1、更昔洛韦眼用凝胶的制备及其质量控制 摘要 目的：制备更昔洛韦眼用凝胶，并建立其质量控制方法。方法：以卡波姆940NF为凝胶基质，制备更昔洛韦眼用凝胶剂；以甲醇水（595）为流动相，采用高效液相色谱法测定更昔洛韦含量。结果：制备的凝胶剂均匀，测定方法能很好地分离被测组分，被测组分在3.82415.296 g/ml范围内线性关系良好(r=0.999 9) ，平均回收率为99.7%，RSD=0.73%。结论：本文方法制备工艺简单，质量可控，有关项目符合眼用凝胶的质量要求。 关键词 更昔洛韦；眼用凝胶；制备；高效液相色谱 中图分类号R944.1 文献标识码A 文章编号1673-7210（2008）07
2、（c）-036-02 Preparation and quality control of Ganciclovir Ophthalmic Gel CAO Chun-ying1,ZHAO Xue-li2 (1.Shenyang Broadcast Television University, Shenyang 110003,China;2.School of Textile and Food,Sichuan University,Chengdu 610065,China) Abstract Objective: To prepare Ganciclovir Ophthalmic Gel with
3、 special viscosity and to establish the method for its quality control. Methods: The Carbopol 940 was used as the base of gel, preparing the compound benzoic acid gel with regular method and the drug content was determined by HPLC. Results: The preparation was stabililty and without irritation. The
4、average recovery was 99.7% and RSD was 0.73%.Conclusion: The preparation technique is simple and the method for quality control is feasible. Key words Ganciclovir; Ophthalmic gel; Preparation; HPLC 单疱病毒性角膜炎(HSK)是单纯疱疹病毒(HSV)引起的角膜炎，是一种严重的世界性致盲眼病，其发病率和致盲率均占角膜病的首位，美国每年大约有50万例患者1，我国的发病患者则更多。更昔洛韦(Ganciclo
5、vir，简称GCV)是开环核苷类药物，具有广谱抗疱疹病毒活性。GCV在体外对眼科分离的HSV的半数有效量（ED50）为0.23 mg/L2，它的有效性和耐受性在兔眼HSV性角膜炎中已得到证实3,4。GCV由于其分配系数较低（-log P=1.55）5，从而严重限制了其作为水溶液形式的应用，使频繁地给药，但在眼深部组织中难以达到有效浓度6。为了克服上述问题，我们参照有关文献7,8，研制了更昔洛韦眼用凝胶并对其质量标准进行了研究。 1 仪器与试药 1.1 仪器 LC-10AD型高效液相色谱仪(日本岛津)；SPD-10A 型紫外检测器(日本岛津)； PHs-2C型精密酸度计（上海雷磁仪器厂）；JA1
6、003电子天平（上海精科天平厂）。 1.2 药品 更昔洛韦原料(武汉武药制药有限公司，批号：20070502)；更昔洛韦对照品(武汉武药制药有限公司提供，含量为99.9%)；卡波姆940NF（美国GF.古利德公司）；甘油（天津市博迪化工有限公司）；氢氧化钠（沈阳正信高科技研究所试剂部）；氯化钠（天津市博迪化工有限公司）；所用试剂为分析纯。 2 制备方法 2.1 处方 更昔洛韦10.0 g，卡波姆940NF 4.0 g，甘油10.0 g，氯化钠8.5 g，2%氢氧化钠溶液15 ml， 羟苯乙酯0.3 g，注射用水加至1 000 ml。 2.2 制备方法 取卡波姆940 NF，加甘油，研磨，充分润
7、湿后加蒸馏水约200 ml，浸泡过夜；另取GCV，加2%氢氧化钠溶液5 ml、氯化钠8.5 g、羟苯乙酯0.3 g，加水约200 ml搅拌使溶解，再将其加入上述凝胶基质中，搅拌下用0.5 mol/L NaOH调pH至8，使成凝胶状，加入注射用水至全量，搅拌均匀，即得。 3 质量控制 3.1 性状 本品为无色透明的黏稠状液体。 3.2 黏度的测定 按2005年版中国药典附录G项下黏度测定第二法，采用旋转黏度计测定了凝胶剂的黏度。已知20水的黏度为1.003 mPas。样品的黏度范围符合眼用凝胶剂的要求，凝胶剂的黏度大，因此能够延长药液在眼中的滞留时间，促进药物吸收。结果见表1。 表1 样品黏度测
8、定结果 3.3 含量测定 3.3.1 色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 以甲醇-水（595）为流动相， 流速1.0 ml/min，柱温25，进样量为20 l，检测波长为254 nm。 3.3.2 溶液的制备 3.3.2.1 对照品溶液取干燥至恒重的更昔洛韦对照品适量， 用流动相制成每1 ml 含约10 g 的溶液， 作为对照品溶液。 3.3.2.2 供试品溶液取GCV眼用凝胶0.1 g，精密称定，加入饱和NaCl溶液20 l，搅拌，使卡波姆盐析完全，移至50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，精密量取5 ml至10 ml量瓶，流动相稀释至刻度，用0.8 m微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品
9、溶液。 3.3.3 标准曲线的制备精密称取干燥至恒重的更昔洛韦对照品适量，用流动相配制3.824、5.736、7.648、11.472、13.384、15.296 g/ml的系列标准溶液，分别量取20 l 注入色谱仪记录色谱图，以浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程C=110-5A+0.4556，r=0.999 9， 结果显示本品在3.82415.296 g/ml 浓度范围内线性关系良好。 3.3.4 精密度试验取“3.3.2”项下对照品溶液于1 d 内0、4、8、12、16 h 和连续5 d 在“3.3.1”条件下分别进样20 l， 结果日内、日间RSD分别为0.21%
10、、0.53%。 3.3.5 回收率试验精密称取更昔洛韦对照品适量置50 ml 容量瓶中，按处方比例加入空白全辅料，加流动相溶解、定容，摇匀后吸取1 ml 置于50 ml 容量瓶中，加流动相溶解、定容。精密量取续滤液20 l 进样，测定含量， 得平均回收率为97.23%，RSD=1.29%(n=6)，见表2。 表2 回收率试验结果 3.3.6 重现性试验按样品含量测定方法，测定同一批样品(批号0712021)，结果含量平均值为98.5%，RSD=1.02%(n=6)。 3.3.7 样品含量测定分别取3个批号的样品各0.1 g，照“3.3.2”制备测定溶液，按上述色谱条件，进样20 l，记录峰面积
11、，计算样品含量，经测定批号为0712021、0712022、0712023 三批样品的含量分别为标示量的98.5%、97.2%、99.1%。 3.4 刺激性试验 取体重为2.03.0 kg 健康家兔5只， 每天2次分别于每只家兔一侧眼内滴入本品，另一侧同时滴入生理盐水作对照。记录给药后6、24、48、72 h 和连续7 d 的兔眼局部反应情况，结果无发红、充血现象，表明本制剂无刺激性，眼用安全。 4 讨论 GCV本身为一溶解度较差的物质，而其钠盐易溶于水，所以用适宜浓度氢氧化钠将GCV溶解，混合卡波姆基质后调pH至8，使药物稳定。由于为眼用凝胶，因此要考虑其渗透压的影响，以氯化钠为渗透压调节剂
12、。 眼科用药的形式目前主要分为滴眼液剂、滴眼油剂、眼膏、结膜下注射和玻璃体内注射等方式。这些剂型都在某种程度上存在着一定不足，主要是由于眼睛具有流泪和眨眼反射等非常有效的保护机制，使滴入到眼内的药液迅速从角膜前区域消除，以及角膜的生物屏障作用限制药物到达眼内靶组织等原因，常规滴眼剂存在滞留时间短、生物利用度低等缺点，仅有低于5%的药物透过角膜到达眼内发挥治疗作用9,10。另外，常规滴眼剂给药量较大，大量的药物经鼻泪管进入鼻腔或消化道最终被全身吸收，增加了诱发副作用和毒性的风险。目前已经上市的GCV眼用制剂的规格（10 mg10 ml），本文研究中将GCV的浓度进一步提高并制备成眼用凝胶剂，以求
13、进一步提高疗效和降低副作用。 根据流体的切变速度随切应力的变化曲线，可将流体分为牛顿流体和非牛顿流体。凝胶剂属于非牛顿流体。在切应力较小时，不随切应力的增大而流动，到切应力增大到临界值时才开始流动。此时切变速度与切应力成一定比例变化，通过比例系数可求得黏度。考虑到制剂的给药途径为眼部给药，适当增加黏度促进药物吸收是很有必要的。因此测定其黏度就更为重要。 凝胶剂在使用HPLC方法进行含量测定中，必须要对其凝胶体系进行破坏，本文采用盐析法沉淀卡波姆，在降低高分子物质对液相系统的损害的同时保证了测定结果的准确性。 参考文献 1Colin J，Hoh HB，Easty DL，et al. Gancic
14、lovir ophthalmic gel (Virgan,0.15%) in the treatment of herpes simplex keratitisJ.Cornea，1997，16:393-399. 2Smee DF，Martin JC，Verheyden JP，et al. Antiherpesvirus avtivity of the acylic nucleoside 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl) guanineJ. Antimicrob Agents Chemother，1983，23:676-682. 3Shiota H，Naito
15、T，Mimura Y. Anti-herpes simplex virus(HSV) effect of 9-(1，3-dihydroxy-2-propoxymethyl) guanine(DHPG) in rabbit corneaJ. Curr Eye Res，1987，6:241-245. 4Simth KO，Hodges SL，Kennell WL，et al. Experimental ocular herpetic infections in rabbits:treatment with 9-2-hydroxy-1-( hydroxymenthyl)ethoxy methyl gu
16、anineJ. Arch Ophthalmol，1984，102:778-781. 5Tirucherai GS，Dias C，Mitra AK. Corneal permeation of ganciclovir: mechanism if ganciclovir permeation enhancement by acyl ester prodrug designJ. J Ocul Pharmacol Ther， 2002，18:535-548. 6Lorenzi S，DAntuono A，IorizzoM，et al. Skin rash and splinter hemorrhages
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