1、动物遗传育种与繁殖专业优秀论文 慢病毒转染鸡胚原始生殖细胞及性腺嵌合体鸡的制备关键词：原始生殖细胞 转基因鸡 慢病毒转染 鸡胚 性腺嵌合体鸡摘要：原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞，是一种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其作为转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺嵌合体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生殖嵴中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs
2、细胞，通过PAS(过碘酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分离孵化 5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子 mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因子 hlGF-、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共转染 293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注入孵化 2.5d
3、的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源，还为转基因鸡的成功制备创造条件。正文内容原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞，是一种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其作为转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗传操作，再将整合有
4、外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺嵌合体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生殖嵴中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过PAS(过碘酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分离孵化 5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子 mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因子 hlGF-、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒
5、表达载体，与辅助质粒共转染 293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源，还为转基因鸡的成功制备创造条件。原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs
6、)是精子或卵子的祖先细胞，是一种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其作为转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺嵌合体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生殖嵴中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分离孵化5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF
7、、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因子 hlGF-、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共转染293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建
8、立了分离PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源，还为转基因鸡的成功制备创造条件。原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞，是一种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其作为转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺嵌合体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生殖嵴中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘酸
9、希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分离孵化5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因子 hlGF-、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共转染293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体
10、PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源，还为转基因鸡的成功制备创造条件。原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞，是一种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其作为转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管
11、中，就可获得性腺嵌合体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生殖嵴中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分离孵化5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因子 hlGF-、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共转染293FT 细
12、胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源，还为转基因鸡的成功制备创造条件。原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞，是一种多能干细胞
13、。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其作为转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺嵌合体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生殖嵴中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分离孵化5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因
14、子 hlGF-、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共转染293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离PGCs、体外培养 PGCs、制备
15、嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源，还为转基因鸡的成功制备创造条件。原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞，是一种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其作为转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺嵌合体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生殖嵴中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定
16、，其纯度可达 70。同时分离孵化5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因子 hlGF-、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共转染293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至第 8d
17、。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源，还为转基因鸡的成功制备创造条件。原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞，是一种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其作为转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺嵌合体，生产出稳定遗传的转
18、基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生殖嵴中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分离孵化5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因子 hlGF-、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共转染293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 P
19、GCs，转染率高达24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源，还为转基因鸡的成功制备创造条件。原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞，是一种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后
20、代，故以其作为转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺嵌合体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生殖嵴中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分离孵化5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因子 hlGF-、干细胞生长因子 hSCF)
21、的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共转染293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来
22、源，还为转基因鸡的成功制备创造条件。原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞，是一种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其作为转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺嵌合体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生殖嵴中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分离孵化5.5d
23、的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因子 hlGF-、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共转染293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 P
24、CR 检测，结果显示：在检测的 42只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源，还为转基因鸡的成功制备创造条件。原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞，是一种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其作为转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺嵌合体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨
25、鸡胚生殖嵴中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分离孵化5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因子 hlGF-、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共转染293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达24.19。通过显微注射
26、的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源，还为转基因鸡的成功制备创造条件。特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258
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