1、 教学素材 会员交流资料保护原创权益净化网络环境 - - 1 - -无菌操作技术常规1、玻璃器皿的消毒和清洁新购玻璃器皿的处理新购玻璃器皿应用热肥皂水洗刷，流水冲洗，再用12%盐酸溶液浸泡，以除去游离碱，再用水冲洗。对容量较大的器皿如试剂瓶、烧瓶或量具等，经清水洗净后应注入浓盐酸少许，慢慢转动，使盐酸布满容器内壁数分钟后倾出盐酸，再用水冲洗。污染玻璃器皿的处理一般试管或容器可用3煤酚皂溶液或5石炭酸浸泡，再煮沸30分钟，或在35漂白粉澄清液内4小时，有的亦可用肥皂或合成洗涤剂洗刷使尽量产生泡沫，然后用清水冲洗至无肥皂为止。最后用少量蒸馏水冲洗。细菌培养用的试管和培养皿可先行集中，用1kg/cm
2、 2高压灭菌1530分钟，再用热水洗涤后，用肥皂洗刷，流水冲洗。吸管使用后应集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小时，逐支用流水反复冲洗，再用蒸馏水冲洗。油蜡沾污的器皿，应单独灭菌洗涤，先将沾有油污的物质弃去，倒置于吸水纸上，100烘干半小时，再用碱水煮沸，肥皂洗涤，流水冲洗。必要时可用二甲苯或汽油去油污。染料沾污的器皿，可先用水冲洗，后用清洁或稀盐酸洗脱染料，再用清水冲洗。一般染色剂呈碱性，所以不宜用肥皂的碱水洗涤。玻片可置于3煤酚皂溶液中浸泡，取出后流水冲洗，再用肥皂或弱碱性煮沸，自然冷却后，流水冲洗。被结核杆菌污染或不易洗净的玻片，可置于清洁液内浸泡后再冲洗。2、无菌器材和液体的准备将玻璃器具
3、中的培养皿、培养瓶、试管、吸管等按上述方法洗净烘干后，用一洁净纸包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花，装入干净的铝盒或铁盒中，于120的干燥箱中干燥灭菌小时，取出备用。对于手术器械 、瓶塞、工作服以及新配制的PBS洗液，则采用高压蒸气灭菌法，即在15磅的条件下，加热20分钟。而对于MEM培养液、小牛血清和消化液等需用G 5或G 6滤器负压抽滤后使用。3、无菌操作过程在无菌操作过程中，最重要的是要保持工作区的无菌、清洁。因此，在操作前2030分教学素材 会员交流资料保护原创权益净化网络环境 - - 2 - -钟要先启动超净台和紫外灯，并认真洗手和消毒。在操作时，严禁喧哗，严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的止血钳、镊子等。培养瓶应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。对于吸管应先用手拿后1/3处，戴上胶皮乳头，并用酒精灯烧烤之后再吸液体。4、常用清洁液的配制法重铬酸钾清洁液： 可根据不同需要，选用下列的任何一种浓度。配 方1 2 3 4 5 重铬酸钾（g） 80 60 200 60 100 粗浓硫酸（ml） 100 90 500 460 800 水（ml） 1000 750 500 300 200
