1、 1HCV血清学实验室能力验证报告 项目代码: HCVC435 数据上传截止日期: 2011年 11 月 30日 2 1 方法 1.1 样品组成, 制备和发放 2011 年 11 月 30 日的质评活动中，HCV 血清学实验室能力验证 （HCVC435 ） 使用了 5 份血浆样 品。 样品来自非洲、 澳洲和西太平洋地区的献血者 （表 A1 ） 。 每份样品 HCV 的反应性详情请见表 A1 和 A2 。 所有 5 份样品均为混合样品。混合样品的制备方法为：取同一国家来源，且有相同抗体谱的两种 以上的样品等体积混合。 所有的样品在分装前使用 0.2 m 的滤膜过滤。确保样品充分混匀后再分装和检测
2、。抽取一定比 例的样品在运输到参评单位后进行检测，以确定样品的稳定性。 使用了一系列的试剂和检测方法测试样品以确定样品的反应性（表 A2 ） 。 发放给参评单位 NRL0278、NRL0314 和 NRL0823 的样品在运输途中被扣留。 1.2 结果评价 1.2.1 定性评价 参评单位报告的检测数据或样品状态与相应的参考结果（表 A1 和 A2 ）进行比较。 当使用快速检测法或血凝法检测样品时，无具体检测数据 ，参评单位报告的样品反应性或无反应 性状态视为检测结果。 与相应参考结果不一致的结果解释称为不可接受的结果解释。 与相应的参考结果不一致，或某些情况下，与大多数参评 单位报告的样品状态
3、不一致的检测样品 状态称为不可接受的样品状态。 1.2.2 统计分析 应用 Tukeys 离群值过滤法挑出显著离群的结果。 离群结果是指那些与其他参评单位报告的使用相同检测方 法针对同一样品的检测结果有显著性差 异的检测数据。 有时候，NRL 的统计者可能会人工标记一些结果作为离群结果， 从而使这部分结 果不参与统计分析。这种情况仅出现于当这些结果可能影 响统计分析而出现偏差的时候，例如当 结果来自状态不好或错误的样品时。 1.2.2.1 统计分析方法之一 使用本套血清盘的目的之一为调查样品拖带污染的可能性 。为了达到这一目的，血清盘作了如下 3 设计： 抗-HCV 阳性样品 C 安排在抗-H
4、CV 阴性样品 D 之前； 参评单位在处理和报告指南中被要求按顺序检测样品，当 参评单位的阴性样品的检测结果出现以 下情况时，可认为该单位有潜在的拖带污染的可能： 反应性，但信号读数明显低于其他反应性样品，或 阴性，但信号读数较高而被认为是离群值。 2 结果 有 296 家参评单位报告了 2011 年 11 月 30 日 HCV 血清学实验室能力验证结果。 下列参评单位在截止日期前未上传检测结果： AE1008AI, NRL0041, NRL0062, NRL0095, NRL0239, NRL0484, NRL0516, NRL0622, NRL0623, NRL0626, NRL0627,
5、 NRL0629, NRL0630, NRL0801, NRL0829, NRL0834, VEQ1849, VEQ1855, VEQ1950, VEQ1987, VEQ2343, VEQ2410, VEQ2492, VEQ2530, VEQ2651, VEQ2708, VEQ2744 和 VEQ2799 。 参评单位 CITIC0044，CITIC0045 ，CITIC0048，NRL0414 和 VEQ1808 报告他们使用了过期的 试剂（CITIC 注：CITIC 参评单位不可能使用过期试剂，错误发生的原因为 CITIC 项目小组代传 数据时出错，因此，CITIC 提醒，凡需 CITIC
6、 项目小组协助上传数据的参评单位，在收到核对邮 件后， 请务必仔细核对上传数据是否正确） 。 我们不推荐使用已经超过有效使用期的试剂盒， 并要 求参评者在检测前核对试剂盒的有效期。 2.1 结果概况 各参评单位应该关注各实验室的特别报告， 以了解自身的离群结果、 不可接受结果和/ 或被人工标 记的离群结果。参评者可以参考附件 II 中的表 A3 “疑难解答”分析离群和/ 或不可接受结果的一 般原因。这些结果会进一步在第 3 部分（讨论）中阐明。 在本次质评活动中，所有检测试剂检测情况的总结列在参 评（定性和定量）统计报告中。该报告 能提供本次质评所有检测方法使用情况的比较信息。 另外，下列参评
7、单位应该参考第 3 部分对他们提交的结果进行讨论分析： CITIC0011 4 CITIC0031 NRL0032 VEQ0614 VEQ1796 VEQ1801 VEQ1980 3 讨论 参评单位 VEQ1980 在 2011 年 11 月 30 日 HCV 血清学质评结果中上传了与 2011 年 4 月 20 日 HCV 质评活动一致的检测结果， 上传的检测结果被标记为不可接受。 提示参评单位在参加质评活 动的时候，必须在检测样品时确认检测了正确的样品，以及在结果上传时确保数据正确。 假阴性/阳性结果 参评单位 VEQ0371 （使用 Roche Elecsys Anti-HCV ECLI
8、A 单次检测） 和 VEQ2343 （使用 Abbott ARCHITECT Anti-HCV CMIA 单次检测） ，两家参评单位均报告抗-HCV 阳性样品 C 的检测结果、 结果解释和 HCV 血清学状态为抗-HCV 阴性。 两家参评单位也均报告抗-HCV 阴性样品 D 的检测 结果、结果解释和 HCV 血清学状态为抗-HCV 反应性。 参评单位 VEQ2891 使用 RADIM HCV Ab EIA 单次检测，报告血清盘中所有的样品的检测结果、 结果解释和血清学状态与 2011 年 11 月 30 日 HCV 室间质评预期的结果不一致。 他们结果的模式 不同于过去 2 年所有血清盘的结果
9、，因此他们很有可能是检测了错误的血清盘。该参评单位将抗 -HCV 阳性样品 B 和 E 的检测结果和结果解释报告为抗-HCV 阴性， 以 及 HCV 阴性的样品血清血 状态。该参评单位还将抗-HCV 阴性的样品 D 报告为抗-HCV 反应性和 HCV 阳性的血清学状态。 数据输入错误 参评单位 NRL0136 报告样品 E 的 HCV 血清学状态为“阴性” ，但上传了抗-HCV 反应性的检测 结果和结果解释。 由于该参评单位对抗-HCV 阴性样品 D 无样品 HCV 血清学状态输入， 因此将抗 -HCV 阳性样品 E 的血清学状态写为阴性很有可能是由于数据输入出现错误。推测输在样品 E 下 面
10、的 HCV 阴性血清学状态应该是描述的样品 D 的血清学状态。 参评单位 VEQ2227 使用 Roche Elecsys Anti-HCV ECLIA 检测， 报告样品 B 的 HCV 血清学状态 为 “阴性” ， 但上传了抗-HCV 反应性的检测结果 （COI 为 692.4） 和结果解释。 同样， 参评单位 VEQ2300 使用 Ortho VITROS Anti-HCV Assay 检测， 报告样品 B 的 HCV 血清学状态为 “阴性” ， 5 但上传了抗-HCV 反应性的检测结果（S/Co 为 33.6 ）和结果解释。参评单位 VEQ2677 也使用 Ortho VITROS An
11、ti-HCV Assay 检测，报告样品 C 的血清学状态为“阴性”，但上传了抗-HCV 阳性的结果 （S/Co 为 33.2 ） 和结果解释。 上述实验室出现的 HCV 血清学状态不正确可能是由于 数据输入出现错误。 不适当的检测策略 下列 6 家参评单位对阴性 HCV 血清学样品未选择任何 HCV 血清学状态，但选择了错误代码 14 （ “根据目前结果不报告样品血清学状态” ） ：CITIC0011 ，CITIC0031 ，NRL0032 ，VEQ0614 ， VEQ1796 和 VEQ1801 。 参评单位 VEQ1834 使用 Ortho Vitros Anti-HCV Assay 检
12、测单次，报告抗-HCV 阳性样品 A 的检 测结果解释为不确定（S/Co 为 0.91 ）。这一结果解释被认定为不可接受的结果。该参评单位还 使用 Abbott ARCHITECT Anti-HCV CMIA 单次检测 （S/Co 为 0.05 ） 和 Chiron RIBA HCV 3.0 SIA 检测样品 A ，然而这两种试剂均报告该样品的结果解释为“阴性”。 样品的拖带污染 本次质评活动的目的之一为调查可能出现的样品拖带污染情况（参见 1.2.2.1 部分） ，假设参评单 位确实是按顺序检测样品，本次质评活动未发现样品拖带污染的证据。 6 4 附件I 表 A1. 2011年 11 月 3
13、0 日 HCV 血清学实验室能力验证样品构成 样品 HCVC435 样品来源 样品种类 HCV 状态 A 澳大利亚献血者 混合血浆 阴性 B 澳大利亚献血者 混合血浆 阳性 C 非洲献血者 混合血浆 阳性 D 澳大利亚献血者 混合血浆 阴性 E 西太平洋地区献血者 混合血浆 阳性 表 A2. 2011年 11 月 30 日 HCV 血清学实验室能力验证样品特性 样品 DiaSorin Murex anti-HCV (version 4.0) EIA Bio-Rad MONOLISA anti- HCV Plus Version 2 EIA Chiron RIBA HCV 3.0 SIA HCV
14、C435 检测结果 （S/Co*） 结果解 释 检测结果 （S/Co*） 结果解释 c100 c33 c22 NS5 结 果 解 释 HCV 状态 A 0.20 阴性 0.10 阴性 未测 无 阴性 B 7.15 反应性 10.47 反应性 + + + + 阳 性 阳性 C 7.75 反应性 10.44 反应性 + + + 不典 型 阳 性 阳性 D 0.19 阴性 0.08 阴性 未测 无 阴性 E 7.15 反应性 9.64 反应性 +/- + + + 阳 性 阳性 注：*样品 OD 值除以 Cut-off 值，1.00 为反应性 7 附件 II 表 A3. 出现离群结果和/或不可接受结果
15、的一般原因解答 错误种类 可能的原 因 样品混淆 两份或更多的样品相互混淆，结果导致每份样品都出现离群或不可接受结果。 样品混淆可能出现在样品接收的时候，也可能出现在检测过程中。 数据抄录 常见的数 据抄 录错误出 现于 ： - 两个或 更多 样品结果 混淆 ； - 输入不 正确 的结果； - 选择了 错误 的试剂或 试剂 版本； - 将数 值输在 错误的地 方( 如. OD 值输 在 S/Co 值的 地方) ； - 选择了 不正 确的结果 选项 。 为避免这 类错 误， 推荐 所有 人工抄录 或输 入DigitalPT 的 数据都应 由第2 位工作 人员 复核。 不适当的 检测 策略 - 阴
16、性样品免疫印迹检测： 由 于 样 品 可能出现 非特 异性反应 而报 告为可疑 或不 必 要的假反应性结果，筛查检测为阴性的样品不应该实施免疫印迹分析。只有筛查 为反应性 的样 品才应该 实施 免疫印迹 分析 。 - 当抗原检测阳性时未对样品开展中和试验：不开展中和试验可能会导致报告 假反应性结果。 推荐所有筛查试验反应性的样品都要进行中和试验， 以及开展其 他检测以区分真阳性和假反应性。 - 使用简单的灵敏度不够的HBsAg快速试验： 简单 的HBsAg 快速试 验通常没 有EIA 或仪器检 测方 法灵敏， 这通 常对HBsAg 低 水平的样 品出 现假阴性 结果 。 不可接受 的血 清学状
17、态 - 不正确的数据输入：当开展血清学筛查时，参评单位往往使用包括筛查、补充 试验和/ 或确 认试验在 内的 多种检测 组合 的策略 。 样品 最终的血 清学 状态 （ 最 终 解 释 ）为 “ 阳性” ， “阴性 ”或 “无法下 结论/ 不确定”则 应由所有 检测 结果（筛 查， 补充和确认） 综合考虑决定 。只使用一种方法检测样品的参评单位如果检测结果 为反应性，应该参考其他试验的结果以区分真阳性和假反应性。当在DigitalPT 中 报告最终结果 解释时，对于 那些希望对样品作更进一步的试验，而不报告样品血 清学状态/ 最 终结果解 释的 参评单位 ，在 上传数据 时应 该这样选 择：
18、Serology Status Do not select any option Refer for Further Testing Do not select any option Select problem code Would not report a status based on these results. 否 则， 参评单位 将在 “Serology Status ” 中选 择该样品 合适的 血清学 状态 ， 并且 在“Refer for Further Testing”中选 择“No ” 。 表 A3. 出现离群结果和/或不可接受结果的一般原因解答 (续) 错误种类 可能的原
19、 因 由随机误差所致的离群和 /或 不可接 受的 检测结 果 零星的被确 定 为离群和/ 或 不可接受的 检 测结果通常 被 认为是随机 误 差所致，可能 的原因包括： - 样品混 匀不 充分，特 别是 冻存过后 的样 品； - 移液问题； - 洗板不 充分 或不一致 - 抄录错误； - 样品混淆； 由系统误差所致的离群和 /或 不可接 受的 检测结 果 一系列检 测结 果被认为 是离 群和/ 或不可 接受结果 可能 是由于系 统问 题所致 。系 统 问题可能 由以 下因素引 起： - 试剂污 染， 过期或批 间差 异大； - 仪器出 问题 或故障； - 洗板不 充分 ； - 读结果 时使 用了不正 确的 波长； - 孵育时 间过 长/ 短，或温 度过高/ 低； - 检测前 未充 分的混匀/离心 ； - 不正确 的储 存试剂盒 和/ 或试剂。 8
