1、ICS 11.020 C 61 WS 中 华 人 民 共 和 国 卫生 行 业 标 准 WS/T 572 2017 血清中碘 的测定 砷铈催化 分光光度 法 Determination of iodine in serum As3+-Ce4+catalytic spectrophotometry 2017-08-16 发布 2018-02-15 实施 中 华 人 民 共 和 国 国 家 卫 生 和 计 划 生 育 委 员 会 发布 WS/T 572 2017 I 前 言 本标准 按 照 GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起 草。本标准 起草 单位：中国 疾 病预防 控制 中心 地方 病
2、控 制中心、福建 省厦 门市 疾 病预防 控制 中心、山西省地方 病防 治研 究所。本标准 主要 起草 人：申红 梅、纪 晓红、张 亚平、贾 清珍、张峰 峰、刘丽 香、刘颖、黄淑 英。WS/T 572 2017 1 血 清中碘 的测定 砷铈 催化分 光光度 法 警 告：三氧 化二砷 试剂是 剧毒品！使用者 有责任 采取适 当的安 全措施。1 范围 本标准 规定 了血 清中 碘的 砷铈催 化分 光光 度法 测定 方法。本标准 适用 于血 清中 总碘 浓度的 测定。2 原理 采用高 氯酸-氯酸 钠溶 液消 化血清 样品，利 用碘 对砷 铈氧化 还原 反应 的催 化作 用：H3AsO3 2Ce4+H
3、2O H3AsO4 2Ce3+2H+反应中 黄色 的 Ce4+被 还原 成无色 的 Ce3+，碘 含量 越 高，反应 速度 越快，所剩 余的 Ce4+则 越少；控制反应 温度 和时 间，比色 测定体 系中 剩 余 Ce4+的吸 光度值，求 出碘 含量。3 仪器 3.1 消化 控温 加热 装置：恒温消 解仪（控 温点 精 度 1302，孔间 温差 1）。3.2 恒温 水浴：控 温精 度 0.3。3.3 分光 光度 计，1cm 比色 杯。3.4 玻璃 试管：15mm 100mm 或 15mm 120mm。3.5 定量 移液 器：100 L、1000 L、5000L；定量玻 璃移 液管：5mL 和1
4、0mL。3.6 秒表。3.7 恒温 干燥 箱。3.8 离心 机。4 试剂 4.1 本标 准所 用试 剂除 另 有说明 外，均为 分析 纯试 剂，实 验用 水应 符合 GB/T 6682 中二 级水 规格。4.2 高氯 酸（HClO4，70%72%），优级 纯。4.3 氯酸 钠（NaClO3，M=106.4）。WS/T 572 2017 2 4.4 浓硫 酸（H2SO4，20=1.84g/mL），优级 纯。4.5 三氧 化二 砷（As2O3，M=197.8）。4.6 氯化 钠（NaCl，M=58.4），优 级纯。4.7 氢氧 化钠（NaOH，M=40.0）。4.8 硫酸 铈铵 Ce(NH4)4(
5、SO4)4 2H2O，M=632.6 或 四水合 硫酸 铈铵 Ce(NH4)4(SO4)4 4H2O，M=668.6。4.9 碘酸 钾（KIO3，M=214.0），基 准试 剂 或 标准 物质。5 溶液配 制 5.1 氯酸 钠溶 液c（NaClO3）=2.0mol/L 称取 106.4g 氯 酸钠（4.3）溶解 于 400 mL 纯水后，再加纯 水 至 500mL，置冰箱（4）可保 存 12个月。5.2 硫酸 溶液c(H2SO4)=2.5mol/L 取 140mL 浓硫酸（4.4）缓 慢加入 到 700mL 纯水中，边加边 搅拌，冷 却后 用纯 水 稀释 至 1000 mL。5.3 亚砷 酸溶
6、 液c(H3AsO3)=0.025mol/L 称取 2.5g 三氧 化二 砷（4.5）、3.0g 氢 氧化 钠（4.7）置于 1L 的烧 杯中，加纯 水 约 30mL 搅拌至全部溶解，向 烧杯 中加 纯水 约 500mL，并加入 40.0g 氯化钠（4.6），搅 拌至 完 全溶解，再 缓慢 加入 200mL硫酸溶 液（5.2），至室 温 后用纯 水定容至 1000 mL，储于 棕色 瓶，室温 放置 可保 存 6 个 月。5.4 硫酸 铈铵 溶液c(Ce4+)=0.025mol/L 称取 15.8g 硫酸 铈铵（4.8）或 16.7g 四水合 硫酸 铈 铵Ce(NH4)4(SO4)4 4H2O
7、溶于 700mL 硫酸溶液（5.2），用纯 水定容 至 1000 mL，储于棕 色瓶，室 温 放置可 保 存 6 个 月。5.5 碘标 准储 备溶 液(I)=100 g/mL 准确称 取 经 105 110 烘干至 恒重 的碘 酸 钾 0.1686g 于 容量 瓶中，加 纯水 溶 解，并 用纯 水定 容至1000 mL。储于具塞 严密 的 棕色瓶，置 冰箱（4）可 保存 6 个月。5.6 碘标 准中 间溶 液(I)=10g/mL 吸取 10.00 mL 碘标准储备 溶液（5.5）置 于 100 mL 容量瓶 中，用 纯 水定容 至 刻度。储于 具塞 严密的棕色 瓶，置冰 箱（4）内可保 存 1
8、 个月。5.7 碘标 准使 用系 列溶 液(I)=0g/L 300g/L 使用前 吸取 碘标 准中 间溶 液（5.6）0 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL 和 3.00mL分别置 于 100 mL 容量瓶中，用 纯 水定容 至 刻度，此 标准系 列溶 液的 碘浓 度分 别为 0 g/L、50g/L、100g/L、150g/L、200g/L、250g/L 和 300g/L。WS/T 572 2017 3 6 样 品采 集和 保存 使用一 次性 真空 非抗 凝采 血管采 集不 少 于 2mL 血液，室温 静 置 0.5h 后，于 3000r/mi
9、n 离心 10min，分离出 血清 置于 具 塞 聚乙 烯 塑料 管中，严 密封 口以 防水分 蒸发。在 室温（20）下 可保 存 7d，在 4 下可保 存 1 个 月，密封 后冷 冻（-20）至 少可 保存 3 个月。7 分析 步骤 7.1 分别 取 0.10mL 碘标准使用 系列 溶液（5.7）及 血清样（如 果血 清样 的碘 浓度超 过标 准曲 线的 碘浓度范围，则 用纯 水稀 释后 取样）各置 于玻 璃试 管（3.4）中，各 管加 入 0.5mL 高氯酸（4.2）、0.6mL 氯酸钠溶 液（5.1），混匀 后置 于 130 的 消化 控温 加热 装置中，消化 120min，取 下 冷却
10、至 室温。可在 15 30 之 间一 个稳 定的 温度 环境下（室 温或 控温）进 行以下 7.2 7.4 分析 步骤，要求 温度 波动 不超 过 0.3。7.2 各管 加入 3.0mL 亚砷酸溶液（5.3），充 分混 匀 后放 置 15min，使其 温度 达到平 衡（注意 将标 准系列管按 碘浓 度由 高至 低顺 序排列）。7.3 秒表 计时，依 顺序 每 管间隔 相同 的时 间（30s 或 20s）向各 管准 确加 入 0.60mL 硫酸铈铵溶 液（5.4），立即混 匀。7.4 待第 一管（即标准 系 列中加300 g/L 碘浓度管）的吸光度 值达到0.10 左 右 时（不同 温度对 应的
11、反 应时间参考 值参见 附录A），依顺序 每管间 隔同样 时 间（与7.3 间隔 时间一致）于400nm 波长下，用1cm 比色杯，以纯 水作 参比，测 定各管 的吸 光度 值。7.5 标准 曲线 绘制：以 碘 浓度为 横坐 标，吸光 度值 对数为 纵坐 标绘 制标 准曲 线。8 结 果计 算 8.1 回归 方程 法：碘 质量 浓度 c（g/L）与吸光 度 值 A 的对 数值 成线 性关 系：见式（1），按 式（1）求出标 准 曲线 的回 归方 程，将样品 管的 吸光 度值 代入 式（1），求出 所测 样品 中 碘质量 浓度，再 按式（2）计算血 清中 碘的 质量 浓度。c a b lgA（或
12、 c a b lnA）（1）式中：C 碘 标准 使用 系列 溶液（或所 测样 品）中碘 的质 量浓度，单 位为 微克 每升（g/L）；a 标准 曲线 回归 方程 的 截距；b 标准 曲线 回归 方程 的 斜率；A 碘 标准 使用系 列溶 液（或所 测样 品）测定 的吸 光度值。WS/T 572 2017 4 8.2 标准曲 线法：以 碘 标准 使 用系列 溶液的 碘质 量浓度 为横坐 标和吸 光度 值为对 数纵坐 标，在 半对 数坐标系 中绘制 标准 曲线，以样品 管的吸 光度 值在标 准曲线 上查得 所 测 样品的 碘 质量 浓度，再式（2）计算血清 中碘 的质 量 浓 度。8.3 血清 中
13、碘 的质 量浓度，按 式（2）计 算：（I）c K（2）式中：（I）血 清中 碘（I）的质量 浓度，单 位为 微克 每升（g/L）；c 由标准 曲线查 得的或 由 标准曲线 回归方 程计算 得的 所测样品 中碘 的质量 浓度，单位 为微克 每升（g/L）；K 血 清样 稀释 倍数。9 方法特 性 9.2 检出 限和 测定 范围 本 法 检出 限为6.9 g/L（取 血 清 样量 为0.10mL），可直接取样 消化 测定0g/L 300g/L 浓 度 范 围血清碘。9.3 精密 度 在0g/L 300g/L 碘 浓度 范围内，5 个实 验室 对含 碘 低、中、高3种 浓度 的血 清 样各做6次
14、重复 测定，相对标 准偏 差为0.7%3.8%，平 均为1.7%。9.4 准确 度 在0g/L 300g/L 碘 浓度 范围内，5个 实验 室对 含碘 低、中、高3 种浓 度 的 血清 样做加 标回 收，加入碘标准 溶液，使 加标 回收 样品浓 度增 加50 g/L 100g/L，回收率为90.0%110.0%，平均 为99.8%。在本法 条件 下，溶 血和 以下 物质均 不干 扰测 定：11g/L NaCl，1.5g/L HPO42-，700mg/L KNO3，200mg/L Ca2+，365mg/L Mg2+，2mg/L F-，2mg/L Fe2+，2mg/L Zn2+，2mg/L Cu2
15、+，0.05mg/L Hg2+，2g/L 甘氨酸，10g/L 葡萄糖，3g/L 尿素，30mg/L 抗坏血酸，100g/L 蛋白。10 质量 保证 和质 量控 制 10.1 实验 环境、器 皿及 试 剂应避 免碘 污染，血清 样 品在现 场采 集、运输 和保 存过程 中应 避免 与 含 碘物品接触。WS/T 572 2017 5 10.2 样品 消化 需使 用与 恒温 消解仪 消化 孔孔 径配 套的、长度 为 100mm 或 120mm 的玻璃试 管，以使消化效 果一 致，保证 测定 准确度 和精 密度。10.3 每批 样品 消化、测 定必 须同时 设置 标准 系列。10.4 如果 室温 不稳
16、 定或 室温 较低时，应 使用 超级 恒温 水浴进 行 7.2 7.4 步 骤的 分析，温度 波动 变化不超过 0.3。10.5 标准 曲线 回归 方 程 c=a+blgA 或 c=a+blnA 的相 关系 数绝对 值应 0.999。10.6 测定 前应 检查 比色 皿空 白吸光 度的 一致 性，样品 皿与参 比皿 盛纯 水在 测定 波长下 比较，吸 光 度值差异不 超过 0.002。A WS/T 572 2017 6 附 录 A（资料 性附 录）不同温 度进 行砷 铈反 应对 应的反 应时 间 对 0 g/L 300g/L 范围血清碘的 测定，在 不同 温度 下分析 步 骤 7.4 中所 测第 一管（即 标准 系列 中加 300 g/L 碘浓度管）吸光 度值达 到 0.10 左右 时砷 铈 反应所 需时 间的 参考 值见 表A.1。表 A.1 0g/L 300g/L 范围血 清碘 的不 同温 度测 定对应 的反 应时 间 温度/反应时 间/min 温度/反应时 间/min 15 61 23 36 16 57 24 33 17 54 25 31 18 50 26 29 19 47 27 27 20 43 28 26 21 41 29 24 22 38 30 22
