壳寡糖抑制肿瘤作用的研究.pdf

1、 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http:/ 中 国 海 洋 药 物 杂 志 。 。 年 第 期 总 第 期壳 寡 糖 抑 制 肿 瘤 作 用 的 研 究 “杜 呈 光 , 白 雪 芳 , 金 宗 涤 “ , 燕 秋 “ , 朱 正 美 “中 国 科 学 院 大 连 化 学 物 理 研 究 所 , 辽 宁 大 连 北 京 联 合 大 学 应 用 文 理 学 院 , 北 京大 连 医 科 大 学 生 化 教 研 室 , 辽 宁 大 连摘 要 本 文 通 过 对

2、几 种 寡 聚 糖 对 。 癌 细 胞 的 抑 制 作 用 试 验 , 筛 选 出 其 中 有 较 强 抑 瘤 作 用 的 壳 寡 糖 。 并 对不 同 工 艺 制 备 的 壳 寡 糖 用 体 外 抑 瘤 方 法 进 行 抑 瘤 活 性 比 较 , 结 果 表 明 种 壳 寡 糖 中 对 癌 细 胞 合 成 的 抑制 作 用 效 果 最 好 的 是 一 一 , 抑 制 率 达 。 壳 寡 糖 一 皿 一 对 多 种 肿 瘤 细 胞 体 外 的 抑 制 作 用 试 验 表 明 壳寡 糖 对 肝 癌 细 胞 有 明 显 抑 制 作 用 , 抑 制 率 平 均 达 , 高 于 顺 铂 组 及 对 照

3、 组 同 时 对 小 鼠 肝 癌 腹 水 细 胞 的 生长 也 有 一 定 的 影 响 。关 键 词 克 寡 糖 抑 制 肿 瘤中 图 分 类 号 文 献 标 识 码 文 章 编 号 一 一 一一一 , 一 , 一 , , 一。 刀 , 刀 白 ,。一 一一壳 寡 糖 具 有 多 种 优 异 的 生 理 功 能 , 它 能 肝 癌 、 宫 颈 癌 、 红 白 血 病提 高 机 体 的 免 疫 能 力 和 抗 癌 能 力 , 改 善 肠 、 淋 巴 性 白 血 病 种 人 肿 瘤 和 小道 微 生 物 的 区 系 分 布 , 刺 激 有 益 菌 的 生 鼠 肝 癌 腹 水 型 由 大 连 医 科

4、 大 学 病 理长 以 , 还 可 作 为 植 物 功 能 调 节 剂 , 刺 激 植 物 教 研 室 提 供生 长 , 增 强 植 物 对 病 虫 害 的 防 御 能 力 。 利 用 小 鼠 肝 癌 高 淋 巴 道 转 移 细 胞 系经 过 酶 降 解 及 反 应 分 离 藕 合 等 生 化 工 程 新 技 由 大 连 医 科 大 学 病 理 教 研 室 提 供术 , 采 用 不 同 工 艺 制 备 的 壳 寡 糖 , 进 行 了 抑 瘤 方 法活 性 筛 选 、 体 外 及 体 内 抑 瘤 作 用 试 验 , 试 验 方 壳 寡 糖 的 制 备法 及 结 果 如 下 壳 寡 糖 是 以 蟹

5、 、 虾 的 外 壳 甲 壳 质 几 丁材 料 与 方 法 质 , 经 脱 乙 酞 化 处 理 后 得 到 壳 聚 糖 为 原 料 ,材 料 通 过 酶 降 解 及 反 应 分 离 藕 合 等 生 化 工 程 技 术甘 露 寡 糖 由 中 科 院 微 生 物 所 提 供 制 备 而 成 。 不 同 的 制 备 工 艺 得 到 不 同 的 壳 寡磺 化 甘 露 寡 糖 由 中 科 院 微 生 物 所 提 供 糖 , 即 一 一 , 一 一 , 一 一 。壳 寡 糖 中 利 院 大 连 化 物 所 组 提 供 壳 寡 糖 的 测 定 方 法患 腹 们 毫 昆 咧 、 鼠 峨 耀 撇 朋 剔 勿 通

6、 过 盐 酸 水 解 成 游 离 氨 基 葡 萄 糖 释 出 ,昆 明 种 月 龄 雌 性 二 级 小 鼠 , 体 重 以 水 为 对 照 , 在 处 测 定 光 密 度 值 。 由中 国 医 学 科 学 院 动 物 中 心 繁 育 场 提 供 标 准 曲 线 求 出 其 氨 基 葡 萄 糖 的 含 量 川 。 基 金 项 目 国 家 科 委 “ 九 五 ” 攻 关 项 目 项 目 编 号 一 一 一 和 中 国 科 学 院 “ 九 五 ” 重 点 项 目 项 目 编 号 一 一 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing Ho

7、use. All rights reserved. http:/ 中 国 海 洋 药 物 杂 志 年 第 期 总 第 期同 位 素 掺 入 实 验 方 法由 已 接 种 患 腹 水 癌 昆 明 小 鼠只 , 无 菌 制 成 混 合 腹 水 , 染 色 , 镜 检 , 癌 细 胞, 用 液 稀 释 成 又 。实 验 分 成 本 底 、 对 照 和 实 验 等 组 , 每 个 样 品设 个 平 行 管 。 各 管 按 上 述 顺 序 加 完 后 , 混匀 , 保 温 后 , 细 胞 收 集 器 收 集 癌 细 胞于 玻 璃 纤 维 膜 、 用 冷 生 理 盐 水 洗 涤 次 , 每 次秒 钟 ,

8、间 隔 空 抽 秒 后 用 洗 涤 并固 定 细 胞 , 干 燥 , 置 于 闪 烁 杯 中 , 消 化 , 冷 却 ,各 管 加 闪 烁 液 。 一 全 自 动 液 闪仪 进 行 测 量 。 按 公 式 抑 制 率 一 对 照 管一 实 验 管 对 照 管 只 计 算 样 品 对 癌 细胞 合 成 的 抑 制 率 。壳 寡 糖 的 筛 选 方 法以 不 同 批 次 的 壳 寡 糖 一 一 一 , 一 一 一 , 一 一 一 为 原 液 、 稀 释 倍 和 稀 释倍 个 剂 量 , 除 空 白 对 照 外 , 其 余 各 组 均 设 无瘤 细 胞 组 , 最 后 计 算 抑 制 率 。动 物

9、试 验 的 剂 量小 鼠 的 等 效 剂 量 相 当 于 人 体 推 荐 剂 量 的倍 。 分 别 以 人 体 推 荐 剂 量 的 倍 、 倍 和倍 作 为 低 日 体 重 、 中日 体 重 、 高 日 体 重剂 量 。 采 取 灌 胃 法 , 每 日 灌 胃 次 , 对 照 组 灌蒸 馏 水 。 各 组 小 鼠 连 续 给 予 受 试 物 。移 植 性 肿 瘤 试 验 腹 水 瘤 的 方 法收 集 腹 腔 瘤 细 胞 悬 液 瘤 细 胞 复 苏 后接 种 于 小 鼠 腹 腔 内 , 传 代 一 次 后 一 的 动物 , 颈 椎 脱 臼 处 死 。 固 定 于 蜡 板 上 , 腹 部 皮 肤消

10、 毒 后 , 剪 开 关 剥 去 腹 部 皮 肤 。 用 消 毒 空 针 穿过 腹 部 肌 肉 , 抽 取 腹 水 , 放 入 无 菌 试 管 内 , 试管 周 围 置 冰 块 保 存 。 若 用 多 只 动 物 供 瘤 时 , 应将 腹 水 混 合 , 瘤 细 胞 计 数 结 果 。接 种 用 工 作 液 稀 释 瘤 细 胞 悬 液 至 活细 胞 数 为 护 。 在 给 予 受 试 物 后将 肿 瘤 细 胞 接 种 于 空 白 对 照 组 、 环 磷 酞 胺 对照 组 和 低 、 中 、 高 剂 量 组 小 鼠 的 腹 腔 内 , 每 只小 鼠 。 继 续 给 予 受 试 物 。 同 时 环

11、 磷酞 胺 对 照 组 腹 腔 注 射 环 磷 酞 胺 每 只 每 天。 观 察 各 组 小 鼠 的 存 活 时 间 。 本 试 验 需 重复 次 。 接 种 后 次 日 起 逐 日 记 录 体 重 , 并 观 察记 录 动 物 死 亡 情 况 。移 植 性 肿 瘤 试 验 实 体 瘤 的 方 法收 集 腹 腔 瘤 细 胞 悬 液 瘤 细 胞 复 苏 后接 种 于 小 鼠 腹 腔 内 , 传 代 一 次 后 的 动物 , 颈 椎 脱 臼 处 死 。 固 定 于 蜡 板 上 , 腹 部 皮 肤 消毒 后 , 剪 开 并 剥 去 腹 部 皮 肤 。 用 消 毒 空 针 穿 过腹 部 肌 肉 , 抽

12、 取 腹 水 , 放 入 无 菌 试 管 内 , 试 管 周围 置 冰 块 保 存 。 若 用 多 只 动 物 供 瘤 时 , 应 将 腹水 混 合 , 瘤 细 胞 计 数 结 果 。 接 种 方 法 同 上 。小 鼠 碳 廓 清 实 验 的 方 法对 每 只 小 鼠 尾 静 脉 注 射 稀 释 倍 的 印 度墨 汁 , 一 体 重 。 待 墨 汁 注 入 后 立 即记 时 。 分 别 于 注 入 墨 汁 后 、 取 血加 至 碳 酸 钠 溶 液 中 , 波 长 处测 定 光 密 度 值 , 以 碳 酸 钠 溶 液 作 对 照 。 另 取 肝脏 和 脾 脏 体 重 。 以 吞 噬 指 数 来

13、表 示 巨 噬 细 胞吞 噬 功 能 。 抑 制 肿 瘤 细 胞 生 长 的 检 测 方 法 采 用四 哇 蓝 法实 验 重 复 次 , 每 组 实 验 设 平 行 孔 , 壳 寡糖 给 药 组 剂 量 分 别 为 、 、 、 一 , 贴 壁 细 胞 于 实 验 前 一 夭 铺 板 , 悬 浮细 胞 于 实 验 当 天 处 理 。 每 孔 细 胞 数 为 火。 “ , 终 体 积 为 。 阳 性 对 照 药 物 顺 铂 浓 度为 一 。 加 药 后 培 养 , 加 及溶 解 液 , 于 比 色 测 定 , 并 根 据 吸 光 度计 算 抑 制 率 。 抖 滦 法 检 狈 壳 寡 榔 寸 一 的

14、 抑 制 率分 别 在 第 、 、 取 各 孔 的 细 胞 悬 液拼 于 载 玻 片 上 , 再 加 台 酚 蓝 染 液 拼 , 混匀 后 在 显 微 镜 下 观 察 。 核 蓝 染 的 为 死 细 胞 。 抑制 率 一 死 细 胞 数 细 胞 总 数 。结 果不 同 寡 聚 糖 对 。 癌 细 胞 的 抑 制 作 用用 寡 聚 糖 进 行 抑 瘤 试 验 , 筛 选 抑 瘤 作 用较 强 的 寡 聚 糖 , 结 果 表 明 壳 寡 糖 一 班 一 的抑 瘤 率 远 高 于 甘 露 寡 糖 和 磺 化 甘 露 寡 糖 , 壳寡 糖 的 个 处 理 中 , 浓 度 较 低 的 , 抑 瘤 率 较

15、高 , 达 到 ” 见 表 。壳 聚 糖 不 同 批 次 对 。 肿 瘤 细 胞 的 抑制 作 用 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http:/ 中 国 海 洋 药 物 杂 志 年 第 期 总 第 期娜一用 体 外 抑 瘤 方 法 对 壳 寡 糖 不 同 批 次 进 行快 速 筛 选 , 结 果 表 明 种 不 同 制 备 工 艺 的 壳寡 糖 中 对 癌 细 胞 合 成 的 抑 制 作 用 效 果最 好 的 是 一 一 , 个 浓 度 的 抑 制 率 均 达

16、到写 以 见 表 。 故 随 后 的 抑 瘤 试 验 样 品 均选 用 壳 寡 糖 一 一 。壳 寡 糖 一 班 一 抑 瘤 作 用 的 动 物 试 验表 不 同 寡 聚 枪 对 的 抑 瘤 率样 品 用 量 一 , 抑 瘤 率甘 露 寡 糖磺 化 甘 露 寡 糖 ,壳 寡 糖表 壳 聚 糖 不 同 批 次 对肿 瘤 细 胞 合 成 的 抑 制 作 用壳 寡 糖 样 品 浓 度 抑 制 率 平 均一 班 一一 一一 一壳 寡 糖 对 腹 水 瘤 小 鼠 生 存 时 间 的 影 响由 表 可 见 , 小 鼠 接 种 肿 瘤 后 , 与 对 照 组比 较 , 环 磷 酞 胺 阳 性 对 照 组 生

17、 存 时 间 延 长尸 低 、 中 、 高 剂 量 组 生 存 时 间分 别 延 长 , ,。表 口 服 壳 寡 铂 天 对 腹 水 瘤 小 鼠 生 存 时 间 的 影 响组 别 剂 量 砂 动 物 数 只 生 存 时 间 天 尸 值空 白 对 照 组 士 一低 剂 量 组 士 中 剂 量 组 一 士 “ 高 剂 量 组 士 一 ” 一阳 性 对 照 组 士 ” 注 , , 、 , 二 , , 空 白 对 照 组壳 寡 糖 对 实 体 瘤 小 鼠 瘤 重 的 影 响表 口 服 壳 寡 枪 一 孤 一 天 对 实 体 瘤 小 鼠 瘤 重 的 影 响组 别 剂 量 动 物 数 只 实 体 瘤 重

18、尸 值空 白 对 照 组 士 一低 剂 量 组 士 ” 中 剂 量 组 士 高 剂 量 组 士 ” 只 一阳 性 对 照 组 士 注 、 , , , , 空 白 对 照 组表 壳 寡 枪 对 正 常 小 鼠 的 碳 廓 清 的 影 响组 别 剂 量 动 物 数 只 尸 值空 白 对 照 组 士 一低 剂 量 组 士 中 剂 量 组 士 高 剂 量 组 一 士 表 可 见 , 小 鼠 接 种 肿 瘤 后 , 与 对 照 综 合 表 和 表 的 结 果 可 以 看 出 壳 寡 糖组 比 较 , 环 磷 酞 胺 阳 性 对 照 组 实 体 瘤 重 降 低 一 对 荷 实 体 瘤 小 蒯 中 瘤 具

19、有 明 显 抑 制 作 用 。写 尸 , 低 、 中 、 高 剂 量 组 实 体 瘤 重 壳 寡 糖 对 正 常 小 鼠 巨 噬 细 胞 吞 噬 功分 别 降 低 尸 , 尸 , 能 的 影 响。 。 表 可 见 , 经 口 给 予 小 鼠 不 同 剂 量 的 受 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http:/ 中 国 海 洋 药 物 杂 志 。 。 年 第 期 总 第 期试 物 后 , 与 对 照 组 比 较 , 各 剂 量 组 的 碳 廓清 指 数 均 无 显

20、 著 差 异 尸 。壳 寡 糖 对 小 鼠 细 胞 活 性 的 影 响表 壳 寡 糖 对 小 鼠 细 胞 活 性 的 影 响空 白 对 照 组 士低 剂 量 组 士 中 剂 量 组 士高 剂 量 组 士表 可 见 , 经 口 给 予 小 鼠 不 同 剂 量 的 受试 物 后 , 与 对 照 组 比 较 , 各 剂 量 组 的细 胞 活 性 均 无 显 著 差 异 尸 。从 表 和 表 的 结 果 可 知 壳 寡 糖 一 一对 免 疫 功 能 影 响 不 明 显 , 同 时 也 表 明 它 不 会对 小 鼠 免 疫 系 统 造 成 损 伤 。壳 寡 糖 对 多 种 肿 瘤 细 胞 休 外 的 抑

21、 制 作 用壳 寡 糖 对 肝 癌 细 胞 有 明 显 抑 制 作 用 , 抑制 率 平 均 达 , 高 于 顺 铂 组 及 对 照 组 见表 。 同 时 对 小 鼠 肝 癌 腹 水 细 胞 的 生 长 也 有一 定 的 影 响 见 图 。表 壳 寡 糖 对 种 肿 瘤 细 胞 的 抑 制 作 用吸 光 值处 理 浓 度 一 肝 癌抑 制 率肝 癌一一八叹八曰八白一厂产 八 一了口 月 盆件户任络 少一卜 口 一乃了了一了内庄洼 内卜 ,曰 匀月 了月卜 奋门 甘 刁月任嘴几合 卜心 月日 ,壳 寡 糖 组顺 铂 组对 照 组,时 问刊 卜 壳 寡 糖 卜 壳 寡 糖 奋 壳 寡 糖弓 哈 壳

22、 寡 糖 。 。 掇 一 顺 铂 书 乙 酸 州 一图 不 同 时 间 不 同 浓 度 壳 寡 糖 对 一的 抑 制 作 用下 面 图 所 示 壳 寡 糖 对 高 淋 巴 道 转 移 癌细 胞 系 一 具 有 较 强 的 体 外 杀 灭 能 力 , 一 壳 寡 糖 的 抑 瘤 能 力 强 于 一 顺 铂 一 壳 寡 糖 的 抑 瘤 能力 稍 弱 于 一 顺 铂 壳 寡 糖 的 溶 剂 乙酸 不 具 有 抑 瘤 作 用 。讨 论国 外 已 有 报 道 , 聚 合 度 为 一 的 几 丁 寡糖 对 白 鼠 的 腹 膜 渗 出 液 细 胞 具 有强 烈 反 应 , 几 丁 六 糖 和 壳 六 糖 对

23、 。 、 、一 等 癌 细 胞 的 生 长 有 完 全 的 抑 制 效果 当 肺 癌 静 脉 注 入 到 小 白 鼠 体 内 , 几丁 六 糖 具 有 抑 制 癌 细 胞 转 移 效 果 。 特 殊 工 艺处 理 , 可 去 除 单 糖 , 二 糖 等 小 分 子 , 得 到 浓 缩倍 的 高 活 性 浓 缩 液 , 主 要 组 成 为 一糖 , 糖 以 上 的 含 量 极 微 。 其 中 壳 寡 糖一 经 过 动 物 及 体 外 抑 制 瘤 试 验 , 结 果 表 明效 果 较 好 , 特 别 是 对 肝 癌 细 胞 有 明 显 抑 制 作用 , 抑 制 率 平 均 达 , 同 时 对 小

24、鼠 肝 癌 腹水 细 胞 的 生 长 也 有 一 定 的 影 响 , 对 小 鼠 的 免疫 功 能 没 有 提 高 作 用 。 因 此 根 据 试 验 结 果 , 壳寡 糖 抑 制 肿 瘤 并 不 是 通 过 提 高 动 物 的 免 疫 活性 来 实 现 , 它 的 直 接 抑 瘤 机 理 尚 不 清 楚 , 研 究工 作 正 在 进 行 之 中 。参 考 文 献 、 , 尸 、 、热 , ,仁 张 虎 , 杜 显 光 , 虞 星 炬 儿 丁 寡 糖 与 壳 寡 糖 的 制 备 和 功能 中 国 生 化 药 物 杂 志 , , 余 露 , 李 伟 , 谭 健 低 聚 糖 提 高 小 麦 抗 病 性 及 其 应 用 于防 治 小 麦 赤 霉 病 的 研 究 生 物 工 程 进 展 , , 巧 杜 显 光 , 白 雪 芳 , 虞 星 炬 , 等 寡 聚 糖 类 物 质 生 理 活 性的 研 究 仁 中 国 生 化 药 物 杂 志 , 月 从 , 己 二 , , 二收 稿 日 期 一 一二月侧班侧川