1、 芹菜降脂胶囊质量标准研究作者：孟青，郭晓玲，姜笑寒，冯毅凡【摘要】 目的 建立芹菜降脂胶囊的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别芹菜胶囊中的芹菜甲素、芹菜素；采用高效液相色谱法测定胶囊中二者的含量。结果 在薄层色谱中检出了芹菜甲素、芹菜素；芹菜甲素平均回收率为 98.90（n=6）,RSD=1.9；芹菜素平均回收率为 97.97（n=6 ）,RSD=1.8。结论 所建立的方法可靠、准确、专属性强，可有效控制芹菜降脂胶囊的质量。 【关键词】 芹菜降脂胶囊；芹菜甲素；芹菜素；薄层色谱法；高效液相色谱法Abstract:Objective To establish the quality stand
2、ard for Qincaijiangzhi capsules. Methods Thin Layer chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography (HPLC) were used to identify and determine butylphthalide and apigenin in Qincaijiangzhi capsules. Results Average recovery rate for butylphthalide：98.90（n=6）,RSD=1.9 ; and average rec
3、overy rate for apigenin:97.97（n=6）, RSD=1.8 . Conclusion The method was reliable, accurate and specific, and could be used in quality control of Qincaijiangzhi capsules.Key words:Qincaijiangzhi capsules; butylphthalide; apigenin ;TLC;HPLC芹菜籽为伞形科植物旱芹的干燥成熟果实，具有降血压、抗脑缺血、健脑益智、镇静催眠、抗惊厥作用13 。常用于治疗高血压症，脑卒中
4、、老年性、血管性痴呆症。其主要含有黄酮及其苷类成分、苯酞类衍生物、挥发油、香豆精类成分 4,5。其中黄酮类、苯酞类成分显主要药理活性2，3，而黄酮类成分主要为芹菜素，苯酞类成分主要为芹菜甲素、乙素。芹菜降脂胶囊是由芹菜籽超临界 CO2 提取物(芹菜油)和芹菜籽黄酮提取物加辅料按一定配比混匀制成，是一种新的预防动脉硬化的天然植物保健品。本文建立了制剂中芹菜甲素及芹菜素的 TLC 鉴别及 HPLC 含量测定方法。1 仪器与试药1.1 仪器 Waters26952996 高效液相色谱仪；BP210 D型十万分之一电子天平（德国 Sartorius 公司）。1.2 试药 芹菜甲素对照品（自制 ，批号
5、20051025，含量98.5%）、芹菜素对照品（上海友思生物技术有限公司，批号20050921，含量98.5% ）；薄层层析用硅胶 G（青岛海洋生物制品厂）；甲醇、乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯。芹菜降脂胶囊(自制，批号:070305、070306、070307)。2 薄层鉴别2.1 芹菜甲素的鉴别 取本品内容物 1 g，加石油醚50 mL,超声 (功率 360 W，频率 40 kHz)30 min，过滤，蒸干残渣,加甲醇制成 200 mg/mL 的溶液,作为供试品溶液。按处方取缺芹菜油提取物的阴性样品 1 g，同法制成阴性对照溶液；另取芹菜甲素对照品适量，加甲醇制成 1 mg/mL 的溶
6、液作为对照品溶液。吸取上述 3 种溶液各 5 L，分别点于同一硅胶 G254 板上，以石油醚乙酸乙酯（体积比 91）为展开剂，置预饱和 15 min 的展开缸内，展开，取出，晾干。在荧光 254 nm 下检视，供试品色谱中在与对照品相应的位置上显相同颜色斑点。阴性对照无干扰，见图 1。2.2 芹菜素的鉴别 取本品内容物 1 g，加甲醇 140 mL，质量分数 25盐酸 20 mL，回流提取 1 h，滤过，蒸干残渣，加甲醇制成 200 mg/mL 的溶液，作为供试品溶液。按处方取缺芹菜黄酮提取物的阴性样品 1 g，同法制成阴性对照溶液；另取芹菜素对照品适量，加甲醇制成 0.1 mg/mL 的溶液
7、作为对照品溶液。吸取上述 3 种溶液各 5 L，分别点于同一硅胶 G 板上，以苯三氯甲烷无水乙醇冰醋酸水（体积比 25.510.51）的下层溶液为展开剂，置预饱和 15 min 的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以0.8AlCl3 溶液加热至斑点显色清晰。供试品色谱中在与对照品相应的位置上显相同颜色斑点，而阴性对照无干扰，见图 2。3 芹菜甲素的含量测定3.1 色谱条件色谱柱：Waters X Bbridge C18 色谱柱（4.6 mm250 mm，5 m），流动相：甲醇水(体积比 5545)； 流速：1.0 mL/min； 检测波长：230 nm；柱温：30 ；进样量：20 L。理论塔板数以
8、芹菜甲素峰计不低于 3 000。3.2 溶液的制备3.2.1 对照品溶液的制备精密称取芹菜甲素对照品适量，加甲醇制成质量浓度为 0.890 2 mg/mL 的对照品溶液。3.2.2 供试品溶液的制备精密称取胶囊内容物 50 mg，置 10 mL 的量瓶中，加入适量甲醇溶解，超声 30 min，加甲醇定容至刻度，滤过，即得。3.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺芹菜油提取物的阴性样品，按“3.2.2”项下制备，即得。3.3 专属性试验 分别吸取芹菜甲素对照品、阴性样品及胶囊内容物供试品溶液各 20 L，依法测定。在此条件下，阴性对照对芹菜甲素测定无干扰。说明本方法专属性强，且芹菜甲素与其相邻组分峰
9、达到基线分离，理论塔板数以芹菜甲素计不低于 3 000。见图 3。3.4 标准曲线的制备 精密量取上述对照品贮备液分别用甲醇稀释制成质量浓度为8.902、35.61、89.02、106.8、142.4、178.0 g/mL 的溶液,分别进样，以峰面积 (A)对质量浓度()进行回归分析,得回归方程:A=31520 -18130,结果表明芹菜甲素在 8.902178.0 g/mL 范围内线性关系良好（r=0.999 9）。3.5 精密度试验 精密吸取质量浓度 89.02 mg/mL 对照品溶液 10 L, 重复进样 6 次，测定峰面积的 RSD 为0.7，表明精密度良好。3.6 重复性试验 精密称
10、取同一批样品内容物 6 份，按“3.2.2”项下制备。依法测定芹菜甲素的含量为 0.901%，RSD 值为1.1，结果表明方法重复性良好。3.7 稳定性试验 取同一份“3.2.2”项下供试品溶液，每隔2 h 进样，测定芹菜甲素的含量，计算 RSD 值为 0.3，表明样品溶液在 8 h 内稳定。3.8 加样回收率试验 精密称取同一批号胶囊内容物 6 份，每份 25 mg，分别加入质量浓度为 111.3 mg/mL 芹菜甲素对照品溶液 1、2、3 mL，按“3.2.2”项下制备，依法测定。测得芹菜甲素平均回收率为 98.9（n6），RSD1.9，结果见表 1。表 1 芹菜甲素加样回收率试验（略）3
11、.9 样品的测定 分别称取 3 批胶囊内容物（批号：070305、070306、070307），每批 3 份，按“3.2.2”项下制备成供试品溶液，依法测定，结果 3 批胶囊中芹菜甲素含量分别为：0.901%、0.909%、0.904%。4 芹菜素的含量测定4.1 色谱条件 色谱柱：Waters X Bridge C18 色谱柱（4.6 mm250 mm，5 m），流动相：乙腈水磷酸，按表 2 条件进行梯度洗脱；流速：1.0 mL/min； 检测波长：340 nm；柱温：30 ；进样量：20 L。理论塔板数以芹菜甲素峰计不低于 3 000。表 2 洗脱梯度条件（略）4.2 溶液的制备4.2.1
12、 对照品溶液的制备精密称取芹菜素对照品适量，加甲醇制成质量浓度为 64.03 g/mL 的对照品溶液。4.2.2 供试品溶液的制备称取胶囊内容物 50 mg，精密称定， 置 100 mL 的圆底烧瓶中，加入甲醇 7mL、25% 盐酸 1 mL，回流 1 h，水解液滤过，挥干溶剂，用甲醇定容至 10 mL 容量瓶中，滤过，即得。4.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺芹菜黄酮提取物的阴性样品，按“4.2.2”项下制备，即得。4.3 专属性试验 分别吸取芹菜素对照品、阴性样品及胶囊内容物供试品溶液各 20 L，依法测定。在此条件下，阴性对照对芹菜素测定无干扰，说明本方法专属性强。芹菜素与其相邻组分峰达
13、到基线分离，理论塔板数以芹菜素计不低于 3 000。见图 4。4.4 标准曲线的制备 精密吸取上述芹菜素对照品溶液1、2、2.5、4、6、8 mL，分别置 10 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成质量浓度为 6.403、12.81、16.01、25.62、38.42、51.22 g/mL 的溶液 ,分别进样，以峰面积 (A)对质量浓度() 进行回归分析,得回归方程: A=49523 -14689,结果表明芹菜素在 6.40351.22 g/mL 范围内线性关系良好（r=0.999 9）。4.5 精密度试验 精密吸取 16.01 g/mL 芹菜素对照品溶液 10 L,重复进样 6 次，测定峰
14、面积的 RSD 为 0.3，表明精密度良好。4.6 重复性试验 精密称取同一批样品内容物 6 份，按“4.2.2”项下制备。依法测定芹菜素的含量为 0.182%，RSD 值为1.5，表明方法重复性良好。4.7 稳定性试验 取同一份“4.2.2”项下供试品溶液，每隔2 小时进样，测定芹菜素的含量，计算 RSD 值为 1.2，表明样品溶液在 8 h 内稳定。4.8 加样回收率试验 精密称取同一批号胶囊内容物 6 份，每份 25 mg，分别加入质量浓度为 25.05 mg/mL 芹菜素对照品溶液1、2、3 mL，按“4.2.2”项下制备，依法测定。测得芹菜素平均回收率为 97.97（n6），RSD1
15、.8，结果见表 3。表 3 芹菜素加样回收率试验（略）4.9 样品的测定 分别称取 3 批胶囊内容物（批号：070305、070306、070307），每批 3 份，按“4.2.2”项下制备成供试品溶液，依法测定。结果 3 批胶囊中芹菜素含量分别为0.182%、0.174%、0.174%。5 讨 论5.1 芹菜甲素在甲醇中有很好的溶解性，本实验分别考察了超声 10、20、30、40 min 的提取效果，结果表明超声 30 min 即可提取完全。5.2 芹菜素在植物体中以多种芹菜素苷及苷元的形式存在，故需酸水解后将其转化为芹菜素苷元方可准确测定其含量。分别考察了加入不同体积比的甲醇25%盐酸（41、61、71、81）对芹菜素测定的影响，结果显示甲醇25% 盐酸（体积比 71）的提取效果最佳。【
