1、46 蛹 中国动物检疫2010年第27卷第5期 张家口坝上地区鸡兔弓形虫病流行病学调查 崔平，方素芳，顾小龙，郭兵，孙秀梅 (河北北方学院动物科技学院，河北张家口075000) 摘要：为摸清张家口坝上地区鸡、兔弓形虫病的感染情况，采用间接血凝试验(IHA)对张家1：3坝上地区散养 鸡、笼养鸡、家兔、兔场兔的745份血清进行弓形虫血清学检测。结果表明，散养鸡阳性率66(24364)；笼养鸡阳性 率O(0120)；家兔阳性率125(22I75)；兔场兔阳性率23(286)。其中阳性散养鸡血清抗体滴度分布在1：256 有25(624)，阳性家兔血清抗体滴度分布在1：256有91(222)。 关键词：
2、张家口；鸡兔；弓形虫病；血清学；调查 中图分类号：$85133 文献标识码：c 文章编号：1005944X(2010)05004602 弓形虫病是一种世界性分布的 人畜共患寄生虫病，于细胞内寄生， 在人、畜、禽及野生动物中广泛传播。 上世纪50年代，我国陆续从猫、兔、 猪、鼠等动物体内分离出弓形虫，60 年代发现病例，70年代发生猪群弓形 虫病大流行n。张家口坝上地区猪、 羊、牛、马、驴、骡的弓形虫IHA阳性 检出率已有报道E2，近年来，关于鸡、 兔弓形虫病的发生时有报道，为此我 们于2009年对张家口坝上地区的 基金项目：张家口市科技局资助项目 (0811 O38C-11) 鸡、兔进行了弓形
3、虫的血清学检测。 1材料和方法 11 材料 111 抗原弓形虫间接血凝试验 冻干抗原，兰州兽医研究所生产，批 号为080616、090512。用于检测人和 动物血清或滤纸干血滴中的弓形虫 抗体，效价不低于1：1024。用前按标 定毫升数用灭菌蒸馏水稀释摇匀， 15002000rmin离心5一lOmin，弃去 上清液，加等量稀释液摇匀，置4左 右24h后使用。稀释后作为诊断液， 4“C左右保存，l0天内效价不变。 112标准阳性和阴性血清均为 兰州兽医研究所生产，弓形虫标准阳 性血清(效价不低于1：1024)，批号 为080411；弓形虫标准阴性血清，批 号为080411。 113被检血清鸡血清
4、随机采集 张家口坝上地区笼养和散养鸡，兔血 清采白河北北方学院动物室从张家口 坝上农户家收购的家兔及小规模兔场 饲养的兔。每个样本采血3-5mi，37 静置05一lh或2000rmin离心 5min，分离血清约15ml，置-20备 用。 陈代谢。乳房擦洗要由上至下，要尽 量做到每头牛一盆水、一条毛巾或一 次性纸巾，以防交叉感染。洗后要擦 干，废弃头3把奶瞳。 423挤奶机及其他设备的清洗消 毒。清洗要掌握4个要素：温度适 宜；足够长的时间；合适的浓度； 足够的水量和机械力。清洗程序一 般为：先用3545的温水洗净机械 内的残奶，接着用7585的05 的碱性清洗液循环清洗58min，再 用354
5、5温水循环冲净机械内残 留液，最后用食品级、浓度适宜的消 毒剂循环清洗一遍，打开各处堵塞， 放净残留液待用。一般是2天使用碱 性清洗剂清洗，1天使用酸性清洗剂 (酸性清洗剂的水温应控制在65 75，浓度为05，其它方法同上)。 每次用水量够循环就可以，水温必须 严格控制，过高或过低清洗效果均不 理想。程序制定后要持之以恒，严格 控制浓度、温度和清洗时间，只有这 样，才能将管道中的乳垢、乳石等物 质除去23，防止微生物的大量繁殖。 424做好奶厅的清洁与消毒工作。 奶厅的环境对生鲜牛乳的微生物数量 影响较大，奶厅卫生条件差，微生物数 量高，卫生条件好，鲜乳的微生物数量 少。每天挤完奶后，应及时对
6、奶厅进行 清洗消毒，保持奶厅的清洁卫生，夏季 还应作好灭蝇消毒工作。 425做好贮奶设备的维护与管理 工作。挤完奶后，应及时将生鲜牛乳 冷却至4以下，并保持，以控制微生 物的生长与繁殖，尤其是夏季更应该 注意。 5结论 检测结果表明，石河子生鲜牛乳 微生物检测合格率100，其中月平均 菌落总数除8月超过100万cfumL 外，其他各月均控制在i00万cfumL 以下；芽孢总数基本控制在200个 mL以下，耐热芽孢总数也控制在3O 个mL以下。通过观察我们发现，石 河子各牛场的菌落总数控制存在差 异，虽然都还未超标，但有的已接近 不合格判定的边缘，应进一步加强控 制，防止菌落总数的超标现象。 生
7、鲜牛乳的菌落总数与季节的 变化有关，夏季，菌落总数普遍偏高， 冬季，菌落总数普遍降低。自2009年 4月开始，菌落总数明显降低，考虑与 微生物奖励政策与管理有关。芽孢总 数随气温的变化有所波动，但与气温 的变化无相关性(PO05)。而耐热芽 孢总数相对稳定，无明显变化。 规模化牛场的生鲜牛乳微生物 检测情况明显好于养殖小区和小型 牛场，经方差分析，规模化牛场与养 殖小区及小型牛场生鲜牛乳的菌落 总数差异显著(PO05)，芽孢总数和 耐热芽孢总数差异极显著(PO01)。 安集海片区的生鲜牛乳菌落总 数最低，符合1级标准要求，其次为 莫索湾片区，再次为市区附近，下野 地片区的菌落总数最高。芽孢总数
8、和 耐热芽孢总数各片区基本一致，无明 显差别。 参考文献： I陈立法，王风波浅谈原料奶中的 微生物控制J中国乳业，2003(4)： 52 2夏冬如何控制原料奶中微生物 污染J中国乳业，2003(9)：32 中国动物检疫2010年第27卷第5期 一47 114稀释液兰州兽医研究所生 产，批号为080411、090421。 12方法主要采用间接血凝试验 (IHA)。 121加稀释液在96孔V型反应 板上，用移液器每孔加稀释液 0075ml。定性检查时，每个样品加4 孔，定量加8孔。每块板上不论检几 个样品，均应设阳、阴性血清对照，对 照均加8孔。 122加样品血清、阳、阴性对照血 清第一孔加相应血
9、清0025ml。 123稀释定性检查时稀释至第3 孔，定量检查与对照均稀释至第7 孔。定性的第4孔、定量和对照的第8 孔为稀释液对照；按常规用移液器稀 释后，取0025ml移入相应的第二孔 内，如法依次往下稀释，至应稀释的 最后一孔，稀释后每孔弃去0025ml。 每个孔内的液体量为为0075m1。 124加诊断液每孔加诊断液 0025ml，加完后将反应板置微型振 荡器上震荡卜2min，直到诊断液中的 血球分布均匀。取下反应板，盖上 块干净纸，以防落入灰尘，置2930 生化培养箱23小时后观察结果。 125判定标准阳性对照血清滴 度不低于1：1024(第5孔)，阴性对 照血清除第1孔允许存在前滞
10、现象 (+)，其余各孔均为(一)，稀释液对照 为(一)，对被检血清进行判定。待检 血清效价达到或超过1：64为阳性。 “+”为阳性终点。 2结果与分析 21 感染情况 散养鸡阳性检出率66 (24364)；笼养鸡阳性检出率0 (0120)；农户家兔阳性检出率125 (22175)；兔场兔阳性检出率23 (286)。IHA检测详细结果见表1。 表1 张家口坝上地区鸡、兔弓形虫感染情况 22不同家畜抗体滴度分布 在定性检测中IHA检测结果为 阳性的样本，进行定量检测。散养鸡 阳性血清样本抗体滴度最高达1： 256，农户家兔阳性血清样本的抗体 滴度多数在1：64。其中24份阳性散 养鸡血清中，抗体滴
11、度分布在1：256 的有6份，占25；1：64的有18份， 占75；22份阳性农户家兔血清中， 抗体滴度分布在1：256的有2份， 占911 l：64的有20份，占9091 2 份阳性兔场兔血清中，抗体滴度均分 布在1：64(见表2)。 表2定量检测中抗体滴度分布 被检 阳性血 血清 清数 1：64 百分比 1：256 百分比 散养鸡 24 18 75 6 25 农户家兔 22 2O 909 2 91 兔场兔 2 2 lOO _ _ 3讨论 31 本次调查结果表明，张家口坝 上地区的散养鸡、家兔、兔场兔均存 在不同程度的弓形虫感染，其中，散 养鸡阳性率为66，低于吕元聪 (1995年)报道的畜
12、禽平均阳性率 1628，家禽平均阳性率945E 。家 兔阳性检出率为125，低于上海市 家兔阳性检出率1424。兔场兔阳 性检出率为23，低于无锡市实验用 兔的阳性检出率74E 。 3 2随着人们生活水平提高和饮食 观念的改变，养鸡模式也在不断变 化，90年代前，人们养鸡主要是散养， 90年代后改为笼养，最近几年，农户 散养的柴鸡深受消费者青睐，与此同 时引发了许多问题，比如散养鸡的弓 形虫感染率有逐年增高的趋势，应引 起高度重视。在本次调查中，笼养鸡 没有阳性，主要是由于合理的饲养方 式切断了弓形虫病的传播途径。 33基于坝上地区农户的特殊生活 环境和养殖模式，牛、马、羊、猪、鸡、 兔混养在
13、自家小院，而且家家喜欢养 猫、养狗，对弓形虫感染、传播起到重 要作用，猫是弓形虫病的重要传染源 之一。这种养殖模式也是我们研究家 畜、家禽及人之问感染关系的天然模 式，同时应用分子生物学方法对各弓 形虫分离株问同源性和差异进行分 析比较，并结合其它因素来解释它们 之间的感染关系。 参考文献： 1王承民，何宏轩，秦建华，等河南 省新乡市郊区猪羊弓形虫病流行病 学调查J中国寄生虫学与寄生虫 病杂志，2005，23(1)：31 2崔平河北省动物弓形虫病流行 病学调查D保定：河北农业大学， 2003：31 3吕元聪我国14省部分地区畜禽 弓形虫感染流行病学调查J畜牧 兽医杂志，1995(1)：3538 4张阳根免疫金银染色法检测弓 形虫抗体J上海免疫学杂志， 1996，16：50 5林曦家畜病理学M(3版)中 国农业出版社出版，1997(3)： 260-262
