1、RENJI HOSPITAL, SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY SCHOOL OF MEDICAINE DEPARTMENT OF HEMATOLOGY CHEN FANGYUAN,实 验 诊 断 学 (Laboratory diagnostics),绪 论,概念：是涉及多学科的一门临床边缘学科，是根据临床检验所得的结果 或数据，结合临床相关资料和其他辅助检查，进行逻辑的分析和综合 的思维，最后为诊断疾病、科学研究和人群保健提供客观依据。,实 验 诊 断 学 发 展 史,临床血液学实验诊断发展史 1673年Leeuwenhook显微镜 19世纪末Ehrlick and
2、 Romanowsky染色技术 1929年骨髓穿刺针 1900年红细胞ABO血型 1930年中性粒细胞趋化、吞蚀和杀菌功能 1910年单核细胞吞蚀功能 1882年、1923年血小板血小板止血、修复、黏附、聚集功能,实 验 诊 断 学 发 展 史,临床化学实验诊断发展史 临床微生物学实验诊断发展史 临床免疫学实验诊断发展史,实验诊断学的现状与发展,仪器的自动化 试剂的多样化 方法的标准化 床边检验(point of care test),实验诊断学的现状与发展,分子生物学技术的应用 polymerase chain reaction, PCR. 体外扩增技术 DNA芯片 标准化和质量控制 循证检
3、验医学的崛起(evidence based laboratory medicine, E-BLM),实验诊断学的应用,疾病的诊断和鉴别诊断 疗效的观察和预后的判断 预防疾病提供资料 临床科研,绪 论,实验诊断的局限性和对策：只能反映生理和病理时的变化对策： 动态观察结果各种检测方法灵敏度、特异性有限对策： 综合分析结果,主要内容,血液一般检查红细胞、血红蛋白白细胞及分类 红细胞比容、血沉 血小板 血细胞分析仪,血 液（blood）血细胞（45%）：红细胞 （erythrocyte ,red blood cell）白细胞（leukocyte,white blood cell）血小板(blood
4、platelet,thrombocyte)血浆（plasma） （55%),概述,红细胞,白细胞,血小板,淋巴,骨髓,血细胞发生,血 液 一 般 检 查,血 浆 (plasma) 中 性 neutrophil 血 液 红 细 胞 粒 细 胞 酸 性 eosinophil碱 性 basophil有 形 成 分 白 细 胞 单核 细 胞 monocyte血 小 板 淋 巴 细 胞 lymphocyte,血 液 一 般 检 查(blood routine test),红细胞的检测 RBC 起 源：造 血 干 细 胞 红 系 祖 细 胞原 始 早 幼 中 幼 晚 幼网 织RBC 成 熟RBC,红细胞系
5、的发生 造血祖细胞(hemopoietic progenitor) 原红细胞（proerythroblast） 早幼红细胞(prorubricyte)：血红蛋白出现 中幼红细胞(polychromatophilic erythroblast) 晚幼红细胞(normoblast)：脱去细胞核 网织红细胞(reticulocyte) 成熟红细胞(erythrocyte),Blood routine test-RBC and HB,RBC(x1012/L) Hb(g/L)成 人 男 性 4.05.5 120160成 人 女 性 3.55.0 110150新 生 儿 6.07.0 170200,Blo
6、od routine test-RBC and HB,RBC 及Hb 增 多： 成 年 男 性: RBC6.0 x 1012/L Hb17 0 g/L 成 年 女 性: RBC 5.5 x 1012/LHb16 0 g/L,Blood routine test-RBC and HB,RBC 及Hb 增 多： 相对增多： 血浆容量减少 绝对增多： 生理性增多：胎儿、新生儿、高原地区病例性增多：(1) 继发性红细胞增多症(2) 真性红细胞增多症 (polycythemia vera),Blood routine test-RBC and HB,RBC 及Hb 减 少：成 年 男 性： Hb120g
7、/L成 年 女 性： Hb110g/L孕 妇： Hb100g/L,Blood routine test-RBC and HB,RBC 及Hb 减 少贫 血 程 度 Hb轻 度 90110g/L中 度 8960g/L重 度 5930g/L极 重 度 30g/L,Blood routine test-RBC and HB,RBC 及Hb 减 少 生 理 性婴 儿、儿童老 年妊 娠 中、 后 期,Blood routine test-RBC and HB,RBC 及Hb 减 少 病 理 性 红细胞生成减少 造血干细胞异常 红系祖细胞问题 DNA合成障碍 血红蛋白合成障碍,Blood routine
8、test-RBC and HB,RBC 及Hb 减 少 病 理 性 红细胞破坏增多 红细胞内在异常膜缺陷、酶缺陷、珠蛋白生成异常、PNH 红细胞外在异常免疫性、机械性、化学与物理、感染、脾功能亢进 红细胞丢失,红细胞检测 RBC 形 态 学 改 变,正常红细胞(normocyte,normochromic),红细胞检测RBC 大小色素异常,小 红 细 胞(microcyte)低色素性(hypochromic),红细胞检测RBC 大小色素异常,大 红 细 胞(macrocyte)巨 红 细 胞(megalocyte) 高色素性(hyperchromic),红细胞检测RBC 大小色素异常,红 细
9、胞 大 小 不 等(anisocytosis)嗜 多 色 素 性(polychromatic),红细胞检测RBC形态异常,球 形 细 胞(spherocyte)椭 圆 形 细 胞(elliptocyte)口 形 细 胞(stomatocyte)靶 形 细 胞(targetcell),红细胞检测RBC形态异常,镰 形 细 胞(sickle cell)泪 滴 形 细 胞(dacryocyte)棘 形 细 胞(acanthocyte)红 细 胞 缗 钱 状 形 成(rouleaux formation),红细胞检测RBC结构异常,嗜 碱 性 点 彩(basophilic stippling) How
10、ell-Jolly 小 体 Cabot 环有 核 红 细 胞(nucleated erythrocyte),红细胞的检测,红细胞比容测定(Hematocrit, Hct)Hct 又 称 红 细 胞 压 积(Packed cell volume, PCV)是 指 红 细 胞 在 血 液 中 所 占 的 容 积 比 值。,红 细 胞 比 容,原 理： 取 静 脉 抗 凝 血， 在 一 定 条 件 下 离 心 沉 淀，测 出 红 细 胞 在 全 血 中 所 占 的 百 分 比 率。正 常 值： 成 年 男 性 40%50%成 年 女 性 37%48%,红 细 胞 比 容 临 床 意 义,Hct 增
11、高: 红 细 胞 相 对 增 多血 液 浓 缩红 细 胞 绝 对 增 多 真 性 红 细 胞 增 多 症 Hct 减 低：各 种 贫 血,红 细 胞 平 均 值 参数,平均红细胞容积(mean corpuscular volume, MCV) 每个红细胞的平均体积，以fl(飞升)为单位Hct(L/L)MCV = flRBC count(x1012/L)normal range：80100 fl,红 细 胞 平 均 值 参 数,平均红细胞血红蛋白量(mean corpuscular hemoglobin, MCH)每个红细胞内所含血红蛋白量，以pg(皮克)为单位 Hb(g/L)MCH = pgR
12、BC count(x1012/L)normal range：2734 pg,红 细 胞 平 均 值 参 数,平均红细胞血红蛋白浓度 (mean corpuscular hemoglobin concentration, MCHC)指每升血液中平均所含血红蛋白的浓度Hb(g/L)MCHC = g/LHct(L/L)normal range：320 360g/L (32% 36%),贫 血 的 细 胞 形 态 血 分 类,贫血形态学 MCV MCH MCHC 病 因正常细胞 80100 2734 3236 再障, 急性失血， 溶贫，骨髓病性；大红细胞 100 34 3236 巨幼贫小细胞 80 2
13、7 3236 慢性炎症，肾性；小细胞低 80 27 32 缺铁性,珠蛋白生成障碍 色素 铁粒幼细胞性，慢性失血,网 织 红 细 胞 测 定,网 织 红 细 胞(reticulocyte) 是 晚 幼 红 细 胞 到 成 熟 红 细 胞 之 间 的 一 个 阶 段， 其 胞 浆 中 残 有RNA， 可 经 活 体 染 色 显 示 网 状 结 构。正 常 值：成 人 0.5% 1.5% 绝对值 (2484)x109/L新生儿 2% 6%,人血涂片示网织红细胞 (煌焦油蓝染色),网 织 红 细 胞 临 床 意 义,判断骨髓红系造血功能增高： 红系造血旺盛减少： 造血功能减低 作为贫血治疗的疗效判断和
14、治疗性试验的观察指标 作为病情观察的指标,白 细 胞 及 白 细 胞 分 类,WBC ( x 109/L)成 人 410新 生 儿 15206 月2 岁 1112,白 细 胞 及 白 细 胞 分 类,WBC DC(%)中 性 粒 细 胞(Neutrophil, N) 5070嗜 酸 性 粒 细 胞(Eosinophil, E) 0.55嗜 碱 性 粒 细 胞(Basophil, B) 01淋 巴 细 胞(Lymphocyte, L) 2040单 核 细 胞(Monocyte, M) 38,白 细 胞 及 白 细 胞 分 类,白 细 胞 增 多 WBC10 x 109/L白 细 胞 减 少 WB
15、C4.0 x 109/L中 性 粒 细 胞 减 少 症 NC1.5 x 109/L中 性 粒 细 胞 缺 乏 症 NC0.5 x 109/L,中性粒细胞,造 血 干 细 胞 粒 系 祖 细 胞原 粒 早幼粒 中幼粒 晚幼粒杆状核 分叶核,粒细胞系的发生原粒细胞（myeloblast） 早幼粒细胞(promyelocyte)：出现嗜天青颗粒和特殊颗粒 中幼粒细胞(myelocyte) 晚幼粒细胞(metamyelocyte) 成熟粒细胞(granulocyte),中性粒细胞模式图（示杆状核演变至5叶核）,中 性 粒 细 胞 增 多,生理性增多：饱餐、 情绪激动、剧烈运动、 高温、严寒、 月经期、
16、 妊娠病理性增多：反应性增多异常增生性,中 性 粒 细 胞 反 应 性 增 多,急 性 感 染轻 度 中 度 重 度 极 重 度 WBC(x109/L) N 1020 20 N 或 NC(%) NC 左 移 (-) 轻 度 明 显 极 明 显 机 体 反 应 良 好 良 好 良 好 感 染 性 中 毒 性 休 克,中 性 粒 细 胞 反 应 性 增 多,广 泛 组 织 损 伤 或 坏 死急 性 溶 血急 性 失 血急 性 中 毒恶 性 肿 瘤( 非 造 血 系 统 恶 性 肿 瘤),中 性 粒 细 胞 异 常 增 生 性 增 多,粒 细 胞 性 白 血 病急 性 髓 细 胞 白 血 病慢 性
17、粒 细 胞 白 血 病骨 髓 增 殖 性 疾 病真 性 红 细 胞 增 多 症原 发 性 血 小 板 增 多 症骨 髓 纤 维 化,中 性 粒 细 胞 减 少,感染性疾病： 病毒性 流感、 麻疹细菌性 伤寒、 副伤寒血液系统疾病： 再障、粒细胞减少、恶组、非白血性白血病慢性理化损伤： 电离辐射、 化学药品自身免疫性疾病：SLE脾功能亢进,中性粒细胞核象变化 核左移 杆状核或之前细胞,轻 度 中 度 重 度 (%) 6 1025 25 伴 随 细 胞 少量晚幼粒 中幼粒 少量早幼粒原粒意义： 急 性 化 脓 性 感 染， 急 性 中 毒， 急 性 溶 血,中性粒细胞核象变化 核右移核分叶过多(
18、5叶),意 义： 巨幼细胞性贫血 抗代谢药物治疗后 疾病预后不良,中性粒细胞模式图（示杆状核演变至5叶核）,中 性 粒 细 胞 形 态 异 常,中毒性的变化 细胞大小不均： 化脓性炎症 中毒性颗粒： 化脓性感染、 大面积烧伤 空泡形成： 严重感染 核变性(固缩、 溶解、 碎裂),中 性 粒 细 胞 形 态 异 常,巨多分叶核NC巨幼贫、 药物棒状小体(Auer小体)急粒、 某些急单,嗜酸性粒细胞 (Eosinophil),绝 对 值 0.5 x 109/L,嗜 酸 性 粒 细 胞 增 多,过敏性疾病 寄生虫病 皮肤病 血液病 传染病 恶性肿瘤,嗜 酸 性 粒 细 胞 减 少,伤寒，副伤寒初期
19、大手术，烧伤 长期应用肾上腺皮质激素,嗜 碱 性 粒 细 胞,绝 对 值 0.15 x 10 9/L,嗜 碱 性 粒 细 胞 增 多,过敏性疾病 血液病 慢性粒细胞白血病 嗜碱性粒细胞白血病 骨髓纤维化 恶性肿瘤 其他 内分泌疾病、某些传染病,淋巴细胞(Lymphocyte),淋 巴 细 胞(Lymphocyte),比 例(%) 寿 命 功 能 T-cell 5070 长,数 月 至 年 细 胞 免 疫B-cell 1530 短, 45 天 体 液 免 疫,淋 巴 细 胞 增 多,生理性： 婴幼儿至67岁病理性： 病毒感染 急性传染病恢复期 淋巴细胞恶性疾病 组织移植后的排移反应,淋 巴 细
20、胞 减 少,应用肾上腺皮质激素烷化剂发射线免疫缺陷性疾病,异 形 淋 巴 细 胞, 型 (泡 沫 型/ 浆 细 胞 型)型 (不 规 则 型/ 单 核 细 胞 型)( 幼 稚 型),异 形 淋 巴 细 胞,意 义：病 毒 感 染药 物 过 敏输 血、 血 透 或 体 外 循 环 后免 疫 性 疾 病,单 核 细 胞(Monocyte),单核细胞增多：感染： 疟疾、 黑热病、 结核病、SBE血液病： 单核细胞白血病、 恶组急性感染的恢复期单核细胞减少： 无意义,血小板检测,血小板计数(platelet count，BPC or PLT) 正常值：100300 x 109/L 血小板平均容积(me
21、an platelet volume，MPV) 正常值： 711fl 代表单个血小板的平均体积,血小板形态,红细胞,血小板,血小板,血小板形态变化,红 细 胞 沉 降 率 (erythrocyte sedimentation rate,ESR),ESR 是 指 红 细 胞 在 一 定 条 件 下 沉 降 的 速 率。正 常 值： 魏 氏 法(Westergren)成 年 男 性： 015mm/h成 年 女 性： 020mm/h,血 沉,测 定 原 理：RBC 表 面 带 负 电RBC 相 互 排 斥RBC 悬 浮 于 血 浆 中RBC 沉 降 较 慢,血 沉 影 响 因 素,血浆中大分子蛋白纤
22、维蛋白原、球蛋白、免疫复合物 血浆中脂类物质胆固醇、甘油三脂 RBC数量、大小数量多，ESR; 数量少，ESR细胞大，ESR; 细胞小，ESR,血 沉 临 床 意 义,生 理 性 变 化：新 生 儿： ESR 妊 娠3 月 以 上 或 月 经 期：ESR老 年 人：ESR高 原 地 区：ESR,血 沉 临 床 意 义,病 理 性 变 化ESR炎 症 性 疾 病组 织 损 伤 或 坏 死恶 性 肿 瘤高 球 蛋 白 血 症免 疫 性 疾 病贫 血,Coulter 血 液 自 动 分 析 仪 测 定,白细胞自动化分类原理 体积分析法 体积从小到大：淋巴细胞、嗜碱性细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、中性分
23、叶核细胞 不同体积大小产生不同的脉冲信号 不同的细胞群,Coulter 血 液 自 动 分 析 仪 测 定,项 目 数 量 单 位 附 注 WBC ( 白 细 胞 ) 109/L 体积35fl RBC ( 红 细 胞 ) 1012/L Hgb ( 血 红 蛋 白 ) g/L Hct ( 红 细 胞 比 容 ) % MCV fl MCH pg MCHC g/L RDW ( 红 细 胞 分 布 宽 度 ) % 贫血的诊断有意义 plt ( 血 小 板 ) 109/L 颗粒220fl MPV( 血 小 板 平 均 体 积 ) fl 与plt 成 正 比,Coulter 血 液 自 动 分 析 仪 测
24、 定,项 目 数 量 单 位 附 注 Ly ( 淋 巴 细 胞 百 分 比 ) 体积3590fl MO ( 单 核 细 胞 百 分 比 ) 体积90160fl GR ( 粒 细 胞 百 分 比 ) 体积160450fl Ly# ( 淋 巴 细 胞 绝 对 值 ) 109/L MO( 单 核 细 胞 绝 对 值 ) 109/L GR( 粒 细 胞 绝 对 值 ) 109/L PDW ( 血 小 板 分 布 宽 度 ) % Pct ( 血 小 板 比 积 ) %,正常白细胞分布图,异常白细胞分布图,正常红细胞分布图,异常红细胞分布图,正常、异常血小板分布图,复习思考题,红细胞和血红蛋白检查的临床意义？ 红细胞形态改变表现在哪几个方面？ 白细胞分类与计数的临床意义？ 简述白细胞核象变化？ 中性粒细胞有哪些病例变化？ 异型淋巴细胞分型及临床意义？ 血沉增快的临床意义？ 贫血的形态学分类？ 红细胞平均值的意义？ 网织红细胞的计数值及临床意义？,
