1、国际检验医学杂志2010年9月第3l卷第9期Int J LabMed，September 2010，Vo131，No9 假丝酵母菌对解脲脲原体检测的干扰分析 冯长海，张莺莺，康青青，王小青，王薛峰 (昆山宗仁卿纪念医院检验科215300) 957 临床研究 【摘要】 目的 通过对女性分泌物及其中分离的假丝酵母菌进行支原体培养，探讨假丝酵母菌是否对解脲脲原体检测产生 干扰及支原体黏附假丝酵母菌的条件。方法 将女性分泌物及其中分离的假丝酵母菌进行支原体培养，制备第1代、第10代菌 株及支原体阳性培养液和阴性培养液，交叉混匀后作为标本进行支原体的检测。结果445份标本中，阳性培养液中分离出假丝 酵母
2、菌的标本5份，其中仅1份第1代假丝酵母菌检测呈阳性但第1o代菌呈阴性结果，1份第1代和第10代假丝酵母菌均呈阳 性结果。第1o代假丝酵母菌和支原体培养液混合培养后，分离的假丝酵母菌支原体检测均阴性。结论 假丝酵母菌对解脲脲原 体的定性检测不产生干扰，但对解脲脲原体的部分药敏试验结果可产生干扰，解脲脲原体黏附假丝酵母菌需特定的条件。 【关键词】酵母菌； 解脲支原体； 实验室技术和方法 DOI：l03969jissn1673413O2O100902l 中图分类号：R4465；R3753 文献标识码：A 文章编号：1 6734130(201 0)09957 02 The Interference o
3、f Candida Krusei on Detecting Ureaplasma Urealyticum FENG Chang hai，ZHANG Yingying，KANG Qingqing，et a1 (Clinical laboratory，Zong Ren Qing memorial hospital，Kunshan，Jiansu，215300，China) AbstractObjective To study whether the eandida kruseis could effect the detecting of ureaplasma urealyticum，and the
4、 re quired condition of interferenceMethods Candida kruseis separated from female secretion were used to detect mycoplasma，then lst、lOth generation candida kruseis were preparedAfter mixed with positive and negative mycoplasma culture solution，the myco plasma was detected as specimenResults Of 445 s
5、peeimem，5 strains of candida kruseis were separated from positive mycoplasma cuture fluidsOnly one strain of candida kruseis were positive in the 1 st generation but negative in the 1 0th generation，another strain both were positive in the 1st and 10th generationAfter mixed cultured the 10th generat
6、ion candida kruseis and mycoplasma， both the candida kruseis and mycoplasma were detected as negativeConclusion Candida kruseis couldn t interfere the qualitative test of ureaplasma urealyticum，but it could interfere the drug sensitive test of ureaplasma urealyticum with specified condition Key word
7、s yeast； ureaplasma urealyticum；laboralory techniques and procedures 解脲脲原体是女性泌尿生殖道的常见微生物，和妇女不 孕、自发性流产、产后子宫内膜炎及细菌性阴道炎密切相关，还 可导致新生儿肺炎、菌血症和脑膜炎 。解脲脲原体液体培 养法 是实验室常用的检测方法，通过显色反应判断解脲脲 原体的有无和药敏结果，但不能完全排除其他微生物对结果产 生的干扰。我们对来本院就诊的非淋球菌性阴道炎(宫颈炎) 女性患者分泌物标本进行支原体培养，探讨假丝酵母菌是否对 液体培养法检测解脲脲原体产生干扰。 资料与方法 1研究对象 收集2009年16
8、月于本院妇科就诊的 疑似非淋球菌性阴道炎(宫颈炎)患者的宫颈管分泌物标本， 共计445例，患者年龄范围为165O岁。 2标本采集 以无菌棉拭子插入女性宫颈管2030 cm处，轻轻旋转2-3圈，停留510 S后取出，取样拭子不可 碰到阴道壁，采集后立刻送检。 3试剂 IST 2支原体培养及药敏试剂盒(梅里埃，法 国)、API AUX板条(梅里埃，法国)，血平板(科玛嘉，中国)、沙 保罗平板(科玛嘉，中国)、MH平板(科玛嘉，中国)，药敏纸片 (OXIOD，英国)：环丙沙星、氧氟沙星、红霉素、四环素、阿齐霉 素、交沙霉素、克拉霉素。 4支原体培养及药敏检测 严格按试剂盒说明书执行， 并增加了下述步
9、骤，即在支原体培养和药敏检测程序的基础 上，将24 h或48 h培养阳性的培养液以无菌操作方式吸取2o I 转种到血平板，35过夜培养。若分离出假丝酵母菌，则 将假丝酵母菌传代、在一3O冰箱中反复冰融，取第1代和第 10代菌株备用；常规方法、API AUX板条鉴定第l代假丝酵 母菌，并在MH平板上做上述药物的药敏试验；将第1代或 和第10代假丝酵母菌作为标本，用新的IST 2支原体培养及 药敏板条进行检测，结果判读时问同原标本；随机选取假丝酵 母菌产生阳性和阴性支原体检测结果的原培养液各1份， 4 000 rmin离心半径105cm，离心30 min取上清液，经上法 证实无假丝酵母菌且支原体检
10、测结果阳性后，命名为A液、B 液备用(A液中支原体可能具黏附假丝酵母菌的功能，B液中 支原体不黏附样本中的假丝酵母菌)；将第10代的假丝酵母菌 (支原体培养阴性)分别接种在2O I A液、B液，混匀后作为 标本进行支原体的检测，若检测结果阳性，再次分离假丝酵母 菌，重复步骤3)。 结 果 1445份标本中，解脲脲原体检测阳性结果264份但从 阳性培养液中分离出假丝酵母菌的标本仅5份，鉴定显示均为 白色假丝酵母菌。其中3份培养液中分离的白色假丝酵母菌 分纯后不能使新的IST 2支原体板条呈阳性结果，1份第1代 白色假丝酵母菌检测呈阳性但第10代菌呈阴性结果，1份第1 代和第10代白色假丝酵母菌均
11、呈阳性结果。 22株支原体检测呈阳性的白色假丝酵母菌KB法药敏 试验均表现为耐药，MIC法药敏结果和原标本(支原体+白色 958 国际检验医学杂志2010年9月第31卷第9期Int J LabMed，September 2010，Vo131，No9 假丝酵母菌)的药敏结果见表1(仅列出有差异的部分药物)。 表1 原标本中微生物及其分离的假丝酵母菌药敏结果 注：0为原标本中微生物，可能主要是支原体+假丝酵母菌；1为第 1代假丝酵母菌；10为第1O代假丝酵母菌。R为耐药；I为中度敏感；S 为敏感。 3第1O代假丝酵母菌(支原体培养阴性)和A液、B液混 合培养后，分离的假丝酵母菌作为标本进行支原体检
12、测，检测 结果均为阴性。 讨 论 解脲脲原体和白色假丝酵母菌均可寄生在妇女的阴道黏 膜细胞上，作为阴道的正常菌群或机会致病菌存在，也可导致 感染性疾病l6 ，治疗二者引起的感染须选择不同的抗感染药 物。由于抗真菌药物和抗支原体药物的作用机制不同，抗解脲 脲原体的药物一般不能杀灭真菌，抗真菌的药物也不一定能杀 灭解脲脲原体，因此要做到有目的性地选择药物，检测解脲脲 原体并排除其他病原微生物对检测结果的干扰非常重要。本 实验KB法药敏试验结果表明，IST 2支原体培养板条选择的 药物对白色假丝酵母菌并不能产生杀灭或抑制作用，符合真菌 对非抗真菌药物的耐受机制。一般而言，白色假丝酵母菌在对 自身没有
13、杀伤作用的培养基中，或者生长，在IST 2支原体培 养板条上全部呈现阳性结果(偶尔也会因白色假丝酵母菌不水 解尿素株，板条上全部呈现阴性结果)；或者不生长，在IST 2 支原体培养板条上全部呈现阴性结果。但是本研究结果并非 如此，2株白色假丝酵母菌仅呈现部分抗生素耐药(表1)，显然 支原体检测阳性结果并非白色假丝酵母菌造成。解脲脲原体 属细胞外寄生的微生物，可通过其特殊结构黏附于易感宿主细 胞膜表面的受体上，达到寄生的目的。2株白色假丝酵母菌产 生的阳性结果，很可能是该酵母菌上寄生有或黏附着解脲脲原 体(需继续追踪)。264份阳性标本中仅5份标本分离出株白 色假丝酵母菌，且均未能使IST 2支
14、原体培养板条全部呈现阳 性结果，进一步表明，本实验室从宫颈分泌物中收集的假丝酵 母菌对解脲脲原体的定性结果不产生影响。 一般来说，反复冻融可造成支原体细胞内水分被胞外冰结 晶吸收，电解质浓缩和蛋白质变性，导致支原体死亡。由于真 菌具有较厚的细胞壁，其对反复冻融的抵抗力可能高于支原 体，我们试图运用反复冻融的方法，验证可产生解脲脲原体检 测阳性结果的白色假丝酵母菌上是否黏附着解脲脲原体，菌株 05089(1)解脲脲原体检测结果阳性，0508 9(10)检测结果阴 性，表明菌株05089(1)上可能黏附有解脲脲原体(需继续研 究)，反复冻融可杀死解脲脲原体。但是，菌株02238(1)、 0223-
15、8(10)均出现支原体检测阳性结果，表明反复冻融分离解 脲脲原体和假丝酵母菌的方法并不完善，可能是菌株间的差 异，导致解脲脲原体不能通过此法分离；或者假丝酵母菌可干 扰反复冻融对解脲脲原体的损害；或者某些解脲脲原体已寄生 在假丝酵母菌内，反复冻融无法达到便其分离解脲脲原体的目 的。有趣的是，原标本的药敏结果和可能携带解脲脲原体的假 丝酵母菌的阳性结果不完全一致(表1)，也就是说，游离的解 脲脲原体和黏附在假丝酵母菌上的解脲脲原体对部分药物的 耐受程度不同，推测是受到了假丝酵母菌的干扰。 解脲脲原体黏附假丝酵母菌的体外试验结果显示，从原标 本中分离的不能黏附假丝酵母菌的解脲脲原体在体外不能黏 附
16、在假丝酵母菌上；从原标本中分离的可黏附于假丝酵母菌二 解脲脲原体在体外也不能黏附于假丝酵母菌上，即使是原标本 中的假丝酵母菌。这说明，解脲脲原体黏附在假丝酵母菌上是 个复杂的过程，并非简单的接触就可达到，黏附需特定的条件。 综上所述，本研究发现，由本实验室检出的假丝酵母菌对 解脲脲原体的定性检测不产生干扰，但对解脲脲原体的部分药 敏试验结果可产生干扰，假丝酵母菌对解脲脲原体药敏结果产 生干扰可能与其表面黏附有解脲脲原体有关。 参考文献 Waites KB，Katz B，Schelonka RI Mycoplasmas and Ure aplasmas as neonatal pathogens
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