1、动物细胞的原代培养,组织块法,无菌室,下风口,上风口,液氮罐,安全柜,着装,操作者进入无菌室前先用肥皂洗净双手,然后用1 新洁尔灭浸泡消毒5分钟,将小白鼠断颈处死,然后用75%酒精或1 新洁尔灭浸泡消毒,迅速进入无菌室。,将小白鼠置超净工作台上,打开腹腔,用眼科剪和镊,将肾外膜剪破,并将其剥向肾门,去肾外膜及脂肪,,剪碎组织,接种组织块,移入培养箱中(注意贴有组织块的一面朝上),,静止23小时,然后将细胞培养瓶轻轻翻转,继续静止培养。,观察,2448小时后若培养液变成黄色且混浊,表示已被污染; 若培养液变成紫色,一般细胞生长不好,则培养液pH过高; 若培养液显为橙黄、橘红且清澈,一般显示细胞生
2、长良好。在相差显微镜下观察,若此时见细胞自组织边缘长出。 继续培养35日,再换部分或全部培养液,待多数组织块的生长晕相接,小心挑掉组织块,继续培养34天,细胞贴满细胞培养瓶壁时便可进行传代培养。,骨髓瘤细胞的培养,骨髓瘤细胞,消化数分钟,中止消化、吹散细胞,收集细胞、离心,计数,细胞传代,37、5CO2培养,小鼠的免疫实验,市售绵羊血,血球计数板计数,调整细胞浓度,抓小鼠的方法,腹腔注射免疫,尾静脉免疫,皮下免疫,足垫免疫,脾脏免疫1,所需器具,称重,脾脏免疫2,注射麻药,脾脏免疫3,打结固定小鼠,脾脏免疫4,酒精消毒,去毛,碘酒消毒,脾脏免疫5,剪开外皮,剪开腹膜,找到脾脏,脾脏免疫6,注射抗原,脾脏免疫7,注射双抗,缝合伤口,每隔15天重复注射作加强免疫,共重复2次,第三次免疫之后10天,将小鼠断尾取血,用ELISA方法,检测血清效价。,取脾细胞融合前3天加强免疫一次,以活化B淋巴细胞,The End,