1、碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400- 168-3301或800- 8283301 订货e -mail： 技术咨询： 网址：http:/ 碧云天网站 微信公众号 RNAeasy动物 RNA抽提试剂盒 (离心柱式 ) 产品编号 产品名称 包装 R0024 RNAeasy动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 12次 产品简介： 碧云天的离心柱式RNAeasy 动物RNA抽提试剂盒( RNAeasy Animal RNA Isolation Kit with Spin Column)是一种基于离心柱法从动物组织或培养的动物细胞中安全、快速、便捷、稳定、高效、高
2、质量地抽提长度大于200个核苷酸(nucleotide, nt)的RNA的试剂盒。抽提获得的大于200个核苷酸的RNA(也常被称为总RNA)可以用于各种常规用途。 本试剂盒抽提得到的RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern、点杂交(Dot Blot)、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA克隆等下游实验；也可用于基因表达芯片分析(microarray)、高通量测序(high throughput sequencing)等对RNA质量要求较高的情况。 碧云天的三款离心柱式及Trizol法RNA抽提试剂盒的主要特点和差异如下： 产品编号
3、R0024/ R0026/ R0027 R0028 R0032 R0011/R0016 产品名称 RNAeasy动物RNA 抽提试剂盒 RNAeasy动物小RNA 抽提试剂盒 RNAeasy Plus动物RNA 抽提试剂盒 Beyozol Trizol 推荐指数 抽提方式 离心柱式 离心柱式 离心柱式 原始方式 抽提产物 RNA(200nt) 小RNA(200nt) 总RNA (含200nt的小RNA) 总RNA (含200nt的小RNA) 操作时间 最短(15-20分钟) 稍较长(20-25分钟) 较长(25-30分钟) 最长(45-60分钟) 操作步骤 4步骤(少) 6步骤(多) 6步骤(
4、多) 很多步骤 使用便捷性 推荐细胞量/得率 50-100万/5- 20g 50万/1- 2g 50-100万/5- 20g 50-100万/5- 20g 推荐组织量/得率 5-20mg/10-40g (多) 5mg/1-1.5g (少) 3-5mg/3-10g (少) 50mg/100-500g (很多) RNA纯度 高 高 高 高 有毒有害试剂 无 无 无 有 人体与环境安全 高 高 高 低 国外同类产品 RNeasy Mini Kit (Qiagen) PureLinkRNA Mini Kit (Thermo) PureLinkmiRNA Isolation Kit (Thermo) m
5、iRNeasy Mini Kit (Qiagen) TRIzol (Thermo) 用途 非小RNA相关各种用途 小RNA相关各种用途 不同长度RNA各种用途 不同长度RNA各种用途 动物组织或细胞中的RNA按照长度可以分为长链RNA(long RNA)和小RNA(small RNA)，长链RNA通常大于200nt，而小RNA通常小于200nt。长链RNA按照是否编码蛋白或多肽可以分为长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)和mRNA。小RNA主要包括非编码的5.8S rRNA(ribosomal RNA)、5S rRNA、tRNA(transfer RNA)、
6、microRNA(miRNA)、siRNA(small interfering RNA)、piRNA(Piwi-associated small RNA)、tsRNA(tRNA-derived small RNA)、srRNA(small rDNA-derived RNA)等。 本试剂盒抽提RNA的基本流程如图1所示。样品在裂解液中迅速裂解，释放出总RNA，然后让RNA特异性地结合到纯化柱上，而基因组DNA和蛋白质等其它组分通过高速离心被有效去除，再通过3次洗涤充分去除非特异性结合的蛋白、盐等杂质，最后用洗脱液将高纯度的RNA洗脱下来。 图1. 离心柱式RNA抽提流程示意图 本试剂盒使用安全。
7、本试剂盒通过特殊的柱纯化介质进行RNA分离纯化，能有效避免传统的Trizol法抽提时使用的酚、氯仿2 / 4 R0024 RNAeasy动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 400-1683301/800-8283301 碧云天/Beyotime 等有毒有害有机试剂。 本试剂盒使用快速、便捷。本试剂盒采用柱纯化，无需繁琐的RNA沉淀步骤，抽提操作过程仅15 -20分钟。相比于传统的Trizol抽提法，本试剂盒的操作流程显著简化，缩短了抽提时间，降低了RNA被降解的风险。和国外同类柱纯化产品相比，所需操作步骤和操作时间基本一致。 本试剂盒抽提RNA的得率高，优于国外同类产品。本试剂盒的抽提效果经反复
8、测试，100万个HeLa细胞能抽提得到约15-20gRNA，20 mg小鼠肝组织能抽提得到约25-35gRNA，20 mg小鼠脑组织中抽提得到约10-20gRNA(新鲜样品的得率高于冻存样品)。本试剂盒与传统的Trizol方法及国际知名Q品牌同类产品的抽提效果对比参见图2。 本试剂盒抽提得到的RNA纯度高，显著优于Trizol和国外Q品牌的同类产品。本试剂盒抽提得到的RNA的A260/A280通常为2.0-2.2。A 260/A230通常为1.9- 2.1。本试剂盒与传统的Trizol方法及国际知名Q品牌同类产品的抽提效果对比参见图2。由图2可知，本试剂盒在抽提组织样品的RNA时，A260/A
9、230非常显著地高于Trizol法和Q品牌的同类产品，提示纯度高。 图2. 本试剂盒与Trizol、Q品牌同类产品的RNA抽提效果对比。样品为冻存的50万个HeLa细胞、20mg小鼠肝组织和20mg小鼠脑组织。洗脱液用量均为40l。均取6l洗脱的样品经变性处理后，在含6.67%甲醛和适量NA-Red的1.2%变性琼脂糖凝胶中电泳约45分钟后拍照。实际抽提效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，本图仅供参考。 注：纯的RNA其A260/A280约为2.0，但在很多仪器上测定时会高于2.0，低于1.9通常认为有蛋白、DNA或者酚等的污染；纯的RNA其A260/A230约为2.0左右或者略高，
10、低于1.9通常认为有碳水化合物、胍盐、多肽或酚等的污染。 本产品与Qiagen公司的RNeasy Mini Kit一致，用于纯化200nt以上的RNA，对小于200nt的small RNA即小RNA(如5.8S rRNA、5S rRNA、tRNA、miRNA、piRNA等)被选择性地去除，如果希望抽提得到小于200nt的小RNA，推荐使用碧云天的RNAeasy动物小RNA抽提试剂盒(离心柱式)(R0028)或RNAeasy Plus动物RNA抽提试剂盒(离心柱式)(R0032)。 本试剂盒适用于新鲜或冻存的动物组织或细胞RNA的抽提，推荐的细胞用量为50- 100万(上限可达1000万)，组织
11、用量为15-20mg(上限可达30mg )。对于不同的组织或细胞上限会有所差别，例如小鼠肝脏组织的上限可达30mg，但肌肉组织的上限为20mg。 本试剂盒可用于12个样品的RNA抽提。 包装清单： 产品编号 产品名称 包装 R0024-1 裂解液 8ml R0024-2 结合液 8ml R0024-3 洗涤液I 8ml R0024-4 洗涤液II 15ml R0024-5 洗脱液 1.2ml R0024-6 RNA纯化柱及废液收集管 12套 R0024-7 RNA洗脱管 12个 说明书 1份 保存条件： 室温保存，一年有效。 注意事项： 对于富含RNase的样品(如动物组织)，建议使用前在裂解
12、液中添加二硫苏糖醇( Dithiothreitol, DTT)至终浓度为40m M (例如1ml裂解液中加入20l 2M DTT)或 -巯基乙醇至终浓度为1% (如1ml裂解液中加入10 l -巯基乙醇)。含DTT或 -巯基乙醇的裂解液可在室温放置1个月。 通过本试剂盒抽提到的RNA已经去除绝大多数DNA，通常情况无需DNase处理。后续如进行某些对极少量DNA残留较敏感的实验时，可以在使用说明中步骤4离心后，在纯化柱中加入适量DNase I (如80l含10U DNase I的酶溶液，推荐使用碧云天的DNase I，D7076)，室温消化15分钟。消化结束后，不要离心，直接加入500l洗涤液
13、II，进入使用说明的步骤5进行操作。 本试剂盒提供的所有试剂和耗材都是RNase -free，操作时应小心，避免被污染。所有自行准备的试剂和耗材也都应是碧云天/Beyotime 400-1683301/800-8283301 R0024 RNAeasy动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 3 / 4 RNase-free。如果可能有RNase污染，可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话，以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。 对于操作环境中RNA酶的去除，推荐使用碧云天生产的RNase and DNase Away (
14、R0123)以去除实验桌面上或其它接触面上的RNase。 使用冻存的细胞或组织抽提RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品中的RNA。对于组织样品，推荐使用碧云天生产的RNALater动物组织RNA稳定保存液( R0118)进行保存以保证样品RNA的完整性。 本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。 废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。 结合液、洗涤液中含有乙醇，使用后须旋紧瓶盖以防挥发，并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临
15、床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1. 样品的准备。 细胞样品：收集50-100万左右的细胞，1000-2000g离心1分钟后弃上清，加入300l裂解液，轻轻吹打8-10次至固悬物溶解、溶液澄清。 组织样品：取15-20mg动物组织，置于液氮中研磨成粉末，立即加入600l裂解液。也可将组织置于1.5ml离心管中，迅速加入600l冰浴预冷的裂解液，用微型电动匀浆器匀浆，或者用普通玻璃匀浆器进行匀浆。研磨或匀浆后，轻轻吹打匀浆液8- 10次，室温放置3-5分钟。然后约14, 000g离心2分钟，将上清液移至新的
16、离心管中。对于比较容易裂解且匀浆很充分的组织(如肝组织、脑组织等)可以不用高速离心而直接进入步骤2。 注意：细胞的数量一般不超过500万，不超过100万细胞宜使用300l裂解液，多于100万细胞宜使用600l裂解液。动物组织的用量一般不超过30mg，用量过多可能会因裂解不充分导致得率下降。组织样品在裂解和离心后，离心管下部可能会有一些胶状物质，宜作为上清转移至下一步操作。如果弃除胶状物，会导致得率下降约30-50%。后续加入结合液后胶状物会消失。离心是为了去除未匀浆充分的明显块状物。如果裂解后仍有粘稠物，需增加吹打次数至溶液完全澄清。对于富含RNase的样品，裂解液中宜添加DTT至终浓度为40
17、mM或添加-巯基乙醇至终浓度为1%。 2. 加入等体积结合液至裂解液中，轻轻颠倒混匀3-5次。此时可能会有沉淀物产生，属于正常现象。 3. 将混合物(包括沉淀物)转移至纯化柱内，12,000g离心30秒，倒弃收集管内液体。 注意：当裂解液的体积大于300l时，在加入等体积结合液后，总体积会超过纯化柱的容量，这时应分成2次过柱，即将一半的混合物过柱后，再将剩余的混合物重复步骤3一次。对于一些特殊的样品，如出现溶液未完全通过时，可延长离心时间至1-2分钟，或者加大离心力至16,000g。对于一些能快速启动达到12,000g的离心机，离心30秒已经足够，对于一些启动速度缓慢的离心机本步骤及后续步骤中
18、的30秒离心宜调整为60秒。 4. 加入600l洗涤液I，12,000g离心30秒，倒弃收集管内液体。 5. 加入600l洗涤液II，12,000g离心30秒，倒弃收集管内液体。 6. 重复步骤5一次。 7. 最高速(约14,000-16,000g)离心2分钟，去除残留的液体。 8. 将RNA纯化柱置于本试剂盒提供的RNA洗脱管中，加入30-50l洗脱液，室温放置2-3分钟，最高速离心30秒，所得溶液即为纯化的RNA。 注意：洗脱液需要加到纯化柱柱面中央，使其被完全吸收。如需获得更高浓度的样品，可把洗脱液的体积减小至20l，但洗脱下来的RNA量会相对减少。室温较低时，洗脱液在37C预热片刻对得
19、率有所帮助。此外，洗脱后的溶液再次加回到原纯化柱再离心洗脱一次，可提高得率约10- 30%；或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次，会获得约为第一次洗脱量15-40%的RNA。 相关产品： 产品编号 产品名称 包装 R0011 Beyozol (总RNA抽提试剂) 100ml R0016 Trizol (总RNA抽提试剂) 100ml R0021 DEPC水(DNase、RNase free) 100ml R0022 DEPC水(DNase、RNase free) 500ml R0024 RNAeasy动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 12次 R0026 RNAeasy动物RNA抽提试剂盒
20、(离心柱式) 50次 R0027 RNAeasy动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 200次 R0028 RNAeasy动物小RNA抽提试剂盒(离心柱式) 50次 R0032 RNAeasy Plus动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 50次 R0035 BeyoMag磁珠法动物总RNA抽提试剂盒 50次 R0118 RNALater动物组织RNA稳定保存液 100ml R0121 AllProtect动物组织核酸、蛋白稳定保存液 25ml 4 / 4 R0024 RNAeasy动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 400-1683301/800-8283301 碧云天/Beyotime R0122 AllProtect动物组织核酸、蛋白稳定保存液 100ml R0123 RNase and DNase Away 250ml R0125 RNase, DNase and DNA Away 250ml R0127 RNase, DNase, RNA and DNA Away 250ml ST036 DEPC 10g Version 2017.09.22
