1、中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B 5 0 0 9.8 42 0 1 6食 品 安 全 国 家 标 准食 品 中 维 生 素B1的 测 定2 0 1 6-0 8-3 1发 布2 0 1 7-0 3-0 1实 施中 华 人 民 共 和 国国 家 卫 生 和 计 划 生 育 委 员 会发 布G B 5 0 0 9.8 42 0 1 6 前 言 本 标 准 代 替GB/T5009.842003 食 品 中 硫 胺 素(维 生 素B 1)的 测 定、GB5413.112010 食 品 安全 国 家 标 准 婴 幼 儿 食 品 和 乳 品 中 维 生 素B 1的 测 定、GB/T76282
2、008 谷 物 中 维 生 素B 1的 测 定、GB/T9695.272008 肉 与 肉 制 品 维 生 素B 1含 量 测 定。本 标 准 与GB/T5009.842003相 比,主 要 变 化 如 下:标 准 名 称 修 改 为“食 品 安 全 国 家 标 准 食 品 中 维 生 素B 1的 测 定”;增 加 了 高 效 液 相 色 谱 法,作 为 第 一 法,将 荧 光 光 度 法 作 为 第 二 法;修 改 了 检 出 限 的 表 达,增 加 了 方 法 的 定 量 限;增 加 了 人 造 沸 石 预 处 理 中 氯 离 子 的 定 性 鉴 别 方 法;增 加 了 溴 甲 酚 绿 为
3、 指 示 剂 时,溶 液 颜 色 的 变 化 特 征;删 去 了 图1(反 应 瓶)和 图2(盐 基 交 换 管)结 构 图;增 加 了 人 造 沸 石 以 湿 重 表 示 时 的 称 取 量。G B 5 0 0 9.8 42 0 1 61 食 品 安 全 国 家 标 准食 品 中 维 生 素B 1的 测 定1 范 围本 标 准 规 定 了 高 效 液 相 色 谱 法、荧 光 光 度 法 测 定 食 品 中 维 生 素B 1的 方 法。本 标 准 适 用 于 食 品 中 维 生 素B 1含 量 的 测 定。第 一 法 高 效 液 相 色 谱 法2 原 理样 品 在 稀 盐 酸 介 质 中 恒
4、温 水 解、中 和,再 酶 解,水 解 液 用 碱 性 铁 氰 化 钾 溶 液 衍 生,正 丁 醇 萃 取 后,经C 18反 相 色 谱 柱 分 离,用 高 效 液 相 色 谱-荧 光 检 测 器 检 测,外 标 法 定 量。3 试 剂 和 材 料除 非 另 有 说 明,本 方 法 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯,水 为GB/T6682规 定 的 一 级 水。3.1 试 剂3.1.1 正 丁 醇(CH3CH2CH2CH2OH)。3.1.2 铁 氰 化 钾K3Fe(CN)6。3.1.3 氢 氧 化 钠(NaOH)。3.1.4 盐 酸(HCl)。3.1.5 乙 酸 钠(CH3COONa3H2O
5、)。3.1.6 冰 乙 酸(CH3COOH)。3.1.7 甲 醇(CH3OH):色 谱 纯。3.1.8 五 氧 化 二 磷(P 2O5)或 者 氯 化 钙(CaCl 2)。3.1.9 木 瓜 蛋 白 酶:应 不 含 维 生 素B 1,酶 活 力800U(活 力 单 位)/mg。3.1.1 0 淀 粉 酶:应 不 含 维 生 素B 1,酶 活 力3700U/g。3.2 试 剂 配 制3.2.1 铁 氰 化 钾 溶 液(20g/L):称 取2g铁 氰 化 钾,用 水 溶 解 并 定 容 至100mL,摇 匀。临 用 前 配 制。3.2.2 氢 氧 化 钠 溶 液(100g/L):称 取25g氢 氧
6、 化 钠,用 水 溶 解 并 定 容 至250mL,摇 匀。3.2.3 碱 性 铁 氰 化 钾 溶 液:将5mL铁 氰 化 钾 溶 液 与200mL氢 氧 化 钠 溶 液 混 合,摇 匀。临 用 前 配 制。3.2.4 盐 酸 溶 液(0.1mo l/L):移 取8.5mL盐 酸,加 水 稀 释 至1000mL,摇 匀。3.2.5 盐 酸 溶 液(0.01mo l/L):量 取0.1mo l/L盐 酸 溶 液50mL,用 水 稀 释 并 定 容 至500mL,摇 匀。3.2.6 乙 酸 钠 溶 液(0.05mo l/L):称 取6.80g乙 酸 钠,加900mL水 溶 解,用 冰 乙 酸 调p
7、H为4.05.0之 间,加 水 定 容 至1000mL。经0.45m微 孔 滤 膜 过 滤 后 使 用。G B 5 0 0 9.8 42 0 1 62 3.2.7 乙 酸 钠 溶 液(2.0mo l/L):称 取27.2g乙 酸 钠,用 水 溶 解 并 定 容 至100mL,摇 匀。3.2.8 混 合 酶 溶 液:称 取1.76g木 瓜 蛋 白 酶、1.27g淀 粉 酶,加 水 定 容 至50mL,涡 旋,使 呈 混 悬 状 液 体,冷 藏 保 存。临 用 前 再 次 摇 匀 后 使 用。3.3 标 准 品维 生 素B 1标 准 品:盐 酸 硫 胺 素(C 12H17ClN4OSHCl),CA
8、S:67-03-8,纯 度99.0%。3.4 标 准 溶 液 配 制3.4.1 维 生 素B 1标 准 储 备 液(500g/mL):准 确 称 取 经 五 氧 化 二 磷 或 者 氯 化 钙 干 燥24h的 盐 酸 硫 胺素 标 准 品56.1mg(精 确 至0.1mg),相 当 于50mg硫 胺 素、用0.01mo l/L盐 酸 溶 液 溶 解 并 定 容 至100mL,摇 匀。置 于04冰 箱 中,保 存 期 为3个 月。3.4.2 维 生 素B 1标 准 中 间 液(10.0g/mL):准 确 移 取2.00mL标 准 储 备 液,用 水 稀 释 并 定 容 至100mL,摇 匀。临
9、用 前 配 制。3.4.3 维 生 素B 1标 准 系 列 工 作 液:吸 取 维 生 素B 1标 准 中 间 液0L、50.0L、100L、200L、400L,800L,1000L,用 水 定 容 至10mL,标 准 系 列 工 作 液 中 维 生 素B 1的 浓 度 分 别 为0g/mL,0.0500g/mL,0.100g/mL,0.200g/mL,0.400g/mL,0.800g/mL,1.00g/mL。临 用 时 配 制。4 仪 器 和 设 备4.1 高 效 液 相 色 谱 仪,配 置 荧 光 检 测 器。4.2 分 析 天 平:感 量 为0.01g和0.1mg。4.3 离 心 机:转
10、 速4000r/mi n。4.4 pH计:精 度0.01。4.5 组 织 捣 碎 机(最 大 转 速 不 低 于10000r/mi n)。4.6 电 热 恒 温 干 燥 箱 或 高 压 灭 菌 锅。5 分 析 步 骤5.1 试 样 的 制 备5.1.1 液 体 或 固 体 粉 末 样 品:将 样 品 混 合 均 匀 后,立 即 测 定 或 于 冰 箱 中 冷 藏。5.1.2 新 鲜 水 果、蔬 菜 和 肉 类:取500g左 右 样 品(肉 类 取250g),用 匀 浆 机 或 者 粉 碎 机 将 样 品 均 质 后,制 得 均 匀 性 一 致 的 匀 浆,立 即 测 定 或 者 于 冰 箱 中
11、 冷 冻 保 存。5.1.3 其 他 含 水 量 较 低 的 固 体 样 品:如 含 水 量 在15%左 右 的 谷 物,取100g左 右 样 品,用 粉 碎 机 将 样 品粉 碎 后,制 得 均 匀 性 一 致 的 粉 末,立 即 测 定 或 者 于 冰 箱 中 冷 藏 保 存。5.2 试 样 溶 液 的 制 备5.2.1 试 液 提 取称 取3g5g(精 确 至0.01g)固 体 试 样 或 者10g20g液 体 试 样 于100mL锥 形 瓶 中(带 有 软 质 塞子),加60mL0.1mo l/L盐 酸 溶 液,充 分 摇 匀,塞 上 软 质 塞 子,高 压 灭 菌 锅 中121保 持
12、30mi n。水 解结 束 待 冷 却 至40以 下 取 出,轻 摇 数 次;用pH计 指 示,用2.0mo l/L乙 酸 钠 溶 液 调 节pH至4.0左 右,加 入2.0mL(可 根 据 酶 活 力 不 同 适 当 调 整 用 量)混 合 酶 溶 液,摇 匀 后,置 于 培 养 箱 中37过 夜(约16h);将 酶 解 液 全 部 转 移 至100mL容 量 瓶 中,用 水 定 容 至 刻 度,摇 匀,离 心 或 者 过 滤,取 上 清 液 备 用。G B 5 0 0 9.8 42 0 1 63 5.2.2 试 液 衍 生 化准 确 移 取 上 述 上 清 液 或 者 滤 液2.0mL于1
13、0mL试 管 中,加 入1.0mL碱 性 铁 氰 化 钾 溶 液,涡 旋 混匀 后,准 确 加 入2.0mL正 丁 醇,再 次 涡 旋 混 匀1.5mi n后 静 置 约10mi n或 者 离 心,待 充 分 分 层 后,吸 取正 丁 醇 相(上 层)经0.45m有 机 微 孔 滤 膜 过 滤,取 滤 液 于2mL棕 色 进 样 瓶 中,供 分 析 用。若 试 液 中 维生 素B 1浓 度 超 出 线 性 范 围 的 最 高 浓 度 值,应 取 上 清 液 稀 释 适 宜 倍 数 后,重 新 衍 生 后 进 样。另 取2.0mL标 准 系 列 工 作 液,与 试 液 同 步 进 行 衍 生 化
14、。注1:室 温 条 件 下 衍 生 产 物 在4h内 稳 定。注2:5.2.1和5.2.2操 作 过 程 应 在 避 免 强 光 照 射 的 环 境 下 进 行。注3:辣 椒 干 等 样 品,提 取 液 直 接 衍 生 后 测 定 时,维 生 素B 1的 回 收 率 偏 低。提 取 液 经 人 造 沸 石 净 化 后,再 衍 生 时 维生 素B 1的 回 收 率 满 足 要 求。故 对 于 个 别 特 殊 样 品,当 回 收 率 偏 低 时,样 品 提 取 液 应 净 化 后 再 衍 生,具 体 操 作步 骤 见 第 二 法12.1.3部 分。5.3 仪 器 参 考 条 件5.3.1 色 谱
15、柱:C 18反 相 色 谱 柱(粒 径5m,250mm4.6mm)或 相 当 者。5.3.2 流 动 相:0.05mo l/L乙 酸 钠 溶 液-甲 醇(65+35)。5.3.3 流 速:0.8mL/mi n。5.3.4 检 测 波 长:激 发 波 长375nm,发 射 波 长435nm。5.3.5 进 样 量:20L。5.4 标 准 曲 线 的 制 作将 标 准 系 列 工 作 液 衍 生 物 注 入 高 效 液 相 色 谱 仪 中,测 定 相 应 的 维 生 素B 1峰 面 积,以 标 准 工 作 液 的浓 度(g/mL)为 横 坐 标,以 峰 面 积 为 纵 坐 标,绘 制 标 准 曲
16、线。5.5 试 样 溶 液 的 测 定按 照5.3的 色 谱 条 件,将 试 样 衍 生 物 溶 液 注 入 高 效 液 相 色 谱 仪 中,得 到 维 生 素B 1的 峰 面 积,根 据 标准 曲 线 计 算 得 到 待 测 液 中 维 生 素B 1的 浓 度。6 分 析 结 果 的 表 述试 样 中 维 生 素B 1(以 硫 胺 素 计)含 量 按 式(1)计 算:X=c V fm 1000100(1)式 中:X 试 样 中 维 生 素B 1(以 硫 胺 素 计)的 含 量,单 位 为 毫 克 每 百 克(mg/100g);c 由 标 准 曲 线 计 算 得 到 的 试 液(提 取 液)中
17、 维 生 素B 1的 浓 度,单 位 为 微 克 每 毫 升(g/mL);V 试 液(提 取 液)的 定 容 体 积,单 位 为 毫 升(mL);f 试 液(上 清 液)衍 生 前 的 稀 释 倍 数;m 试 样 的 质 量,单 位 为 克(g)。计 算 结 果 以 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 算 术 平 均 值 表 示,结 果 保 留 三 位 有 效 数 字。注:试 样 中 测 定 的 硫 胺 素 含 量 乘 以 换 算 系 数1.121,即 得 盐 酸 硫 胺 素 的 含 量。7 精 密 度在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立
18、测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 得 超 过 算 术 平 均 值 的10%。G B 5 0 0 9.8 42 0 1 64 8 其 他当 称 样 量 为10.0g时,按 照 本 标 准 方 法 的 定 容 体 积,食 品 中 维 生 素B 1的 检 出 限 为0.03mg/100g,定 量 限 为0.10mg/100g。第 二 法 荧 光 分 光 光 度 法9 原 理硫 胺 素 在 碱 性 铁 氰 化 钾 溶 液 中 被 氧 化 成 噻 嘧 色 素,在 紫 外 线 照 射 下,噻 嘧 色 素 发 出 荧 光。在 给 定 的条 件 下,以 及 没 有 其 他 荧 光 物 质 干 扰 时,此
19、 荧 光 之 强 度 与 噻 嘧 色 素 量 成 正 比,即 与 溶 液 中 硫 胺 素 量 成 正比。如 试 样 中 含 杂 质 过 多,应 经 过 离 子 交 换 剂 处 理,使 硫 胺 素 与 杂 质 分 离,然 后 以 所 得 溶 液 用 于 测 定。1 0 试 剂 和 材 料除 非 另 有 说 明,本 方 法 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯,水 为GB/T6682规 定 的 二 级 水。1 0.1 试 剂1 0.1.1 正 丁 醇(CH3CH2CH2CH2OH)。1 0.1.2 无 水 硫 酸 钠(Na 2SO4):560烘 烤6h后 使 用。1 0.1.3 铁 氰 化 钾K3F
20、e(CN)6。1 0.1.4 氢 氧 化 钠(NaOH)。1 0.1.5 盐 酸(HCl)。1 0.1.6 乙 酸 钠(CH3COONa3H2O)。1 0.1.7 冰 乙 酸(CH3COOH)。1 0.1.8 人 造 沸 石。1 0.1.9 硝 酸 银(AgNO3)。1 0.1.1 0 溴 甲 酚 绿(C 21H14Br 4O5S)。1 0.1.1 1 五 氧 化 二 磷(P 2O5)或 者 氯 化 钙(CaCl 2)。1 0.1.1 2 氯 化 钾(KCl)。1 0.1.1 3 淀 粉 酶:不 含 维 生 素B 1,酶 活 力3700U/g。1 0.1.1 4 木 瓜 蛋 白 酶:不 含 维
21、 生 素B 1,酶 活 力800U(活 力 单 位)/mg。1 0.2 试 剂 配 制1 0.2.1 0.1mo l/L盐 酸 溶 液:移 取8.5mL盐 酸,用 水 稀 释 并 定 容 至1000mL,摇 匀。1 0.2.2 0.01mo l/L盐 酸 溶 液:量 取0.1mo l/L盐 酸 溶 液50mL,用 水 稀 释 并 定 容 至500mL,摇 匀。1 0.2.3 2mo l/L乙 酸 钠 溶 液:称 取272g乙 酸 钠,用 水 溶 解 并 定 容 至1000mL,摇 匀。1 0.2.4 混 合 酶 液:配 制 同3.2.8。1 0.2.5 氯 化 钾 溶 液(250g/L):称
22、取250g氯 化 钾,用 水 溶 解 并 定 容 至1000mL,摇 匀。1 0.2.6 酸 性 氯 化 钾(250g/L):移 取8.5mL盐 酸,用250g/L氯 化 钾 溶 液 稀 释 并 定 容 至1000mL,摇 匀。G B 5 0 0 9.8 42 0 1 65 1 0.2.7 氢 氧 化 钠 溶 液(150g/L):称 取150g氢 氧 化 钠,用 水 溶 解 并 定 容 至1000mL,摇 匀。1 0.2.8 铁 氰 化 钾 溶 液(10g/L):称 取1g铁 氰 化 钾,用 水 溶 解 并 定 容 至100mL,摇 匀,于 棕 色 瓶 内保 存。1 0.2.9 碱 性 铁 氰
23、 化 钾 溶 液:移 取4mL10g/L铁 氰 化 钾 溶 液(10.2.8),用150g/L氢 氧 化 钠 溶 液 稀 释至60mL,摇 匀。用 时 现 配,避 光 使 用。1 0.2.1 0 乙 酸 溶 液:量 取30mL冰 乙 酸,用 水 稀 释 并 定 容 至1000mL,摇 匀。1 0.2.1 1 0.01mo l/L硝 酸 银 溶 液:称 取0.17g硝 酸 银,用100mL水 溶 解 后,于 棕 色 瓶 中 保 存。1 0.2.1 2 0.1mo l/L氢 氧 化 钠 溶 液:称 取0.4g氢 氧 化 钠,用 水 溶 解 并 定 容 至100mL,摇 匀。1 0.2.1 3 溴
24、甲 酚 绿 溶 液(0.4g/L):称 取0.1g溴 甲 酚 绿,置 于 小 研 钵 中,加 入1.4mL0.1mo l/L氢 氧 化钠 溶 液 研 磨 片 刻,再 加 入 少 许 水 继 续 研 磨 至 完 全 溶 解,用 水 稀 释 至250mL。1 0.2.1 4 活 性 人 造 沸 石:称 取200g0.25mm(40目)0.42mm(60目)的 人 造 沸 石 于2000mL试 剂 瓶中,加 入10倍 于 其 体 积 的 接 近 沸 腾 的 热 乙 酸 溶 液,振 荡10mi n,静 置 后,弃 去 上 清 液,再 加 入 热 乙 酸 溶液,重 复 一 次;再 加 入5倍 于 其 体
25、 积 的 接 近 沸 腾 的 热250g/L氯 化 钾 溶 液,振 荡15mi n,倒 出 上 清 液;再加 入 乙 酸 溶 液,振 荡10mi n,倒 出 上 清 液;反 复 洗 涤,最 后 用 水 洗 直 至 不 含 氯 离 子。氯 离 子 的 定 性 鉴 别 方 法:取1mL上 述 上 清 液(洗 涤 液)于5mL试 管 中,加 入 几 滴0.01mo l/L硝 酸银 溶 液,振 荡,观 察 是 否 有 浑 浊 产 生,如 果 有 浑 浊 说 明 还 含 有 氯 离 子,继 续 用 水 洗 涤,直 至 不 含 氯 离 子 为止。将 此 活 性 人 造 沸 石 于 水 中 冷 藏 保 存
26、备 用。使 用 时,倒 入 适 量 于 铺 有 滤 纸 的 漏 斗 中,沥 干 水 后 称 取 约8.0g倒 入 充 满 水 的 层 析 柱 中。1 0.3 标 准 品盐 酸 硫 胺 素(C 12H17ClN4OSHCl),CAS:67-03-8,纯 度99.0%。1 0.4 标 准 溶 液 配 制1 0.4.1 维 生 素B 1标 准 储 备 液(100g/mL):准 确 称 取 经 氯 化 钙 或 者 五 氧 化 二 磷 干 燥24h的 盐 酸 硫 胺素112.1mg(精 确 至0.1mg),相 当 于 硫 胺 素 为100mg,用0.01mo l/L盐 酸 溶 液 溶 解,并 稀 释 至
27、1000mL,摇 匀。于04冰 箱 避 光 保 存,保 存 期 为3个 月。1 0.4.2 维 生 素B 1标 准 中 间 液(10.0g/mL):将 标 准 储 备 液 用0.01mo l/L盐 酸 溶 液 稀 释10倍,摇 匀,在 冰 箱 中 避 光 保 存。1 0.4.3 维 生 素B 1标 准 使 用 液(0.100g/mL):准 确 移 取 维 生 素B 1标 准 中 间 液1.00mL,用 水 稀 释、定容 至100mL,摇 匀。临 用 前 配 制。1 1 仪 器 和 设 备1 1.1 荧 光 分 光 光 度 计。1 1.2 离 心 机:转 速4000r/mi n。1 1.3 pH
28、计:精 度0.01。1 1.4 电 热 恒 温 箱。1 1.5 盐 基 交 换 管 或 层 析 柱(60mL,300mm10mm内 径)。1 1.6 天 平:感 量 为0.01g和0.01mg。G B 5 0 0 9.8 42 0 1 66 1 2 分 析 步 骤1 2.1 试 样 制 备1 2.1.1 试 样 预 处 理用 匀 浆 机 将 样 品 均 质 成 匀 浆,于 冰 箱 中 冷 冻 保 存,用 时 将 其 解 冻 混 匀 使 用。干 燥 试 样 取 不 少 于150g,将 其 全 部 充 分 粉 碎 后 备 用。1 2.1.2 提 取准 确 称 取 适 量 试 样(估 计 其 硫 胺
29、 素 含 量 约 为10g30g,一 般 称 取2g10g试 样),置 于100mL锥 形 瓶 中,加 入50mL0.1mo l/L盐 酸 溶 液,使 得 样 品 分 散 开,将 样 品 放 入 恒 温 箱 中 于121水 解30mi n,结 束 后,凉 至 室 温 后 取 出。用2mo l/L乙 酸 钠 溶 液 调pH为4.05.0或 者 用0.4g/L溴 甲 酚 绿溶 液 为 指 示 剂,滴 定 至 溶 液 由 黄 色 转 变 为 蓝 绿 色。酶 解:于 水 解 液 中 加 入2mL混 合 酶 液,于4550温 箱 中 保 温 过 夜(16h)。待 溶 液 凉 至 室 温后,转 移 至10
30、0mL容 量 瓶 中,用 水 定 容 至 刻 度,混 匀、过 滤,即 得 提 取 液。1 2.1.3 净 化装 柱:根 据 待 测 样 品 的 数 量,取 适 量 处 理 好 的 活 性 人 造 沸 石,经 滤 纸 过 滤 后,放 在 烧 杯 中。用 少 许 脱脂 棉 铺 于 盐 基 交 换 管 柱(或 层 析 柱)的 底 部,加 水 将 棉 纤 维 中 的 气 泡 排 出,关 闭 柱 塞,加 入 约20mL水,再 加 入 约8.0g(以 湿 重 计,相 当 于 干 重1.0g1.2g)经 预 先 处 理 的 活 性 人 造 沸 石,要 求 保 持 盐 基 交 换 管中 液 面 始 终 高 过
31、 活 性 人 造 沸 石。活 性 人 造 沸 石 柱 床 的 高 度 对 维 生 素B 1测 定 结 果 有 影 响,高 度 不 低 于45mm。样 品 提 取 液 的 净 化:准 确 加 入20mL上 述 提 取 液 于 上 述 盐 基 交 换 管 柱(或 层 析 柱)中,使 通 过 活 性人 造 沸 石 的 硫 胺 素 总 量 约 为2g5g,流 速 约 为1滴/s。加 入10mL近 沸 腾 的 热 水 冲 洗 盐 基 交 换 柱,流 速 约 为1滴/s,弃 去 淋 洗 液,如 此 重 复 三 次。于 交 换 管 下 放 置25mL刻 度 试 管 用 于 收 集 洗 脱 液,分 两次 加
32、入20mL温 度 约 为90的 酸 性 氯 化 钾 溶 液,每 次10mL,流 速 为1滴/s。待 洗 脱 液 凉 至 室 温 后,用250g/L酸 性 氯 化 钾 定 容,摇 匀,即 为 试 样 净 化 液。标 准 溶 液 的 处 理:重 复 上 述 操 作,取20mL维 生 素B 1标 准 使 用 液(0.1g/mL)代 替 试 样 提 取 液,同上 用 盐 基 交 换 管(或 层 析 柱)净 化,即 得 到 标 准 净 化 液。1 2.1.4 氧 化将5mL试 样 净 化 液 分 别 加 入A、B两 支 已 标 记 的50mL离 心 管 中。在 避 光 条 件 下 将3mL150g/L氢
33、 氧 化 钠 溶 液 加 入 离 心 管A,将3mL碱 性 铁 氰 化 钾 溶 液(10.2.9)加 入 离 心 管B,涡 旋15s;然 后 各 加 入10mL正 丁 醇,将A、B管 同 时 涡 旋90s。静 置 分 层 后 吸 取 上 层 有 机 相 于 另 一 套 离 心 管 中,加 入2g3g无 水 硫 酸 钠,涡 旋20s,使 溶 液 充 分 脱 水,待 测 定。用 标 准 的 净 化 液 代 替 试 样 净 化 液 重 复12.1.4的 操 作。1 2.2 测 定1 2.2.1 荧 光 测 定 条 件激 发 波 长:365nm;发 射 波 长:435nm;狭 缝 宽 度:5nm。G
34、B 5 0 0 9.8 42 0 1 67 1 2.2.2 依 次 测 定 下 列 荧 光 强 度a)试 样 空 白 荧 光 强 度(试 样 反 应 管A);b)标 准 空 白 荧 光 强 度(标 准 反 应 管A);c)试 样 荧 光 强 度(试 样 反 应 管B);d)标 准 荧 光 强 度(标 准 反 应 管B)。1 3 分 析 结 果 的 表 述试 样 中 维 生 素B 1(以 硫 胺 素 计)的 含 量 按 式(2)计 算:X=(U-Ub)c V(S-Sb)V1 fV2 m1001000(2)式 中:X 试 样 中 维 生 素B 1(以 硫 胺 素 计)的 含 量,单 位 为 毫 克
35、 每100克(mg/100g)。U 试 样 荧 光 强 度;Ub 试 样 空 白 荧 光 强 度;S 标 准 管 荧 光 强 度;Sb 标 准 管 空 白 荧 光 强 度;c 硫 胺 素 标 准 使 用 液 的 浓 度,单 位 为 微 克 每 毫 升(g/mL);V 用 于 净 化 的 硫 胺 素 标 准 使 用 液 体 积,单 位 为 毫 升(mL);V1 试 样 水 解 后 定 容 得 到 的 提 取 液 之 体 积,单 位 为 毫 升(mL);V2 试 样 用 于 净 化 的 提 取 液 体 积,单 位 为 毫 升(mL);f 试 样 提 取 液 的 稀 释 倍 数;m 试 样 质 量,
36、单 位 为 克(g)。注:试 样 中 测 定 的 硫 胺 素 含 量 乘 以 换 算 系 数1.121,即 得 盐 酸 硫 胺 素 的 含 量。维 生 素B 1标 准 在0.2g10g之 间 呈 线 性 关 系,可 以 用 单 点 法 计 算 结 果,否 则 用 标 准 工 作 曲 线法。以 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 算 术 平 均 值 表 示,结 果 保 留 三 位 有 效 数 字。1 4 精 密 度在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 得 超 过 算 术 平 均 值 的10%。1 5 其 他检 出 限 为0.04mg/100g,定 量 限 为0.12mg/100g。G B 5 0 0 9.8 42 0 1 68 附 录 A维 生 素B 1标 准 衍 生 物 的 高 效 液 相 色 谱 图 维 生 素B 1标 准 衍 生 物 的HPLC谱 图 见 图A.1。图A.1 维 生 素B 1标 准 衍 生 物 的 高 效 液 相 色 谱 图
