SK，et a1Functional analysis of the hostdefense peptide Human Beta Defensin-I：new insight into its poten-tial role in cancer口Mol Immunol，2008，45(3)：839848收稿日期：2008-07一ll
