干细胞标志蛋白abcg2与胶质瘤新生血管形成和患者生存预后的相关性研究.doc

1、神经外科学专业优秀论文 干细胞标志蛋白 ABCG2 与胶质瘤新生血管形成和患者生存预后的相关性研究关键词：脑胶质瘤 干细胞标志蛋白 ABCG2 新生血管形成 生存预后摘要：本研究分为四部分： 第一部分 干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管形成相关蛋白在组织芯片中表达关系分析 目的：ABCG2 已作为肿瘤干细胞标志物在研究，已知与肿瘤耐药相关，尚未知是否与肿瘤血管形成相关。本文旨在探讨其在胶质瘤血管形成过程中与 VEGF、VEGFR 和 CD34 的关系，证明其在血管形成中起主要作用。 方法：构建布有 90 例各级别人脑胶质瘤临床标本的组织芯片，用 EnVision 法的免疫组化染色检测和分析 A

2、BCG2、VEGF 和 VEGFR（flt1）在胶质瘤中的表达率，并以 CD34 单克隆抗体显示血管内皮细胞，根据 CD34阳性的血管计数判定微血管密度（MVD） ，另用 6 例正常脑组织标本作为对照。 结果：随着胶质瘤恶性程度的增加，ABCG2、VEGF、VEGFR（flt1）和 CD34 阳性表达率均增高。ABCG2 除、级之间无统计学差异外，其余各级别之间存在统计学差异（Plt;005） ； Spearman 等级相关分析显示 ABCG2 与病理级别呈正相关；并且 ABCG2 表达水平与肿瘤 MVD 显著相关，=0540，Plt;0001。ABCG2 阳性表达的、级肿瘤标本 MVD 比、

3、级高。VEGF、VEGFR（flt1）和 ABCG2 均为阳性表达的肿瘤标本 MVD 平均值显著高于 ABCG2 阴性表达者，Plt;0001。 结论：在布有不同恶性程度胶质瘤标本的同一张组织芯片上证明了目前公认的肿瘤细胞诱导肿瘤血管生成的代表性基因 VEGF、VEGFR 和 CD34 与新发现的只有干细胞才表达的基因ABCG2 具有统计学上的相关性，为 ABCG2 阳性表达细胞具有分化成肿瘤细胞和肿瘤血管细胞的多潜能研究找到了分子依据。 第二部分 干细胞标志蛋白ABCG2 与血管形成相关蛋白在组织芯片中共表达分析 目的：在明确了干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管形成相关蛋白呈正相关的基础上，

4、进一步明确是否有共表达的细胞，为进一步研究胶质瘤干细胞为胶质瘤血管起源细胞提供图像依据。方法：采用免疫荧光激光扫描共聚焦技术，观察胶质瘤组织芯片中存在的ABCG2、 VEGF、CD34、vWF、GFAP 共表达的细胞。 结果：胶质瘤血管中存在ABCG2 和 CD34、vWF 共表达细胞与 VEGF 和 CD34 共表达的细胞；虽然正常脑组织中也存在 ABCG2 与 CD34、vWF，或 VEGF 与 CD34 共表达细胞，但共表达血管数量不多；在肿瘤组织和正常脑组织中均未见 ABCG2 和 GFAP 共表达细胞。 结论：干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管内皮细胞标志蛋白 CD34 和 vWF

5、共表达，不与 GFAP 共表达。而 CD34 又与 VEGF 共表达，说明胶质瘤干细胞还具有向胶质瘤血管内皮细胞分化的能力。这种分化还与细胞分泌 VEGF 因子相关，但与 GFAP表达无关。 第三部分 ABCG2 与 nestin 共表达细胞参与胶质瘤血管形成 目的：在胶质瘤干细胞研究中已经见到 nestin 与干细胞标志基因 CD133 的关系密切，本文探索它与另一个干细胞标志基因 ABCG2 的关系，旨在寻找两者共表达细胞在胶质瘤血管生成中的证据。 方法：从 90 例常规石蜡包埋、HE 染色的胶质瘤切片标本中，挑选血管最丰富，恶性程度最高的标本，进行 nestin和 ABCG2 免疫荧光双

6、重染色，在激光扫描共聚焦显微镜下扫描显像，成像后对两者共表达细胞与血管的关系进行分析。 结果：见到了一部分组成胶质瘤血管的细胞共表达 nestin 和 ABCG2，并有明显的血管之间的异质性。其中 nestin不仅在胶质瘤血管内皮细胞有表达，还在远离血管的肿瘤细胞中也见到表达。但未见 nestin 和 GFAP 在胶质瘤血管细胞中的共表达。 结论：胶质瘤干/祖细胞不但具有向亲本肿瘤细胞分化潜能和表型，还具备向肿瘤血管细胞分化的潜能和表型，为肿瘤血管形成新理论：拟态血管和马赛克血管找到了依据。 第四部分 ABCG2 可作为高风险因子影响胶质瘤患者生存期 目的：既然第一至第三部分论证了 ABCG2

7、 是胶质瘤血管生成的关键基因，那么是否与患者生存预后相关就值得关注。本部分就此进行相关分析研究。 方法：用第一，第二部分相同的胶质瘤组织芯片进行 EnVision 免疫组化染色，检测和分析 ABCG2与 PCNA、P53、VEGF、IGFBP2、CMYC 在胶质瘤组织中的表达，並采用 COX比例风险模型逐步回归分析上述多基因与患者生存期的关系。 结果：单因素分析显示，病理分级、ABCG2、P53 和 VEGF 等因素与患者生存期有关（Plt;005） 。而多因素分析显示切除范围、病理分级、ABCG2、P53 和VEGF 高表达是影响患者生存期的高风险因子。 结论：ABCG2 以高危因子的身份影

8、响患者生存，可为把它作为靶分子治疗对象的进一步研究提供依据。正文内容本研究分为四部分： 第一部分 干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管形成相关蛋白在组织芯片中表达关系分析 目的：ABCG2 已作为肿瘤干细胞标志物在研究，已知与肿瘤耐药相关，尚未知是否与肿瘤血管形成相关。本文旨在探讨其在胶质瘤血管形成过程中与 VEGF、VEGFR 和 CD34 的关系，证明其在血管形成中起主要作用。 方法：构建布有 90 例各级别人脑胶质瘤临床标本的组织芯片，用 EnVision 法的免疫组化染色检测和分析 ABCG2、VEGF 和 VEGFR（flt1）在胶质瘤中的表达率，并以 CD34 单克隆抗体显示血管内皮

9、细胞，根据 CD34 阳性的血管计数判定微血管密度（MVD） ，另用 6 例正常脑组织标本作为对照。 结果：随着胶质瘤恶性程度的增加，ABCG2、VEGF、VEGFR（flt1）和 CD34 阳性表达率均增高。ABCG2 除、级之间无统计学差异外，其余各级别之间存在统计学差异（Plt;005） ； Spearman 等级相关分析显示 ABCG2 与病理级别呈正相关；并且 ABCG2 表达水平与肿瘤 MVD 显著相关，=0540，Plt;0001。ABCG2 阳性表达的、级肿瘤标本 MVD 比、级高。VEGF、VEGFR（flt1）和 ABCG2 均为阳性表达的肿瘤标本 MVD 平均值显著高于

10、ABCG2 阴性表达者，Plt;0001。 结论：在布有不同恶性程度胶质瘤标本的同一张组织芯片上证明了目前公认的肿瘤细胞诱导肿瘤血管生成的代表性基因 VEGF、VEGFR 和 CD34 与新发现的只有干细胞才表达的基因ABCG2 具有统计学上的相关性，为 ABCG2 阳性表达细胞具有分化成肿瘤细胞和肿瘤血管细胞的多潜能研究找到了分子依据。 第二部分 干细胞标志蛋白ABCG2 与血管形成相关蛋白在组织芯片中共表达分析 目的：在明确了干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管形成相关蛋白呈正相关的基础上，进一步明确是否有共表达的细胞，为进一步研究胶质瘤干细胞为胶质瘤血管起源细胞提供图像依据。方法：采用免疫

11、荧光激光扫描共聚焦技术，观察胶质瘤组织芯片中存在的ABCG2、 VEGF、CD34、vWF、GFAP 共表达的细胞。 结果：胶质瘤血管中存在ABCG2 和 CD34、vWF 共表达细胞与 VEGF 和 CD34 共表达的细胞；虽然正常脑组织中也存在 ABCG2 与 CD34、vWF，或 VEGF 与 CD34 共表达细胞，但共表达血管数量不多；在肿瘤组织和正常脑组织中均未见 ABCG2 和 GFAP 共表达细胞。 结论：干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管内皮细胞标志蛋白 CD34 和 vWF 共表达，不与 GFAP 共表达。而 CD34 又与 VEGF 共表达，说明胶质瘤干细胞还具有向胶质瘤血

12、管内皮细胞分化的能力。这种分化还与细胞分泌 VEGF 因子相关，但与 GFAP表达无关。 第三部分 ABCG2 与 nestin 共表达细胞参与胶质瘤血管形成 目的：在胶质瘤干细胞研究中已经见到 nestin 与干细胞标志基因 CD133 的关系密切，本文探索它与另一个干细胞标志基因 ABCG2 的关系，旨在寻找两者共表达细胞在胶质瘤血管生成中的证据。 方法：从 90 例常规石蜡包埋、HE 染色的胶质瘤切片标本中，挑选血管最丰富，恶性程度最高的标本，进行 nestin和 ABCG2 免疫荧光双重染色，在激光扫描共聚焦显微镜下扫描显像，成像后对两者共表达细胞与血管的关系进行分析。 结果：见到了一

13、部分组成胶质瘤血管的细胞共表达 nestin 和 ABCG2，并有明显的血管之间的异质性。其中 nestin不仅在胶质瘤血管内皮细胞有表达，还在远离血管的肿瘤细胞中也见到表达。但未见 nestin 和 GFAP 在胶质瘤血管细胞中的共表达。 结论：胶质瘤干/祖细胞不但具有向亲本肿瘤细胞分化潜能和表型，还具备向肿瘤血管细胞分化的潜能和表型，为肿瘤血管形成新理论：拟态血管和马赛克血管找到了依据。 第四部分 ABCG2 可作为高风险因子影响胶质瘤患者生存期 目的：既然第一至第三部分论证了 ABCG2 是胶质瘤血管生成的关键基因，那么是否与患者生存预后相关就值得关注。本部分就此进行相关分析研究。 方法

14、：用第一，第二部分相同的胶质瘤组织芯片进行 EnVision 免疫组化染色，检测和分析 ABCG2与 PCNA、P53、VEGF、IGFBP2、CMYC 在胶质瘤组织中的表达，並采用 COX比例风险模型逐步回归分析上述多基因与患者生存期的关系。 结果：单因素分析显示，病理分级、ABCG2、P53 和 VEGF 等因素与患者生存期有关（Plt;005） 。而多因素分析显示切除范围、病理分级、ABCG2、P53 和VEGF 高表达是影响患者生存期的高风险因子。 结论：ABCG2 以高危因子的身份影响患者生存，可为把它作为靶分子治疗对象的进一步研究提供依据。本研究分为四部分： 第一部分 干细胞标志蛋

15、白 ABCG2 与血管形成相关蛋白在组织芯片中表达关系分析 目的：ABCG2 已作为肿瘤干细胞标志物在研究，已知与肿瘤耐药相关，尚未知是否与肿瘤血管形成相关。本文旨在探讨其在胶质瘤血管形成过程中与 VEGF、VEGFR 和 CD34 的关系，证明其在血管形成中起主要作用。 方法：构建布有 90 例各级别人脑胶质瘤临床标本的组织芯片，用EnVision 法的免疫组化染色检测和分析 ABCG2、VEGF 和 VEGFR（flt1）在胶质瘤中的表达率，并以 CD34 单克隆抗体显示血管内皮细胞，根据 CD34 阳性的血管计数判定微血管密度（MVD） ，另用 6 例正常脑组织标本作为对照。 结果：随着

16、胶质瘤恶性程度的增加，ABCG2、VEGF、VEGFR（flt1）和 CD34 阳性表达率均增高。ABCG2 除、级之间无统计学差异外，其余各级别之间存在统计学差异（Plt;005） ； Spearman 等级相关分析显示 ABCG2 与病理级别呈正相关；并且 ABCG2 表达水平与肿瘤 MVD 显著相关，=0540，Plt;0001。ABCG2 阳性表达的、级肿瘤标本 MVD 比、级高。VEGF、VEGFR（flt1）和 ABCG2 均为阳性表达的肿瘤标本 MVD 平均值显著高于 ABCG2 阴性表达者，Plt;0001。 结论：在布有不同恶性程度胶质瘤标本的同一张组织芯片上证明了目前公认的

17、肿瘤细胞诱导肿瘤血管生成的代表性基因 VEGF、VEGFR 和 CD34 与新发现的只有干细胞才表达的基因ABCG2 具有统计学上的相关性，为 ABCG2 阳性表达细胞具有分化成肿瘤细胞和肿瘤血管细胞的多潜能研究找到了分子依据。 第二部分 干细胞标志蛋白ABCG2 与血管形成相关蛋白在组织芯片中共表达分析 目的：在明确了干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管形成相关蛋白呈正相关的基础上，进一步明确是否有共表达的细胞，为进一步研究胶质瘤干细胞为胶质瘤血管起源细胞提供图像依据。方法：采用免疫荧光激光扫描共聚焦技术，观察胶质瘤组织芯片中存在的ABCG2、 VEGF、CD34、vWF、GFAP 共表达的细

18、胞。 结果：胶质瘤血管中存在ABCG2 和 CD34、vWF 共表达细胞与 VEGF 和 CD34 共表达的细胞；虽然正常脑组织中也存在 ABCG2 与 CD34、vWF，或 VEGF 与 CD34 共表达细胞，但共表达血管数量不多；在肿瘤组织和正常脑组织中均未见 ABCG2 和 GFAP 共表达细胞。 结论：干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管内皮细胞标志蛋白 CD34 和 vWF 共表达，不与 GFAP 共表达。而 CD34 又与 VEGF 共表达，说明胶质瘤干细胞还具有向胶质瘤血管内皮细胞分化的能力。这种分化还与细胞分泌 VEGF 因子相关，但与 GFAP表达无关。 第三部分 ABCG2

19、与 nestin 共表达细胞参与胶质瘤血管形成 目的：在胶质瘤干细胞研究中已经见到 nestin 与干细胞标志基因 CD133 的关系密切，本文探索它与另一个干细胞标志基因 ABCG2 的关系，旨在寻找两者共表达细胞在胶质瘤血管生成中的证据。 方法：从 90 例常规石蜡包埋、HE 染色的胶质瘤切片标本中，挑选血管最丰富，恶性程度最高的标本，进行 nestin和 ABCG2 免疫荧光双重染色，在激光扫描共聚焦显微镜下扫描显像，成像后对两者共表达细胞与血管的关系进行分析。 结果：见到了一部分组成胶质瘤血管的细胞共表达 nestin 和 ABCG2，并有明显的血管之间的异质性。其中 nestin不仅

20、在胶质瘤血管内皮细胞有表达，还在远离血管的肿瘤细胞中也见到表达。但未见 nestin 和 GFAP 在胶质瘤血管细胞中的共表达。 结论：胶质瘤干/祖细胞不但具有向亲本肿瘤细胞分化潜能和表型，还具备向肿瘤血管细胞分化的潜能和表型，为肿瘤血管形成新理论：拟态血管和马赛克血管找到了依据。 第四部分 ABCG2 可作为高风险因子影响胶质瘤患者生存期 目的：既然第一至第三部分论证了 ABCG2 是胶质瘤血管生成的关键基因，那么是否与患者生存预后相关就值得关注。本部分就此进行相关分析研究。 方法：用第一，第二部分相同的胶质瘤组织芯片进行 EnVision 免疫组化染色，检测和分析 ABCG2与 PCNA、

21、P53、VEGF、IGFBP2、CMYC 在胶质瘤组织中的表达，並采用 COX比例风险模型逐步回归分析上述多基因与患者生存期的关系。 结果：单因素分析显示，病理分级、ABCG2、P53 和 VEGF 等因素与患者生存期有关（Plt;005） 。而多因素分析显示切除范围、病理分级、ABCG2、P53 和VEGF 高表达是影响患者生存期的高风险因子。 结论：ABCG2 以高危因子的身份影响患者生存，可为把它作为靶分子治疗对象的进一步研究提供依据。本研究分为四部分： 第一部分 干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管形成相关蛋白在组织芯片中表达关系分析 目的：ABCG2 已作为肿瘤干细胞标志物在研究，已知

22、与肿瘤耐药相关，尚未知是否与肿瘤血管形成相关。本文旨在探讨其在胶质瘤血管形成过程中与 VEGF、VEGFR 和 CD34 的关系，证明其在血管形成中起主要作用。 方法：构建布有 90 例各级别人脑胶质瘤临床标本的组织芯片，用EnVision 法的免疫组化染色检测和分析 ABCG2、VEGF 和 VEGFR（flt1）在胶质瘤中的表达率，并以 CD34 单克隆抗体显示血管内皮细胞，根据 CD34 阳性的血管计数判定微血管密度（MVD） ，另用 6 例正常脑组织标本作为对照。 结果：随着胶质瘤恶性程度的增加，ABCG2、VEGF、VEGFR（flt1）和 CD34 阳性表达率均增高。ABCG2 除

23、、级之间无统计学差异外，其余各级别之间存在统计学差异（Plt;005） ； Spearman 等级相关分析显示 ABCG2 与病理级别呈正相关；并且 ABCG2 表达水平与肿瘤 MVD 显著相关，=0540，Plt;0001。ABCG2 阳性表达的、级肿瘤标本 MVD 比、级高。VEGF、VEGFR（flt1）和 ABCG2 均为阳性表达的肿瘤标本 MVD 平均值显著高于 ABCG2 阴性表达者，Plt;0001。 结论：在布有不同恶性程度胶质瘤标本的同一张组织芯片上证明了目前公认的肿瘤细胞诱导肿瘤血管生成的代表性基因 VEGF、VEGFR 和 CD34 与新发现的只有干细胞才表达的基因ABC

24、G2 具有统计学上的相关性，为 ABCG2 阳性表达细胞具有分化成肿瘤细胞和肿瘤血管细胞的多潜能研究找到了分子依据。 第二部分 干细胞标志蛋白ABCG2 与血管形成相关蛋白在组织芯片中共表达分析 目的：在明确了干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管形成相关蛋白呈正相关的基础上，进一步明确是否有共表达的细胞，为进一步研究胶质瘤干细胞为胶质瘤血管起源细胞提供图像依据。方法：采用免疫荧光激光扫描共聚焦技术，观察胶质瘤组织芯片中存在的ABCG2、 VEGF、CD34、vWF、GFAP 共表达的细胞。 结果：胶质瘤血管中存在ABCG2 和 CD34、vWF 共表达细胞与 VEGF 和 CD34 共表达的细胞

25、；虽然正常脑组织中也存在 ABCG2 与 CD34、vWF，或 VEGF 与 CD34 共表达细胞，但共表达血管数量不多；在肿瘤组织和正常脑组织中均未见 ABCG2 和 GFAP 共表达细胞。 结论：干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管内皮细胞标志蛋白 CD34 和 vWF 共表达，不与 GFAP 共表达。而 CD34 又与 VEGF 共表达，说明胶质瘤干细胞还具有向胶质瘤血管内皮细胞分化的能力。这种分化还与细胞分泌 VEGF 因子相关，但与 GFAP表达无关。 第三部分 ABCG2 与 nestin 共表达细胞参与胶质瘤血管形成 目的：在胶质瘤干细胞研究中已经见到 nestin 与干细胞标志基

26、因 CD133 的关系密切，本文探索它与另一个干细胞标志基因 ABCG2 的关系，旨在寻找两者共表达细胞在胶质瘤血管生成中的证据。 方法：从 90 例常规石蜡包埋、HE 染色的胶质瘤切片标本中，挑选血管最丰富，恶性程度最高的标本，进行 nestin和 ABCG2 免疫荧光双重染色，在激光扫描共聚焦显微镜下扫描显像，成像后对两者共表达细胞与血管的关系进行分析。 结果：见到了一部分组成胶质瘤血管的细胞共表达 nestin 和 ABCG2，并有明显的血管之间的异质性。其中 nestin不仅在胶质瘤血管内皮细胞有表达，还在远离血管的肿瘤细胞中也见到表达。但未见 nestin 和 GFAP 在胶质瘤血管

27、细胞中的共表达。 结论：胶质瘤干/祖细胞不但具有向亲本肿瘤细胞分化潜能和表型，还具备向肿瘤血管细胞分化的潜能和表型，为肿瘤血管形成新理论：拟态血管和马赛克血管找到了依据。 第四部分 ABCG2 可作为高风险因子影响胶质瘤患者生存期 目的：既然第一至第三部分论证了 ABCG2 是胶质瘤血管生成的关键基因，那么是否与患者生存预后相关就值得关注。本部分就此进行相关分析研究。 方法：用第一，第二部分相同的胶质瘤组织芯片进行 EnVision 免疫组化染色，检测和分析 ABCG2与 PCNA、P53、VEGF、IGFBP2、CMYC 在胶质瘤组织中的表达，並采用 COX比例风险模型逐步回归分析上述多基因

28、与患者生存期的关系。 结果：单因素分析显示，病理分级、ABCG2、P53 和 VEGF 等因素与患者生存期有关（Plt;005） 。而多因素分析显示切除范围、病理分级、ABCG2、P53 和VEGF 高表达是影响患者生存期的高风险因子。 结论：ABCG2 以高危因子的身份影响患者生存，可为把它作为靶分子治疗对象的进一步研究提供依据。本研究分为四部分： 第一部分 干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管形成相关蛋白在组织芯片中表达关系分析 目的：ABCG2 已作为肿瘤干细胞标志物在研究，已知与肿瘤耐药相关，尚未知是否与肿瘤血管形成相关。本文旨在探讨其在胶质瘤血管形成过程中与 VEGF、VEGFR 和

29、CD34 的关系，证明其在血管形成中起主要作用。 方法：构建布有 90 例各级别人脑胶质瘤临床标本的组织芯片，用EnVision 法的免疫组化染色检测和分析 ABCG2、VEGF 和 VEGFR（flt1）在胶质瘤中的表达率，并以 CD34 单克隆抗体显示血管内皮细胞，根据 CD34 阳性的血管计数判定微血管密度（MVD） ，另用 6 例正常脑组织标本作为对照。 结果：随着胶质瘤恶性程度的增加，ABCG2、VEGF、VEGFR（flt1）和 CD34 阳性表达率均增高。ABCG2 除、级之间无统计学差异外，其余各级别之间存在统计学差异（Plt;005） ； Spearman 等级相关分析显示

30、ABCG2 与病理级别呈正相关；并且 ABCG2 表达水平与肿瘤 MVD 显著相关，=0540，Plt;0001。ABCG2 阳性表达的、级肿瘤标本 MVD 比、级高。VEGF、VEGFR（flt1）和 ABCG2 均为阳性表达的肿瘤标本 MVD 平均值显著高于 ABCG2 阴性表达者，Plt;0001。 结论：在布有不同恶性程度胶质瘤标本的同一张组织芯片上证明了目前公认的肿瘤细胞诱导肿瘤血管生成的代表性基因 VEGF、VEGFR 和 CD34 与新发现的只有干细胞才表达的基因ABCG2 具有统计学上的相关性，为 ABCG2 阳性表达细胞具有分化成肿瘤细胞和肿瘤血管细胞的多潜能研究找到了分子依

31、据。 第二部分 干细胞标志蛋白ABCG2 与血管形成相关蛋白在组织芯片中共表达分析 目的：在明确了干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管形成相关蛋白呈正相关的基础上，进一步明确是否有共表达的细胞，为进一步研究胶质瘤干细胞为胶质瘤血管起源细胞提供图像依据。方法：采用免疫荧光激光扫描共聚焦技术，观察胶质瘤组织芯片中存在的ABCG2、 VEGF、CD34、vWF、GFAP 共表达的细胞。 结果：胶质瘤血管中存在ABCG2 和 CD34、vWF 共表达细胞与 VEGF 和 CD34 共表达的细胞；虽然正常脑组织中也存在 ABCG2 与 CD34、vWF，或 VEGF 与 CD34 共表达细胞，但共表达血管

32、数量不多；在肿瘤组织和正常脑组织中均未见 ABCG2 和 GFAP 共表达细胞。 结论：干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管内皮细胞标志蛋白 CD34 和 vWF 共表达，不与 GFAP 共表达。而 CD34 又与 VEGF 共表达，说明胶质瘤干细胞还具有向胶质瘤血管内皮细胞分化的能力。这种分化还与细胞分泌 VEGF 因子相关，但与 GFAP表达无关。 第三部分 ABCG2 与 nestin 共表达细胞参与胶质瘤血管形成 目的：在胶质瘤干细胞研究中已经见到 nestin 与干细胞标志基因 CD133 的关系密切，本文探索它与另一个干细胞标志基因 ABCG2 的关系，旨在寻找两者共表达细胞在胶质瘤

33、血管生成中的证据。 方法：从 90 例常规石蜡包埋、HE 染色的胶质瘤切片标本中，挑选血管最丰富，恶性程度最高的标本，进行 nestin和 ABCG2 免疫荧光双重染色，在激光扫描共聚焦显微镜下扫描显像，成像后对两者共表达细胞与血管的关系进行分析。 结果：见到了一部分组成胶质瘤血管的细胞共表达 nestin 和 ABCG2，并有明显的血管之间的异质性。其中 nestin不仅在胶质瘤血管内皮细胞有表达，还在远离血管的肿瘤细胞中也见到表达。但未见 nestin 和 GFAP 在胶质瘤血管细胞中的共表达。 结论：胶质瘤干/祖细胞不但具有向亲本肿瘤细胞分化潜能和表型，还具备向肿瘤血管细胞分化的潜能和表

34、型，为肿瘤血管形成新理论：拟态血管和马赛克血管找到了依据。 第四部分 ABCG2 可作为高风险因子影响胶质瘤患者生存期 目的：既然第一至第三部分论证了 ABCG2 是胶质瘤血管生成的关键基因，那么是否与患者生存预后相关就值得关注。本部分就此进行相关分析研究。 方法：用第一，第二部分相同的胶质瘤组织芯片进行 EnVision 免疫组化染色，检测和分析 ABCG2与 PCNA、P53、VEGF、IGFBP2、CMYC 在胶质瘤组织中的表达，並采用 COX比例风险模型逐步回归分析上述多基因与患者生存期的关系。 结果：单因素分析显示，病理分级、ABCG2、P53 和 VEGF 等因素与患者生存期有关（

35、Plt;005） 。而多因素分析显示切除范围、病理分级、ABCG2、P53 和VEGF 高表达是影响患者生存期的高风险因子。 结论：ABCG2 以高危因子的身份影响患者生存，可为把它作为靶分子治疗对象的进一步研究提供依据。本研究分为四部分： 第一部分 干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管形成相关蛋白在组织芯片中表达关系分析 目的：ABCG2 已作为肿瘤干细胞标志物在研究，已知与肿瘤耐药相关，尚未知是否与肿瘤血管形成相关。本文旨在探讨其在胶质瘤血管形成过程中与 VEGF、VEGFR 和 CD34 的关系，证明其在血管形成中起主要作用。 方法：构建布有 90 例各级别人脑胶质瘤临床标本的组织芯片，用

36、EnVision 法的免疫组化染色检测和分析 ABCG2、VEGF 和 VEGFR（flt1）在胶质瘤中的表达率，并以 CD34 单克隆抗体显示血管内皮细胞，根据 CD34 阳性的血管计数判定微血管密度（MVD） ，另用 6 例正常脑组织标本作为对照。 结果：随着胶质瘤恶性程度的增加，ABCG2、VEGF、VEGFR（flt1）和 CD34 阳性表达率均增高。ABCG2 除、级之间无统计学差异外，其余各级别之间存在统计学差异（Plt;005） ； Spearman 等级相关分析显示 ABCG2 与病理级别呈正相关；并且 ABCG2 表达水平与肿瘤 MVD 显著相关，=0540，Plt;0001

37、。ABCG2 阳性表达的、级肿瘤标本 MVD 比、级高。VEGF、VEGFR（flt1）和 ABCG2 均为阳性表达的肿瘤标本 MVD 平均值显著高于 ABCG2 阴性表达者，Plt;0001。 结论：在布有不同恶性程度胶质瘤标本的同一张组织芯片上证明了目前公认的肿瘤细胞诱导肿瘤血管生成的代表性基因 VEGF、VEGFR 和 CD34 与新发现的只有干细胞才表达的基因ABCG2 具有统计学上的相关性，为 ABCG2 阳性表达细胞具有分化成肿瘤细胞和肿瘤血管细胞的多潜能研究找到了分子依据。 第二部分 干细胞标志蛋白ABCG2 与血管形成相关蛋白在组织芯片中共表达分析 目的：在明确了干细胞标志蛋白

38、 ABCG2 与血管形成相关蛋白呈正相关的基础上，进一步明确是否有共表达的细胞，为进一步研究胶质瘤干细胞为胶质瘤血管起源细胞提供图像依据。方法：采用免疫荧光激光扫描共聚焦技术，观察胶质瘤组织芯片中存在的ABCG2、 VEGF、CD34、vWF、GFAP 共表达的细胞。 结果：胶质瘤血管中存在ABCG2 和 CD34、vWF 共表达细胞与 VEGF 和 CD34 共表达的细胞；虽然正常脑组织中也存在 ABCG2 与 CD34、vWF，或 VEGF 与 CD34 共表达细胞，但共表达血管数量不多；在肿瘤组织和正常脑组织中均未见 ABCG2 和 GFAP 共表达细胞。 结论：干细胞标志蛋白 ABCG

39、2 与血管内皮细胞标志蛋白 CD34 和 vWF 共表达，不与 GFAP 共表达。而 CD34 又与 VEGF 共表达，说明胶质瘤干细胞还具有向胶质瘤血管内皮细胞分化的能力。这种分化还与细胞分泌 VEGF 因子相关，但与 GFAP表达无关。 第三部分 ABCG2 与 nestin 共表达细胞参与胶质瘤血管形成 目的：在胶质瘤干细胞研究中已经见到 nestin 与干细胞标志基因 CD133 的关系密切，本文探索它与另一个干细胞标志基因 ABCG2 的关系，旨在寻找两者共表达细胞在胶质瘤血管生成中的证据。 方法：从 90 例常规石蜡包埋、HE 染色的胶质瘤切片标本中，挑选血管最丰富，恶性程度最高的

40、标本，进行 nestin和 ABCG2 免疫荧光双重染色，在激光扫描共聚焦显微镜下扫描显像，成像后对两者共表达细胞与血管的关系进行分析。 结果：见到了一部分组成胶质瘤血管的细胞共表达 nestin 和 ABCG2，并有明显的血管之间的异质性。其中 nestin不仅在胶质瘤血管内皮细胞有表达，还在远离血管的肿瘤细胞中也见到表达。但未见 nestin 和 GFAP 在胶质瘤血管细胞中的共表达。 结论：胶质瘤干/祖细胞不但具有向亲本肿瘤细胞分化潜能和表型，还具备向肿瘤血管细胞分化的潜能和表型，为肿瘤血管形成新理论：拟态血管和马赛克血管找到了依据。 第四部分 ABCG2 可作为高风险因子影响胶质瘤患者

41、生存期 目的：既然第一至第三部分论证了 ABCG2 是胶质瘤血管生成的关键基因，那么是否与患者生存预后相关就值得关注。本部分就此进行相关分析研究。 方法：用第一，第二部分相同的胶质瘤组织芯片进行 EnVision 免疫组化染色，检测和分析 ABCG2与 PCNA、P53、VEGF、IGFBP2、CMYC 在胶质瘤组织中的表达，並采用 COX比例风险模型逐步回归分析上述多基因与患者生存期的关系。 结果：单因素分析显示，病理分级、ABCG2、P53 和 VEGF 等因素与患者生存期有关（Plt;005） 。而多因素分析显示切除范围、病理分级、ABCG2、P53 和VEGF 高表达是影响患者生存期的

42、高风险因子。 结论：ABCG2 以高危因子的身份影响患者生存，可为把它作为靶分子治疗对象的进一步研究提供依据。本研究分为四部分： 第一部分 干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管形成相关蛋白在组织芯片中表达关系分析 目的：ABCG2 已作为肿瘤干细胞标志物在研究，已知与肿瘤耐药相关，尚未知是否与肿瘤血管形成相关。本文旨在探讨其在胶质瘤血管形成过程中与 VEGF、VEGFR 和 CD34 的关系，证明其在血管形成中起主要作用。 方法：构建布有 90 例各级别人脑胶质瘤临床标本的组织芯片，用EnVision 法的免疫组化染色检测和分析 ABCG2、VEGF 和 VEGFR（flt1）在胶质瘤中的表达率

43、，并以 CD34 单克隆抗体显示血管内皮细胞，根据 CD34 阳性的血管计数判定微血管密度（MVD） ，另用 6 例正常脑组织标本作为对照。 结果：随着胶质瘤恶性程度的增加，ABCG2、VEGF、VEGFR（flt1）和 CD34 阳性表达率均增高。ABCG2 除、级之间无统计学差异外，其余各级别之间存在统计学差异（Plt;005） ； Spearman 等级相关分析显示 ABCG2 与病理级别呈正相关；并且 ABCG2 表达水平与肿瘤 MVD 显著相关，=0540，Plt;0001。ABCG2 阳性表达的、级肿瘤标本 MVD 比、级高。VEGF、VEGFR（flt1）和 ABCG2 均为阳性

44、表达的肿瘤标本 MVD 平均值显著高于 ABCG2 阴性表达者，Plt;0001。 结论：在布有不同恶性程度胶质瘤标本的同一张组织芯片上证明了目前公认的肿瘤细胞诱导肿瘤血管生成的代表性基因 VEGF、VEGFR 和 CD34 与新发现的只有干细胞才表达的基因ABCG2 具有统计学上的相关性，为 ABCG2 阳性表达细胞具有分化成肿瘤细胞和肿瘤血管细胞的多潜能研究找到了分子依据。 第二部分 干细胞标志蛋白ABCG2 与血管形成相关蛋白在组织芯片中共表达分析 目的：在明确了干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管形成相关蛋白呈正相关的基础上，进一步明确是否有共表达的细胞，为进一步研究胶质瘤干细胞为胶质瘤

45、血管起源细胞提供图像依据。方法：采用免疫荧光激光扫描共聚焦技术，观察胶质瘤组织芯片中存在的ABCG2、 VEGF、CD34、vWF、GFAP 共表达的细胞。 结果：胶质瘤血管中存在ABCG2 和 CD34、vWF 共表达细胞与 VEGF 和 CD34 共表达的细胞；虽然正常脑组织中也存在 ABCG2 与 CD34、vWF，或 VEGF 与 CD34 共表达细胞，但共表达血管数量不多；在肿瘤组织和正常脑组织中均未见 ABCG2 和 GFAP 共表达细胞。 结论：干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管内皮细胞标志蛋白 CD34 和 vWF 共表达，不与 GFAP 共表达。而 CD34 又与 VEGF

46、共表达，说明胶质瘤干细胞还具有向胶质瘤血管内皮细胞分化的能力。这种分化还与细胞分泌 VEGF 因子相关，但与 GFAP表达无关。 第三部分 ABCG2 与 nestin 共表达细胞参与胶质瘤血管形成 目的：在胶质瘤干细胞研究中已经见到 nestin 与干细胞标志基因 CD133 的关系密切，本文探索它与另一个干细胞标志基因 ABCG2 的关系，旨在寻找两者共表达细胞在胶质瘤血管生成中的证据。 方法：从 90 例常规石蜡包埋、HE 染色的胶质瘤切片标本中，挑选血管最丰富，恶性程度最高的标本，进行 nestin和 ABCG2 免疫荧光双重染色，在激光扫描共聚焦显微镜下扫描显像，成像后对两者共表达细

47、胞与血管的关系进行分析。 结果：见到了一部分组成胶质瘤血管的细胞共表达 nestin 和 ABCG2，并有明显的血管之间的异质性。其中 nestin不仅在胶质瘤血管内皮细胞有表达，还在远离血管的肿瘤细胞中也见到表达。但未见 nestin 和 GFAP 在胶质瘤血管细胞中的共表达。 结论：胶质瘤干/祖细胞不但具有向亲本肿瘤细胞分化潜能和表型，还具备向肿瘤血管细胞分化的潜能和表型，为肿瘤血管形成新理论：拟态血管和马赛克血管找到了依据。 第四部分 ABCG2 可作为高风险因子影响胶质瘤患者生存期 目的：既然第一至第三部分论证了 ABCG2 是胶质瘤血管生成的关键基因，那么是否与患者生存预后相关就值得

48、关注。本部分就此进行相关分析研究。 方法：用第一，第二部分相同的胶质瘤组织芯片进行 EnVision 免疫组化染色，检测和分析 ABCG2与 PCNA、P53、VEGF、IGFBP2、CMYC 在胶质瘤组织中的表达，並采用 COX比例风险模型逐步回归分析上述多基因与患者生存期的关系。 结果：单因素分析显示，病理分级、ABCG2、P53 和 VEGF 等因素与患者生存期有关（Plt;005） 。而多因素分析显示切除范围、病理分级、ABCG2、P53 和VEGF 高表达是影响患者生存期的高风险因子。 结论：ABCG2 以高危因子的身份影响患者生存，可为把它作为靶分子治疗对象的进一步研究提供依据。本

49、研究分为四部分： 第一部分 干细胞标志蛋白 ABCG2 与血管形成相关蛋白在组织芯片中表达关系分析 目的：ABCG2 已作为肿瘤干细胞标志物在研究，已知与肿瘤耐药相关，尚未知是否与肿瘤血管形成相关。本文旨在探讨其在胶质瘤血管形成过程中与 VEGF、VEGFR 和 CD34 的关系，证明其在血管形成中起主要作用。 方法：构建布有 90 例各级别人脑胶质瘤临床标本的组织芯片，用EnVision 法的免疫组化染色检测和分析 ABCG2、VEGF 和 VEGFR（flt1）在胶质瘤中的表达率，并以 CD34 单克隆抗体显示血管内皮细胞，根据 CD34 阳性的血管计数判定微血管密度（MVD） ，另用 6 例正常脑组织标本作为对照。 结果：随着胶质瘤恶性程度的增加，ABCG2