1、内科学(心血管)专业毕业论文 精品论文 地黄多糖对大鼠脂肪间充质干细胞向心肌细胞诱导分化影响的研究关键词：脂肪间充质干细胞 心肌细胞 地黄多糖 过氧化氢摘要：脂肪间充质干细胞(ADMSCs)是从脂肪组织中分离得到的间充质干细胞，是成体干细胞的一种。近年来大量研究证明 ADMSCs 与其它干细胞一样既具有很强的自我更新能力，又具有多向分化的潜能。但由于 ADMSCs 来源充足、取材方便、给患者带来的痛苦较小，同时又可以避免伦理学等问题，所以 ADMSCs 逐渐成为干细胞治疗领域的一个新的焦点。近年来，随着人们生活水平的提高，心血管疾病的发病率逐年升高，已经成为威胁人类健康的主要疾病，特别是急性心
2、肌梗死、心梗后心衰等疾病具有很高的病死率和致残率。这是因为成熟心肌细胞属于终末分化细胞，缺乏再生能力，所以一旦心肌细胞受到不可逆损伤时，心肌细胞数量减少，纤维瘢痕组织增生替代，最终发展成为心力衰竭。多年来临床工作者不断致力于心肌梗死后心肌保护和梗死后心衰预防及治疗的研究。目前最有效的方法就是尽快实现心肌的再灌注，目的是保护和挽救存活的心肌细胞，从而保护心功能。再灌注疗法确实能够降低上述疾病的死亡率，但由于受到很多因素的影响，再灌注保护和挽救心肌细胞的作用有限。ADMSCs 由于具有多向分化潜能，成功诱导 ADMSCs 向心肌细胞方向分化，实现心肌细胞的再生及替代，自然成了解决这个难题的新思路。
3、目前国内外已经有大量研究发现，ADMSCs 能够成功分化为心肌细胞，甚至观察到了自主跳动心肌细胞的产生；在体的动物实验发现 ADMSCs 移植后具有减小心肌梗死面积，改善心功能的作用。这些研究发现极大的鼓舞了世界各地的科研工作者。但由于 ADMSCs 研究尚处于起始阶段，在实际应用中还有许多问题需要进一步研究，比如怎样增强 ADMSCs在体外培养的增殖能力，从而既实现 ADMSCs 在体外大量扩增，又不影响其分化能力；ADMSCs 移植到体内或梗死区后能否继续存活，怎样提高移植细胞在梗死区的存活率；如何提高 ADMSCs 向心肌细胞的转化率等。这些问题的解决对ADMSCs 尽快应用到临床具有十
4、分重要的意义。地黄多糖是中药地黄的主要有效成分，从地黄的根茎中提取。研究发现地黄多糖可以明显促进正常小鼠骨髓造血干细胞的增殖，对粒单系祖细胞和早、晚期红系祖细胞的增殖和分化亦有明显促进作用。地黄提取物还可以不同程度的对抗肝微粒体脂质过氧化，从而降低组织的过氧化脂质水平，此外地黄多糖还具有增强免疫力、抗衰老、保护心、脑、肾脏和胃黏膜等多种生物学功能。传统医学博大精深，并且拥有丰富的中医药材。本实验用地黄多糖作用于 ADMSCs，旨在将祖国的传统医学与 ADMSCs研究相结合，探索新的研究思路，希望能够给 ADMSCs 研究带来新的突破，为ADMSCs 早日应用到临床提供实验依据。 目的：分离、培
5、养大鼠 ADMSCs，观察地黄多糖对 ADMSCs 在体外培养时增殖能力和生物学性状的影响；用H2O2 作用于 ADMSCs，模拟 ADMSCs 移植到心肌梗死区的损伤，观察地黄多糖对H2O2 损伤 ADMSCs 的保护作用；观察地黄多糖对 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷(5-aza)诱导后向心肌细胞转化率的影响。 内容和方法：根据以上目的，本研究分成三个部分： 第一部分取体重约 200g 的 Wistar 雄性大鼠，在无菌条件下分离培养 ADMSCs，对第 3 代细胞行免疫组织化学染色，鉴定其表面分子CD13、CD31、CD44、CD45、CD105 等的表达。取第 3 代细胞用不同浓度
6、地黄多糖干预，MTT 法绘制细胞生长曲线；消化计数法测定不同时间点的细胞贴壁率；免疫组织化学染色鉴定其表面分子。 第二部分同样方法获取 ADMSCs。取第3 代 ADMSCs，随机分为 6 组，I：H2O2 损伤组；A、B、C、D 分别为 H2O2 损伤加地黄多糖各浓度作用组(1 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200mg/L)；N：正常对照组，对应于分组，加入不同浓度地黄多糖培养 24h，加 250umol/L 过氧化氢(H2O2)作用 2h，诱导 ADMSCs 损伤，然后用 MTT 法检测细胞存活情况，比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的水平。 第三部分同样方法获取A
7、DMSCs取第 3 代 ADMSCs，采用浓度为 10umol/L 的 5-氮胞苷诱导 24 小时，之后分为 A、B 两组(A：对照组；B：浓度为 200mg/L 的地黄多糖干预组)继续培养4 周，免疫组化染色法鉴定 -actin 的表达，流式细胞仪检测各组 ADMSCs 向心肌细胞的转化率。 结果：大鼠附睾处脂肪组织中舍有大量 ADMSCs，呈长梭形贴壁生长，免疫化学染色鉴定 CD13、CD44，CD105 阳性，CD31、CD45 阴性；第 3 代 ADMSCs 具有活跃的增殖能力，加不同浓度地黄多糖干预后，ADMSCs 的生长增殖能力均提高，而且呈浓度依赖性；ADMSCs 接种后 24
8、小时贴壁率可达95以上，地黄多糖对 ADMSCs 的贴壁率无明显影响；地黄多糖对 ADMSCs 表面分子表达无影响。 H2O2 损伤组与正常对照组相比较，存活细胞显著减少(P0.01)、LDH 水平明显增高(P0.01)。地黄多糖各浓度组与 H2O2 损伤组比较，存活细胞显著增加(P0.01)，LDH 水平明显降低(P0.01)，而且呈浓度依赖性。 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷诱导后能够成功分化为心肌细胞，-actin 染色阳性。200mg/L 的地黄多糖干预组与对照组心肌细胞的转化率分别是57.89和 19.48。两组均未观察到自主跳动的心肌细胞。 结论： 1 Wistar 大鼠脂肪组
9、织中含有大量 ADMSCs；地黄多糖可以促进 ADMSCs 的生长增殖，而且不影响 ADMSCs 的表型，地黄多糖是 ADMSCs 在体外培养扩增的有利因素。 2地黄多糖可以抑制 H2O2 引起的 ADMSCs 减少和细胞培养上清中 LDH含量的升高，减轻 H2O2 对 ADMSCs 的损伤，对 ADMSCs 具有保护作用。 3 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷诱导后能够成功分化为心肌细胞；地黄多糖干预能够提高 ADMSCs 向心肌细胞的转化率。正文内容脂肪间充质干细胞(ADMSCs)是从脂肪组织中分离得到的间充质干细胞，是成体干细胞的一种。近年来大量研究证明 ADMSCs 与其它干细胞一样
10、既具有很强的自我更新能力，又具有多向分化的潜能。但由于 ADMSCs 来源充足、取材方便、给患者带来的痛苦较小，同时又可以避免伦理学等问题，所以 ADMSCs 逐渐成为干细胞治疗领域的一个新的焦点。近年来，随着人们生活水平的提高，心血管疾病的发病率逐年升高，已经成为威胁人类健康的主要疾病，特别是急性心肌梗死、心梗后心衰等疾病具有很高的病死率和致残率。这是因为成熟心肌细胞属于终末分化细胞，缺乏再生能力，所以一旦心肌细胞受到不可逆损伤时，心肌细胞数量减少，纤维瘢痕组织增生替代，最终发展成为心力衰竭。多年来临床工作者不断致力于心肌梗死后心肌保护和梗死后心衰预防及治疗的研究。目前最有效的方法就是尽快实
11、现心肌的再灌注，目的是保护和挽救存活的心肌细胞，从而保护心功能。再灌注疗法确实能够降低上述疾病的死亡率，但由于受到很多因素的影响，再灌注保护和挽救心肌细胞的作用有限。ADMSCs 由于具有多向分化潜能，成功诱导 ADMSCs 向心肌细胞方向分化，实现心肌细胞的再生及替代，自然成了解决这个难题的新思路。目前国内外已经有大量研究发现，ADMSCs 能够成功分化为心肌细胞，甚至观察到了自主跳动心肌细胞的产生；在体的动物实验发现 ADMSCs 移植后具有减小心肌梗死面积，改善心功能的作用。这些研究发现极大的鼓舞了世界各地的科研工作者。但由于 ADMSCs 研究尚处于起始阶段，在实际应用中还有许多问题需
12、要进一步研究，比如怎样增强 ADMSCs在体外培养的增殖能力，从而既实现 ADMSCs 在体外大量扩增，又不影响其分化能力；ADMSCs 移植到体内或梗死区后能否继续存活，怎样提高移植细胞在梗死区的存活率；如何提高 ADMSCs 向心肌细胞的转化率等。这些问题的解决对ADMSCs 尽快应用到临床具有十分重要的意义。地黄多糖是中药地黄的主要有效成分，从地黄的根茎中提取。研究发现地黄多糖可以明显促进正常小鼠骨髓造血干细胞的增殖，对粒单系祖细胞和早、晚期红系祖细胞的增殖和分化亦有明显促进作用。地黄提取物还可以不同程度的对抗肝微粒体脂质过氧化，从而降低组织的过氧化脂质水平，此外地黄多糖还具有增强免疫力
13、、抗衰老、保护心、脑、肾脏和胃黏膜等多种生物学功能。传统医学博大精深，并且拥有丰富的中医药材。本实验用地黄多糖作用于 ADMSCs，旨在将祖国的传统医学与 ADMSCs研究相结合，探索新的研究思路，希望能够给 ADMSCs 研究带来新的突破，为ADMSCs 早日应用到临床提供实验依据。 目的：分离、培养大鼠 ADMSCs，观察地黄多糖对 ADMSCs 在体外培养时增殖能力和生物学性状的影响；用H2O2 作用于 ADMSCs，模拟 ADMSCs 移植到心肌梗死区的损伤，观察地黄多糖对H2O2 损伤 ADMSCs 的保护作用；观察地黄多糖对 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷(5-aza)诱导后向
14、心肌细胞转化率的影响。 内容和方法：根据以上目的，本研究分成三个部分： 第一部分取体重约 200g 的 Wistar 雄性大鼠，在无菌条件下分离培养 ADMSCs，对第 3 代细胞行免疫组织化学染色，鉴定其表面分子CD13、CD31、CD44、CD45、CD105 等的表达。取第 3 代细胞用不同浓度地黄多糖干预，MTT 法绘制细胞生长曲线；消化计数法测定不同时间点的细胞贴壁率；免疫组织化学染色鉴定其表面分子。 第二部分同样方法获取 ADMSCs。取第3 代 ADMSCs，随机分为 6 组，I：H2O2 损伤组；A、B、C、D 分别为 H2O2 损伤加地黄多糖各浓度作用组(1 mg/L、50
15、mg/L、100 mg/L、200mg/L)；N：正常对照组，对应于分组，加入不同浓度地黄多糖培养 24h，加 250umol/L 过氧化氢(H2O2)作用 2h，诱导 ADMSCs 损伤，然后用 MTT 法检测细胞存活情况，比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的水平。 第三部分同样方法获取ADMSCs取第 3 代 ADMSCs，采用浓度为 10umol/L 的 5-氮胞苷诱导 24 小时，之后分为 A、B 两组(A：对照组；B：浓度为 200mg/L 的地黄多糖干预组)继续培养4 周，免疫组化染色法鉴定 -actin 的表达，流式细胞仪检测各组 ADMSCs 向心肌细胞的转化率。 结
16、果：大鼠附睾处脂肪组织中舍有大量 ADMSCs，呈长梭形贴壁生长，免疫化学染色鉴定 CD13、CD44，CD105 阳性，CD31、CD45 阴性；第 3 代 ADMSCs 具有活跃的增殖能力，加不同浓度地黄多糖干预后，ADMSCs 的生长增殖能力均提高，而且呈浓度依赖性；ADMSCs 接种后 24 小时贴壁率可达95以上，地黄多糖对 ADMSCs 的贴壁率无明显影响；地黄多糖对 ADMSCs 表面分子表达无影响。 H2O2 损伤组与正常对照组相比较，存活细胞显著减少(P0.01)、LDH 水平明显增高(P0.01)。地黄多糖各浓度组与 H2O2 损伤组比较，存活细胞显著增加(P0.01)，L
17、DH 水平明显降低(P0.01)，而且呈浓度依赖性。 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷诱导后能够成功分化为心肌细胞，-actin 染色阳性。200mg/L 的地黄多糖干预组与对照组心肌细胞的转化率分别是57.89和 19.48。两组均未观察到自主跳动的心肌细胞。 结论： 1 Wistar 大鼠脂肪组织中含有大量 ADMSCs；地黄多糖可以促进 ADMSCs 的生长增殖，而且不影响 ADMSCs 的表型，地黄多糖是 ADMSCs 在体外培养扩增的有利因素。 2地黄多糖可以抑制 H2O2 引起的 ADMSCs 减少和细胞培养上清中 LDH含量的升高，减轻 H2O2 对 ADMSCs 的损伤，对
18、ADMSCs 具有保护作用。 3 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷诱导后能够成功分化为心肌细胞；地黄多糖干预能够提高 ADMSCs 向心肌细胞的转化率。脂肪间充质干细胞(ADMSCs)是从脂肪组织中分离得到的间充质干细胞，是成体干细胞的一种。近年来大量研究证明 ADMSCs 与其它干细胞一样既具有很强的自我更新能力，又具有多向分化的潜能。但由于 ADMSCs 来源充足、取材方便、给患者带来的痛苦较小，同时又可以避免伦理学等问题，所以 ADMSCs 逐渐成为干细胞治疗领域的一个新的焦点。近年来，随着人们生活水平的提高，心血管疾病的发病率逐年升高，已经成为威胁人类健康的主要疾病，特别是急性心肌梗
19、死、心梗后心衰等疾病具有很高的病死率和致残率。这是因为成熟心肌细胞属于终末分化细胞，缺乏再生能力，所以一旦心肌细胞受到不可逆损伤时，心肌细胞数量减少，纤维瘢痕组织增生替代，最终发展成为心力衰竭。多年来临床工作者不断致力于心肌梗死后心肌保护和梗死后心衰预防及治疗的研究。目前最有效的方法就是尽快实现心肌的再灌注，目的是保护和挽救存活的心肌细胞，从而保护心功能。再灌注疗法确实能够降低上述疾病的死亡率，但由于受到很多因素的影响，再灌注保护和挽救心肌细胞的作用有限。ADMSCs 由于具有多向分化潜能，成功诱导 ADMSCs 向心肌细胞方向分化，实现心肌细胞的再生及替代，自然成了解决这个难题的新思路。目前
20、国内外已经有大量研究发现，ADMSCs 能够成功分化为心肌细胞，甚至观察到了自主跳动心肌细胞的产生；在体的动物实验发现 ADMSCs 移植后具有减小心肌梗死面积，改善心功能的作用。这些研究发现极大的鼓舞了世界各地的科研工作者。但由于 ADMSCs 研究尚处于起始阶段，在实际应用中还有许多问题需要进一步研究，比如怎样增强 ADMSCs 在体外培养的增殖能力，从而既实现 ADMSCs 在体外大量扩增，又不影响其分化能力；ADMSCs 移植到体内或梗死区后能否继续存活，怎样提高移植细胞在梗死区的存活率；如何提高 ADMSCs 向心肌细胞的转化率等。这些问题的解决对 ADMSCs 尽快应用到临床具有十
21、分重要的意义。地黄多糖是中药地黄的主要有效成分，从地黄的根茎中提取。研究发现地黄多糖可以明显促进正常小鼠骨髓造血干细胞的增殖，对粒单系祖细胞和早、晚期红系祖细胞的增殖和分化亦有明显促进作用。地黄提取物还可以不同程度的对抗肝微粒体脂质过氧化，从而降低组织的过氧化脂质水平，此外地黄多糖还具有增强免疫力、抗衰老、保护心、脑、肾脏和胃黏膜等多种生物学功能。传统医学博大精深，并且拥有丰富的中医药材。本实验用地黄多糖作用于 ADMSCs，旨在将祖国的传统医学与 ADMSCs 研究相结合，探索新的研究思路，希望能够给 ADMSCs 研究带来新的突破，为 ADMSCs 早日应用到临床提供实验依据。 目的：分离
22、、培养大鼠 ADMSCs，观察地黄多糖对 ADMSCs 在体外培养时增殖能力和生物学性状的影响；用 H2O2 作用于ADMSCs，模拟 ADMSCs 移植到心肌梗死区的损伤，观察地黄多糖对 H2O2 损伤ADMSCs 的保护作用；观察地黄多糖对 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷(5-aza)诱导后向心肌细胞转化率的影响。 内容和方法：根据以上目的，本研究分成三个部分： 第一部分取体重约 200g 的 Wistar 雄性大鼠，在无菌条件下分离培养ADMSCs，对第 3 代细胞行免疫组织化学染色，鉴定其表面分子CD13、CD31、CD44、CD45、CD105 等的表达。取第 3 代细胞用不同浓
23、度地黄多糖干预，MTT 法绘制细胞生长曲线；消化计数法测定不同时间点的细胞贴壁率；免疫组织化学染色鉴定其表面分子。 第二部分同样方法获取 ADMSCs。取第3 代 ADMSCs，随机分为 6 组，I：H2O2 损伤组；A、B、C、D 分别为 H2O2 损伤加地黄多糖各浓度作用组(1 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200mg/L)；N：正常对照组，对应于分组，加入不同浓度地黄多糖培养 24h，加 250umol/L 过氧化氢(H2O2)作用 2h，诱导 ADMSCs 损伤，然后用 MTT 法检测细胞存活情况，比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的水平。 第三部分同样方法获取
24、ADMSCs取第 3 代 ADMSCs，采用浓度为 10umol/L 的 5-氮胞苷诱导 24 小时，之后分为 A、B 两组(A：对照组；B：浓度为 200mg/L 的地黄多糖干预组)继续培养4 周，免疫组化染色法鉴定 -actin 的表达，流式细胞仪检测各组 ADMSCs 向心肌细胞的转化率。 结果：大鼠附睾处脂肪组织中舍有大量 ADMSCs，呈长梭形贴壁生长，免疫化学染色鉴定 CD13、CD44，CD105 阳性，CD31、CD45 阴性；第 3 代 ADMSCs 具有活跃的增殖能力，加不同浓度地黄多糖干预后，ADMSCs 的生长增殖能力均提高，而且呈浓度依赖性；ADMSCs 接种后 24
25、 小时贴壁率可达95以上，地黄多糖对 ADMSCs 的贴壁率无明显影响；地黄多糖对 ADMSCs 表面分子表达无影响。 H2O2 损伤组与正常对照组相比较，存活细胞显著减少(P0.01)、LDH 水平明显增高(P0.01)。地黄多糖各浓度组与 H2O2 损伤组比较，存活细胞显著增加(P0.01)，LDH 水平明显降低(P0.01)，而且呈浓度依赖性。 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷诱导后能够成功分化为心肌细胞，-actin 染色阳性。200mg/L 的地黄多糖干预组与对照组心肌细胞的转化率分别是57.89和 19.48。两组均未观察到自主跳动的心肌细胞。 结论： 1 Wistar 大鼠脂肪
26、组织中含有大量 ADMSCs；地黄多糖可以促进 ADMSCs 的生长增殖，而且不影响 ADMSCs 的表型，地黄多糖是 ADMSCs 在体外培养扩增的有利因素。 2地黄多糖可以抑制 H2O2 引起的 ADMSCs 减少和细胞培养上清中 LDH含量的升高，减轻 H2O2 对 ADMSCs 的损伤，对 ADMSCs 具有保护作用。 3 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷诱导后能够成功分化为心肌细胞；地黄多糖干预能够提高 ADMSCs 向心肌细胞的转化率。脂肪间充质干细胞(ADMSCs)是从脂肪组织中分离得到的间充质干细胞，是成体干细胞的一种。近年来大量研究证明 ADMSCs 与其它干细胞一样既具有
27、很强的自我更新能力，又具有多向分化的潜能。但由于 ADMSCs 来源充足、取材方便、给患者带来的痛苦较小，同时又可以避免伦理学等问题，所以 ADMSCs 逐渐成为干细胞治疗领域的一个新的焦点。近年来，随着人们生活水平的提高，心血管疾病的发病率逐年升高，已经成为威胁人类健康的主要疾病，特别是急性心肌梗死、心梗后心衰等疾病具有很高的病死率和致残率。这是因为成熟心肌细胞属于终末分化细胞，缺乏再生能力，所以一旦心肌细胞受到不可逆损伤时，心肌细胞数量减少，纤维瘢痕组织增生替代，最终发展成为心力衰竭。多年来临床工作者不断致力于心肌梗死后心肌保护和梗死后心衰预防及治疗的研究。目前最有效的方法就是尽快实现心肌
28、的再灌注，目的是保护和挽救存活的心肌细胞，从而保护心功能。再灌注疗法确实能够降低上述疾病的死亡率，但由于受到很多因素的影响，再灌注保护和挽救心肌细胞的作用有限。ADMSCs 由于具有多向分化潜能，成功诱导 ADMSCs 向心肌细胞方向分化，实现心肌细胞的再生及替代，自然成了解决这个难题的新思路。目前国内外已经有大量研究发现，ADMSCs 能够成功分化为心肌细胞，甚至观察到了自主跳动心肌细胞的产生；在体的动物实验发现 ADMSCs 移植后具有减小心肌梗死面积，改善心功能的作用。这些研究发现极大的鼓舞了世界各地的科研工作者。但由于 ADMSCs 研究尚处于起始阶段，在实际应用中还有许多问题需要进一
29、步研究，比如怎样增强 ADMSCs 在体外培养的增殖能力，从而既实现 ADMSCs 在体外大量扩增，又不影响其分化能力；ADMSCs 移植到体内或梗死区后能否继续存活，怎样提高移植细胞在梗死区的存活率；如何提高 ADMSCs 向心肌细胞的转化率等。这些问题的解决对 ADMSCs 尽快应用到临床具有十分重要的意义。地黄多糖是中药地黄的主要有效成分，从地黄的根茎中提取。研究发现地黄多糖可以明显促进正常小鼠骨髓造血干细胞的增殖，对粒单系祖细胞和早、晚期红系祖细胞的增殖和分化亦有明显促进作用。地黄提取物还可以不同程度的对抗肝微粒体脂质过氧化，从而降低组织的过氧化脂质水平，此外地黄多糖还具有增强免疫力、
30、抗衰老、保护心、脑、肾脏和胃黏膜等多种生物学功能。传统医学博大精深，并且拥有丰富的中医药材。本实验用地黄多糖作用于 ADMSCs，旨在将祖国的传统医学与 ADMSCs 研究相结合，探索新的研究思路，希望能够给 ADMSCs 研究带来新的突破，为 ADMSCs 早日应用到临床提供实验依据。 目的：分离、培养大鼠 ADMSCs，观察地黄多糖对 ADMSCs 在体外培养时增殖能力和生物学性状的影响；用 H2O2 作用于ADMSCs，模拟 ADMSCs 移植到心肌梗死区的损伤，观察地黄多糖对 H2O2 损伤ADMSCs 的保护作用；观察地黄多糖对 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷(5-aza)诱导后
31、向心肌细胞转化率的影响。 内容和方法：根据以上目的，本研究分成三个部分： 第一部分取体重约 200g 的 Wistar 雄性大鼠，在无菌条件下分离培养ADMSCs，对第 3 代细胞行免疫组织化学染色，鉴定其表面分子CD13、CD31、CD44、CD45、CD105 等的表达。取第 3 代细胞用不同浓度地黄多糖干预，MTT 法绘制细胞生长曲线；消化计数法测定不同时间点的细胞贴壁率；免疫组织化学染色鉴定其表面分子。 第二部分同样方法获取 ADMSCs。取第3 代 ADMSCs，随机分为 6 组，I：H2O2 损伤组；A、B、C、D 分别为 H2O2 损伤加地黄多糖各浓度作用组(1 mg/L、50
32、mg/L、100 mg/L、200mg/L)；N：正常对照组，对应于分组，加入不同浓度地黄多糖培养 24h，加 250umol/L 过氧化氢(H2O2)作用 2h，诱导 ADMSCs 损伤，然后用 MTT 法检测细胞存活情况，比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的水平。 第三部分同样方法获取ADMSCs取第 3 代 ADMSCs，采用浓度为 10umol/L 的 5-氮胞苷诱导 24 小时，之后分为 A、B 两组(A：对照组；B：浓度为 200mg/L 的地黄多糖干预组)继续培养4 周，免疫组化染色法鉴定 -actin 的表达，流式细胞仪检测各组 ADMSCs 向心肌细胞的转化率。 结
33、果：大鼠附睾处脂肪组织中舍有大量 ADMSCs，呈长梭形贴壁生长，免疫化学染色鉴定 CD13、CD44，CD105 阳性，CD31、CD45 阴性；第 3 代 ADMSCs 具有活跃的增殖能力，加不同浓度地黄多糖干预后，ADMSCs 的生长增殖能力均提高，而且呈浓度依赖性；ADMSCs 接种后 24 小时贴壁率可达95以上，地黄多糖对 ADMSCs 的贴壁率无明显影响；地黄多糖对 ADMSCs 表面分子表达无影响。 H2O2 损伤组与正常对照组相比较，存活细胞显著减少(P0.01)、LDH 水平明显增高(P0.01)。地黄多糖各浓度组与 H2O2 损伤组比较，存活细胞显著增加(P0.01)，L
34、DH 水平明显降低(P0.01)，而且呈浓度依赖性。 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷诱导后能够成功分化为心肌细胞，-actin 染色阳性。200mg/L 的地黄多糖干预组与对照组心肌细胞的转化率分别是57.89和 19.48。两组均未观察到自主跳动的心肌细胞。 结论： 1 Wistar 大鼠脂肪组织中含有大量 ADMSCs；地黄多糖可以促进 ADMSCs 的生长增殖，而且不影响 ADMSCs 的表型，地黄多糖是 ADMSCs 在体外培养扩增的有利因素。 2地黄多糖可以抑制 H2O2 引起的 ADMSCs 减少和细胞培养上清中 LDH含量的升高，减轻 H2O2 对 ADMSCs 的损伤，对
35、ADMSCs 具有保护作用。 3 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷诱导后能够成功分化为心肌细胞；地黄多糖干预能够提高 ADMSCs 向心肌细胞的转化率。脂肪间充质干细胞(ADMSCs)是从脂肪组织中分离得到的间充质干细胞，是成体干细胞的一种。近年来大量研究证明 ADMSCs 与其它干细胞一样既具有很强的自我更新能力，又具有多向分化的潜能。但由于 ADMSCs 来源充足、取材方便、给患者带来的痛苦较小，同时又可以避免伦理学等问题，所以 ADMSCs 逐渐成为干细胞治疗领域的一个新的焦点。近年来，随着人们生活水平的提高，心血管疾病的发病率逐年升高，已经成为威胁人类健康的主要疾病，特别是急性心肌梗
36、死、心梗后心衰等疾病具有很高的病死率和致残率。这是因为成熟心肌细胞属于终末分化细胞，缺乏再生能力，所以一旦心肌细胞受到不可逆损伤时，心肌细胞数量减少，纤维瘢痕组织增生替代，最终发展成为心力衰竭。多年来临床工作者不断致力于心肌梗死后心肌保护和梗死后心衰预防及治疗的研究。目前最有效的方法就是尽快实现心肌的再灌注，目的是保护和挽救存活的心肌细胞，从而保护心功能。再灌注疗法确实能够降低上述疾病的死亡率，但由于受到很多因素的影响，再灌注保护和挽救心肌细胞的作用有限。ADMSCs 由于具有多向分化潜能，成功诱导 ADMSCs 向心肌细胞方向分化，实现心肌细胞的再生及替代，自然成了解决这个难题的新思路。目前
37、国内外已经有大量研究发现，ADMSCs 能够成功分化为心肌细胞，甚至观察到了自主跳动心肌细胞的产生；在体的动物实验发现 ADMSCs 移植后具有减小心肌梗死面积，改善心功能的作用。这些研究发现极大的鼓舞了世界各地的科研工作者。但由于 ADMSCs 研究尚处于起始阶段，在实际应用中还有许多问题需要进一步研究，比如怎样增强 ADMSCs 在体外培养的增殖能力，从而既实现 ADMSCs 在体外大量扩增，又不影响其分化能力；ADMSCs 移植到体内或梗死区后能否继续存活，怎样提高移植细胞在梗死区的存活率；如何提高 ADMSCs 向心肌细胞的转化率等。这些问题的解决对 ADMSCs 尽快应用到临床具有十
38、分重要的意义。地黄多糖是中药地黄的主要有效成分，从地黄的根茎中提取。研究发现地黄多糖可以明显促进正常小鼠骨髓造血干细胞的增殖，对粒单系祖细胞和早、晚期红系祖细胞的增殖和分化亦有明显促进作用。地黄提取物还可以不同程度的对抗肝微粒体脂质过氧化，从而降低组织的过氧化脂质水平，此外地黄多糖还具有增强免疫力、抗衰老、保护心、脑、肾脏和胃黏膜等多种生物学功能。传统医学博大精深，并且拥有丰富的中医药材。本实验用地黄多糖作用于 ADMSCs，旨在将祖国的传统医学与 ADMSCs 研究相结合，探索新的研究思路，希望能够给 ADMSCs 研究带来新的突破，为 ADMSCs 早日应用到临床提供实验依据。 目的：分离
39、、培养大鼠 ADMSCs，观察地黄多糖对 ADMSCs 在体外培养时增殖能力和生物学性状的影响；用 H2O2 作用于ADMSCs，模拟 ADMSCs 移植到心肌梗死区的损伤，观察地黄多糖对 H2O2 损伤ADMSCs 的保护作用；观察地黄多糖对 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷(5-aza)诱导后向心肌细胞转化率的影响。 内容和方法：根据以上目的，本研究分成三个部分： 第一部分取体重约 200g 的 Wistar 雄性大鼠，在无菌条件下分离培养ADMSCs，对第 3 代细胞行免疫组织化学染色，鉴定其表面分子CD13、CD31、CD44、CD45、CD105 等的表达。取第 3 代细胞用不同浓
40、度地黄多糖干预，MTT 法绘制细胞生长曲线；消化计数法测定不同时间点的细胞贴壁率；免疫组织化学染色鉴定其表面分子。 第二部分同样方法获取 ADMSCs。取第3 代 ADMSCs，随机分为 6 组，I：H2O2 损伤组；A、B、C、D 分别为 H2O2 损伤加地黄多糖各浓度作用组(1 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200mg/L)；N：正常对照组，对应于分组，加入不同浓度地黄多糖培养 24h，加 250umol/L 过氧化氢(H2O2)作用 2h，诱导 ADMSCs 损伤，然后用 MTT 法检测细胞存活情况，比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的水平。 第三部分同样方法获取
41、ADMSCs取第 3 代 ADMSCs，采用浓度为 10umol/L 的 5-氮胞苷诱导 24 小时，之后分为 A、B 两组(A：对照组；B：浓度为 200mg/L 的地黄多糖干预组)继续培养4 周，免疫组化染色法鉴定 -actin 的表达，流式细胞仪检测各组 ADMSCs 向心肌细胞的转化率。 结果：大鼠附睾处脂肪组织中舍有大量 ADMSCs，呈长梭形贴壁生长，免疫化学染色鉴定 CD13、CD44，CD105 阳性，CD31、CD45 阴性；第 3 代 ADMSCs 具有活跃的增殖能力，加不同浓度地黄多糖干预后，ADMSCs 的生长增殖能力均提高，而且呈浓度依赖性；ADMSCs 接种后 24
42、 小时贴壁率可达95以上，地黄多糖对 ADMSCs 的贴壁率无明显影响；地黄多糖对 ADMSCs 表面分子表达无影响。 H2O2 损伤组与正常对照组相比较，存活细胞显著减少(P0.01)、LDH 水平明显增高(P0.01)。地黄多糖各浓度组与 H2O2 损伤组比较，存活细胞显著增加(P0.01)，LDH 水平明显降低(P0.01)，而且呈浓度依赖性。 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷诱导后能够成功分化为心肌细胞，-actin 染色阳性。200mg/L 的地黄多糖干预组与对照组心肌细胞的转化率分别是57.89和 19.48。两组均未观察到自主跳动的心肌细胞。 结论： 1 Wistar 大鼠脂肪
43、组织中含有大量 ADMSCs；地黄多糖可以促进 ADMSCs 的生长增殖，而且不影响 ADMSCs 的表型，地黄多糖是 ADMSCs 在体外培养扩增的有利因素。 2地黄多糖可以抑制 H2O2 引起的 ADMSCs 减少和细胞培养上清中 LDH含量的升高，减轻 H2O2 对 ADMSCs 的损伤，对 ADMSCs 具有保护作用。 3 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷诱导后能够成功分化为心肌细胞；地黄多糖干预能够提高 ADMSCs 向心肌细胞的转化率。脂肪间充质干细胞(ADMSCs)是从脂肪组织中分离得到的间充质干细胞，是成体干细胞的一种。近年来大量研究证明 ADMSCs 与其它干细胞一样既具有
44、很强的自我更新能力，又具有多向分化的潜能。但由于 ADMSCs 来源充足、取材方便、给患者带来的痛苦较小，同时又可以避免伦理学等问题，所以 ADMSCs 逐渐成为干细胞治疗领域的一个新的焦点。近年来，随着人们生活水平的提高，心血管疾病的发病率逐年升高，已经成为威胁人类健康的主要疾病，特别是急性心肌梗死、心梗后心衰等疾病具有很高的病死率和致残率。这是因为成熟心肌细胞属于终末分化细胞，缺乏再生能力，所以一旦心肌细胞受到不可逆损伤时，心肌细胞数量减少，纤维瘢痕组织增生替代，最终发展成为心力衰竭。多年来临床工作者不断致力于心肌梗死后心肌保护和梗死后心衰预防及治疗的研究。目前最有效的方法就是尽快实现心肌
45、的再灌注，目的是保护和挽救存活的心肌细胞，从而保护心功能。再灌注疗法确实能够降低上述疾病的死亡率，但由于受到很多因素的影响，再灌注保护和挽救心肌细胞的作用有限。ADMSCs 由于具有多向分化潜能，成功诱导 ADMSCs 向心肌细胞方向分化，实现心肌细胞的再生及替代，自然成了解决这个难题的新思路。目前国内外已经有大量研究发现，ADMSCs 能够成功分化为心肌细胞，甚至观察到了自主跳动心肌细胞的产生；在体的动物实验发现 ADMSCs 移植后具有减小心肌梗死面积，改善心功能的作用。这些研究发现极大的鼓舞了世界各地的科研工作者。但由于 ADMSCs 研究尚处于起始阶段，在实际应用中还有许多问题需要进一
46、步研究，比如怎样增强 ADMSCs 在体外培养的增殖能力，从而既实现 ADMSCs 在体外大量扩增，又不影响其分化能力；ADMSCs 移植到体内或梗死区后能否继续存活，怎样提高移植细胞在梗死区的存活率；如何提高 ADMSCs 向心肌细胞的转化率等。这些问题的解决对 ADMSCs 尽快应用到临床具有十分重要的意义。地黄多糖是中药地黄的主要有效成分，从地黄的根茎中提取。研究发现地黄多糖可以明显促进正常小鼠骨髓造血干细胞的增殖，对粒单系祖细胞和早、晚期红系祖细胞的增殖和分化亦有明显促进作用。地黄提取物还可以不同程度的对抗肝微粒体脂质过氧化，从而降低组织的过氧化脂质水平，此外地黄多糖还具有增强免疫力、
47、抗衰老、保护心、脑、肾脏和胃黏膜等多种生物学功能。传统医学博大精深，并且拥有丰富的中医药材。本实验用地黄多糖作用于 ADMSCs，旨在将祖国的传统医学与 ADMSCs 研究相结合，探索新的研究思路，希望能够给 ADMSCs 研究带来新的突破，为 ADMSCs 早日应用到临床提供实验依据。 目的：分离、培养大鼠 ADMSCs，观察地黄多糖对 ADMSCs 在体外培养时增殖能力和生物学性状的影响；用 H2O2 作用于ADMSCs，模拟 ADMSCs 移植到心肌梗死区的损伤，观察地黄多糖对 H2O2 损伤ADMSCs 的保护作用；观察地黄多糖对 ADMSCs 在体外经 5-氮胞苷(5-aza)诱导后
48、向心肌细胞转化率的影响。 内容和方法：根据以上目的，本研究分成三个部分： 第一部分取体重约 200g 的 Wistar 雄性大鼠，在无菌条件下分离培养ADMSCs，对第 3 代细胞行免疫组织化学染色，鉴定其表面分子CD13、CD31、CD44、CD45、CD105 等的表达。取第 3 代细胞用不同浓度地黄多糖干预，MTT 法绘制细胞生长曲线；消化计数法测定不同时间点的细胞贴壁率；免疫组织化学染色鉴定其表面分子。 第二部分同样方法获取 ADMSCs。取第3 代 ADMSCs，随机分为 6 组，I：H2O2 损伤组；A、B、C、D 分别为 H2O2 损伤加地黄多糖各浓度作用组(1 mg/L、50
49、mg/L、100 mg/L、200mg/L)；N：正常对照组，对应于分组，加入不同浓度地黄多糖培养 24h，加 250umol/L 过氧化氢(H2O2)作用 2h，诱导 ADMSCs 损伤，然后用 MTT 法检测细胞存活情况，比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的水平。 第三部分同样方法获取ADMSCs取第 3 代 ADMSCs，采用浓度为 10umol/L 的 5-氮胞苷诱导 24 小时，之后分为 A、B 两组(A：对照组；B：浓度为 200mg/L 的地黄多糖干预组)继续培养4 周，免疫组化染色法鉴定 -actin 的表达，流式细胞仪检测各组 ADMSCs 向心肌细胞的转化率。 结果：大鼠附睾处脂肪组织中舍有大量 ADMSCs，呈长梭形贴壁生长，免疫化学染色鉴定 CD13、CD44，CD105 阳性，CD31、CD45 阴性；第 3 代 ADMSCs 具有活跃的增殖能力，加不同浓度地黄多糖干预后，ADMSCs 的生长增殖能力均提高，而且呈浓度依赖性；ADMSCs 接种后
