1、内科学(血液学)专业优秀论文 伴有 t(16;17)(q24;q12)不平衡染色体易位的人急性粒细胞白血病细胞系 SH-2 的建立和鉴定关键词：白血病 细胞系 染色体易位 断裂位点 p53 基因摘要：目的:报道 1 株伴有 t（16；17） （q24；q12）所致衍生 16 号染色体为特征的髓系白血病细胞系的建立及其生物学特征的初步鉴定。 方法与结果: 1、病例资料 SH2 细胞系来自初诊时 1 例 35 岁男性 AMLM2a 患者骨髓，该患者对多种化疗药物耐药，于接受异基因半相合外周血造血干细胞移植后 1 月余死于白血病复发。 2、细胞系的建立应用淋巴细胞分离液梯度密度离心法常规分离骨髓单个
2、核细胞，以含 20%胎牛血清的 IMDM 培养基调整细胞密度为2*106/ml，接种于 25c培养瓶中，置 37、5%CO2、饱和湿度培养箱中培养，每 34d2/3半量换液 1 次，约一周后瓶底出现贴壁黏附的基质细胞，每次换液保留部分贴壁基质细胞与悬浮的白血病细胞共培养，并调整细胞密度为（0.21）*106/ml。约一个月后培养细胞出现缓慢增殖，在培养基中加入细胞因子 10ug/ml 的 rhIL3，3 个月后增殖速度有所增快，4 个月后培养体系中撤去 rhIL3，每 3d 继续 2/3 换液 1 次。目前已在体外培养 22 月，能耐受冻存和复苏，命名为 SH2。 3、SH2 细胞的形态学特征
3、及组化染色 SH2 细胞在瑞氏染色下呈中等大小，大多为圆形和类圆形，胞核圆形，少数胞核可见轻度凹陷，核染色质呈细致，部分可见核仁，胞浆量中等，染灰蓝色，部分细胞胞浆中可见少量紫红色嗜天青颗粒。POX 染色 58%为阳性。醋酸萘酚酯酶染色 39%为阳性，不被氟化钠抑制。糖原染色 18%阳性。 4、SH2 细胞的超微结构特征 透射电镜下 SH2 细胞呈圆或椭圆形，细胞表面有短小微绒毛，细胞质内可见丰富的细胞器如：线粒体、内质网、糖原颗粒和溶酶体颗粒，核型不规则，部分细胞可见核仁。 5、SH2 细胞的免疫表型 FCM 检测显示 SH2 细胞主要表达髓系、NK 系抗原，也有部分 T 淋系的标志。其中C
4、D13、CD33、CD38、CD117、CD7、CD56、CD25、CD16/56 和 MPO 阳性，而 T 系抗原 CD2、CD3、CD4、CD5 阴性；B 系抗原 CD10、CD19、CD20、CD22 阴性；单核细胞系抗原 CD14 阴性；巨核系 CD41、CD61、CD42b 阴性；另外 CD34、MDR1表达阴性；嗜碱粒细胞标记 CD203 阴性。 6、SH2 细胞的细胞和分子遗传学特征 患者 2005 年 6 月 23 日原代骨髓细胞核型分析结果提示 45，X，Y，der（16）t（16；17） （q24；q12） ，17，+1918。高剂量化疗一疗程后核型为 45，X，Y，der
5、（16）t（16；17） ，17，+1921/78，der（16）t（16；17）1。2006215（培养 5 个多月）细胞系核型分析结果为：45，X，Y，der（16）t（16；17） （q24； q12） ，17，+195/45，X，Y，del（4） （q2？6） 、der（16）t（16；17） （q24；q12） ，17，+192/69105，含 der（16）t（16；17）215。培养 22 个月 SH2 核型分析：染色体数目分别为73，75，75，76，76，77，77，78，79，79，81，81，82，85，88，92，94，100，101，102，核型为：73102（80）
6、 ，XX，Y，Y，del（1q31）x2，der（16）t（16；17） （q24； q12）2，17，17，+19，+1920。 应用 16 号和 17 号整条染色体涂抹探针进行染色体涂抹，结果显示：1 条 16 号和 1 条 17 号染色体分别呈现整条红色和整条绿色的荧光信号，提示为正常的16 和 17 号染色体，1 条 16 号染色体呈现大的红色荧光信号和小的绿色荧光信号并存，证实 16 和 17 号染色体之间发生了不平衡易位，形成衍生 16 号染色体同时丢失了一条 17 号染色体。染色体涂抹检测 19 号染色体三体显示：分裂相中有 3 条整条呈绿色荧光信号的染色体，提示为三体 19 号
7、染色体。 FISH检测 PML/RAR 融合基因：所有分析的中期和间期细胞均显示分离的双红双绿荧光信号，未见 PMLRAR 融合信号，表明该例的 t（16；17）易位未涉及RAR 基因。16 和 17 号染色体断裂位点定位：（1）FISH 检测 CBF 基因：在同一条 16 号染色体上可见二个黄色荧光信号（CBFp）靠近二个红色荧光信号（16 号着丝粒） ，提示衍生 16 号染色体的长臂断裂位点位于 CBF 所在的位点16q22 以下。 （2）FISH 检测 RAR 基因：采用 16 号着丝粒（红色信号）加RAR 双色（红绿融合信号） ，一条染色体显示红色荧光信号提示为正常 16 号染色体；1
8、 条染色体显示红绿融合信号提示正常的 17 号染色体；另 1 条染色体中间呈红色信号而另一端呈红绿融合信号，提示为 16 和 17 号染色体易位所致的衍生 16 号染色体，并且表明 17 号染色体断裂位点位于 RAR 基因的上方。（3）FISH 检测 16q 断裂点：同时应用 16 号着丝粒探针（红色）和一条 16q 亚端粒探针（绿色）进行双色 FISH 检测，结果显示：一条较小的染色体上同时呈现一个红色信号以及一个小的绿色信号提示为正常的 16 号染色体，另一条衍生16 号染色体中间可见一个红色信号而在长臂中段可见绿色信号，提示 16 号染色体的断裂位点位于 q24。17 号上 p53 探针
9、检测显示 SH2 细胞中期相一条 17号染色体上存在 2 个绿色荧光信号为 p53 信号，而另一条 17 号染色体缺失。PCR 扩增 p53 基因 5、6、7 和 8 号外显子所得产物经序列分析发现有 p53 基因的 5 号外显子存在突变，自 p53 基因起动子开始的第 576 号碱基 GT，密码子CAGCAT，相应编码的氨基酸在 192 位处由谷氨酸组氨酸。 多色 FISH：产用 Vysis Spectra VysionTMMFISH 探针试剂盒，应用 5 种荧光素SpectrumGold、SpectrumFred、SpectrumAqua、SpectrumRed 和 SpectrumGre
10、en按缺口平移法对每一种染色体进行不同的组合标记，制备成探针池，均显示一条 16 号染色体长臂末端有来源于 17 号染色体的片段，三条 19 号染色体，Y 染色体缺失。检测结果证实了染色体核型分析结果。 7、SH2 细胞集落形成能力 9、各种细胞因子对 SH2 细胞的增殖效应 10、SH2 细胞的多药耐药研究 结果:分析采用 Genescan3.1 系统。患者初诊时染色体核型分析显示除 45，X，Y，der（16）t（16；17） （q24； q12） ，17，+19 外还存在少量正常核型的细胞，长期培养的 SH2 细胞系染色体分析仅见包括 Y 染色体缺失在内的异常核型的细胞，因此在 SH2
11、细胞系 STR 检测分析结果尽见 X 染色体信号，而无 Y 染色体信号，D8S1179、D21S11、D18S51 等九个 STR 位点基因型与受体原来的信号相一致，证明 SH2 细胞系与患者基因型为同一来源，排除了细胞系之间污染的可能。12、致瘤性 8 只裸鼠皮下接种 SH2 细胞 8 周，5只裸鼠皮下观察到实体瘤生成。肿瘤组织石蜡病理切片，经 HE 染色后镜下观察可见多由白血病细胞组成。取肿瘤组织磨碎后推片，瑞氏染色后镜下所见细胞形态保持原有的粒细胞特征；另外肿瘤细胞的细胞免疫表型表达人白细胞抗原CD45 为 98.56%阳性，其他标志与培养的细胞系完全一致。从实体瘤取出细胞进行核型分析：
12、染色体数目分别为：94=292=591=190=189=288=187=283=182=181=177=3。核型为近四倍体（7794） ，XX，Y，Y，1q2，+1，der（16）t（16；17）2，17，17，+19，+192013、t（16；17） （q24； q12）断裂点的精确定位，通过 BAC系列探针，确定 16 号染色体断裂点位于克隆 RP11356C4（16q24.3）内部或其端粒侧；17 号染色体断裂点位于克隆 RP1161P9 与 RP1147L3 之间（17q12） 。 结论: 我们建立了一个具有 t（16；17） （q24；q12）不平衡易位的急性髓系白血病细胞系。t（1
13、6；17） （q24；q12）是一种新的罕见的髓系白血病相关染色体易位，可能提示预后不良。具有 t（16；17） （q24； q12）不平衡易位的白血病细胞系 SH2 细胞主要表达髓系、NK 系抗原。建系初期核型为：45，X，Y，der（16）t（16；17） ，17，+19；培养 22 个月后全部转为包括 2 个 t（16；17）易位所致衍生 16 号染色体在内的近四倍体核型。衍生 16 号染色体的长臂断裂位点位于 CBFp 所在的位点 16q22 以下，定位于16q24.3 上克隆 RP11356C4（16q24）内部或其端粒侧：17 号染色体断裂位点位于 RAR 基因的上方，定位于 17
14、q12 上克隆 RPl161P9 与 RP1147L3 之间（17q12） 。IL3、IL6、SCF、GMCSF、IL4 和 IL5 可明显促进 SH2细胞的增殖。SH2 细胞在具有集落形成能力和裸鼠内致瘤能力。EB 病毒及支原体与衣原体检测阴性。MDR1 为低表达。SH2 细胞存在 p53 基因 5 号外显子突变，自 p53 基因起动子开始的第 576 号碱基 GT，密码子 CAGCAT，相应编码的氨基酸在 192 位处由谷氨酸组氨酸。我们的研究为白血病的体内外研究提供了又一个具有明晰生物学背景的有用工具，同时为进一步克隆 t（16；17）（q24； q12）易位所产生的融合基因奠定了基础。
15、正文内容目的:报道 1 株伴有 t（16；17） （q24；q12）所致衍生 16 号染色体为特征的髓系白血病细胞系的建立及其生物学特征的初步鉴定。 方法与结果: 1、病例资料 SH2 细胞系来自初诊时 1 例 35 岁男性 AMLM2a 患者骨髓，该患者对多种化疗药物耐药，于接受异基因半相合外周血造血干细胞移植后 1 月余死于白血病复发。 2、细胞系的建立应用淋巴细胞分离液梯度密度离心法常规分离骨髓单个核细胞，以含 20%胎牛血清的 IMDM 培养基调整细胞密度为2*106/ml，接种于 25c培养瓶中，置 37、5%CO2、饱和湿度培养箱中培养，每 34d2/3半量换液 1 次，约一周后瓶
16、底出现贴壁黏附的基质细胞，每次换液保留部分贴壁基质细胞与悬浮的白血病细胞共培养，并调整细胞密度为（0.21）*106/ml。约一个月后培养细胞出现缓慢增殖，在培养基中加入细胞因子 10ug/ml 的 rhIL3，3 个月后增殖速度有所增快，4 个月后培养体系中撤去 rhIL3，每 3d 继续 2/3 换液 1 次。目前已在体外培养 22 月，能耐受冻存和复苏，命名为 SH2。 3、SH2 细胞的形态学特征及组化染色 SH2 细胞在瑞氏染色下呈中等大小，大多为圆形和类圆形，胞核圆形，少数胞核可见轻度凹陷，核染色质呈细致，部分可见核仁，胞浆量中等，染灰蓝色，部分细胞胞浆中可见少量紫红色嗜天青颗粒。
17、POX 染色 58%为阳性。醋酸萘酚酯酶染色 39%为阳性，不被氟化钠抑制。糖原染色 18%阳性。 4、SH2 细胞的超微结构特征 透射电镜下 SH2 细胞呈圆或椭圆形，细胞表面有短小微绒毛，细胞质内可见丰富的细胞器如：线粒体、内质网、糖原颗粒和溶酶体颗粒，核型不规则，部分细胞可见核仁。 5、SH2 细胞的免疫表型 FCM 检测显示 SH2 细胞主要表达髓系、NK 系抗原，也有部分 T 淋系的标志。其中CD13、CD33、CD38、CD117、CD7、CD56、CD25、CD16/56 和 MPO 阳性，而 T 系抗原 CD2、CD3、CD4、CD5 阴性；B 系抗原 CD10、CD19、CD
18、20、CD22 阴性；单核细胞系抗原 CD14 阴性；巨核系 CD41、CD61、CD42b 阴性；另外 CD34、MDR1表达阴性；嗜碱粒细胞标记 CD203 阴性。 6、SH2 细胞的细胞和分子遗传学特征 患者 2005 年 6 月 23 日原代骨髓细胞核型分析结果提示 45，X，Y，der（16）t（16；17） （q24；q12） ，17，+1918。高剂量化疗一疗程后核型为 45，X，Y，der（16）t（16；17） ，17，+1921/78，der（16）t（16；17）1。2006215（培养 5 个多月）细胞系核型分析结果为：45，X，Y，der（16）t（16；17） （q
19、24； q12） ，17，+195/45，X，Y，del（4） （q2？6） 、der（16）t（16；17） （q24；q12） ，17，+192/69105，含 der（16）t（16；17）215。培养 22 个月 SH2 核型分析：染色体数目分别为73，75，75，76，76，77，77，78，79，79，81，81，82，85，88，92，94，100，101，102，核型为：73102（80） ，XX，Y，Y，del（1q31）x2，der（16）t（16；17） （q24； q12）2，17，17，+19，+1920。 应用 16 号和 17 号整条染色体涂抹探针进行染色体涂抹，
20、结果显示：1 条 16 号和 1 条 17 号染色体分别呈现整条红色和整条绿色的荧光信号，提示为正常的16 和 17 号染色体，1 条 16 号染色体呈现大的红色荧光信号和小的绿色荧光信号并存，证实 16 和 17 号染色体之间发生了不平衡易位，形成衍生 16 号染色体同时丢失了一条 17 号染色体。染色体涂抹检测 19 号染色体三体显示：分裂相中有 3 条整条呈绿色荧光信号的染色体，提示为三体 19 号染色体。 FISH检测 PML/RAR 融合基因：所有分析的中期和间期细胞均显示分离的双红双绿荧光信号，未见 PMLRAR 融合信号，表明该例的 t（16；17）易位未涉及RAR 基因。16
21、和 17 号染色体断裂位点定位：（1）FISH 检测 CBF 基因：在同一条 16 号染色体上可见二个黄色荧光信号（CBFp）靠近二个红色荧光信号（16 号着丝粒） ，提示衍生 16 号染色体的长臂断裂位点位于 CBF 所在的位点16q22 以下。 （2）FISH 检测 RAR 基因：采用 16 号着丝粒（红色信号）加RAR 双色（红绿融合信号） ，一条染色体显示红色荧光信号提示为正常 16 号染色体；1 条染色体显示红绿融合信号提示正常的 17 号染色体；另 1 条染色体中间呈红色信号而另一端呈红绿融合信号，提示为 16 和 17 号染色体易位所致的衍生 16 号染色体，并且表明 17 号染
22、色体断裂位点位于 RAR 基因的上方。（3）FISH 检测 16q 断裂点：同时应用 16 号着丝粒探针（红色）和一条 16q 亚端粒探针（绿色）进行双色 FISH 检测，结果显示：一条较小的染色体上同时呈现一个红色信号以及一个小的绿色信号提示为正常的 16 号染色体，另一条衍生16 号染色体中间可见一个红色信号而在长臂中段可见绿色信号，提示 16 号染色体的断裂位点位于 q24。17 号上 p53 探针检测显示 SH2 细胞中期相一条 17号染色体上存在 2 个绿色荧光信号为 p53 信号，而另一条 17 号染色体缺失。PCR 扩增 p53 基因 5、6、7 和 8 号外显子所得产物经序列分
23、析发现有 p53 基因的 5 号外显子存在突变，自 p53 基因起动子开始的第 576 号碱基 GT，密码子CAGCAT，相应编码的氨基酸在 192 位处由谷氨酸组氨酸。 多色 FISH：产用 Vysis Spectra VysionTMMFISH 探针试剂盒，应用 5 种荧光素SpectrumGold、SpectrumFred、SpectrumAqua、SpectrumRed 和 SpectrumGreen按缺口平移法对每一种染色体进行不同的组合标记，制备成探针池，均显示一条 16 号染色体长臂末端有来源于 17 号染色体的片段，三条 19 号染色体，Y 染色体缺失。检测结果证实了染色体核型
24、分析结果。 7、SH2 细胞集落形成能力 9、各种细胞因子对 SH2 细胞的增殖效应 10、SH2 细胞的多药耐药研究 结果:分析采用 Genescan3.1 系统。患者初诊时染色体核型分析显示除 45，X，Y，der（16）t（16；17） （q24； q12） ，17，+19 外还存在少量正常核型的细胞，长期培养的 SH2 细胞系染色体分析仅见包括 Y 染色体缺失在内的异常核型的细胞，因此在 SH2 细胞系 STR 检测分析结果尽见 X 染色体信号，而无 Y 染色体信号，D8S1179、D21S11、D18S51 等九个 STR 位点基因型与受体原来的信号相一致，证明 SH2 细胞系与患者
25、基因型为同一来源，排除了细胞系之间污染的可能。12、致瘤性 8 只裸鼠皮下接种 SH2 细胞 8 周，5只裸鼠皮下观察到实体瘤生成。肿瘤组织石蜡病理切片，经 HE 染色后镜下观察可见多由白血病细胞组成。取肿瘤组织磨碎后推片，瑞氏染色后镜下所见细胞形态保持原有的粒细胞特征；另外肿瘤细胞的细胞免疫表型表达人白细胞抗原CD45 为 98.56%阳性，其他标志与培养的细胞系完全一致。从实体瘤取出细胞进行核型分析：染色体数目分别为：94=292=591=190=189=288=187=283=182=181=177=3。核型为近四倍体（7794） ，XX，Y，Y，1q2，+1，der（16）t（16；1
26、7）2，17，17，+19，+192013、t（16；17） （q24； q12）断裂点的精确定位，通过 BAC系列探针，确定 16 号染色体断裂点位于克隆 RP11356C4（16q24.3）内部或其端粒侧；17 号染色体断裂点位于克隆 RP1161P9 与 RP1147L3 之间（17q12） 。 结论: 我们建立了一个具有 t（16；17） （q24；q12）不平衡易位的急性髓系白血病细胞系。t（16；17） （q24；q12）是一种新的罕见的髓系白血病相关染色体易位，可能提示预后不良。具有 t（16；17） （q24； q12）不平衡易位的白血病细胞系 SH2 细胞主要表达髓系、NK
27、系抗原。建系初期核型为：45，X，Y，der（16）t（16；17） ，17，+19；培养 22 个月后全部转为包括 2 个 t（16；17）易位所致衍生 16 号染色体在内的近四倍体核型。衍生 16 号染色体的长臂断裂位点位于 CBFp 所在的位点 16q22 以下，定位于16q24.3 上克隆 RP11356C4（16q24）内部或其端粒侧：17 号染色体断裂位点位于 RAR 基因的上方，定位于 17q12 上克隆 RPl161P9 与 RP1147L3 之间（17q12） 。IL3、IL6、SCF、GMCSF、IL4 和 IL5 可明显促进 SH2细胞的增殖。SH2 细胞在具有集落形成能
28、力和裸鼠内致瘤能力。EB 病毒及支原体与衣原体检测阴性。MDR1 为低表达。SH2 细胞存在 p53 基因 5 号外显子突变，自 p53 基因起动子开始的第 576 号碱基 GT，密码子 CAGCAT，相应编码的氨基酸在 192 位处由谷氨酸组氨酸。我们的研究为白血病的体内外研究提供了又一个具有明晰生物学背景的有用工具，同时为进一步克隆 t（16；17）（q24； q12）易位所产生的融合基因奠定了基础。目的:报道 1 株伴有 t（16；17） （q24；q12）所致衍生 16 号染色体为特征的髓系白血病细胞系的建立及其生物学特征的初步鉴定。 方法与结果: 1、病例资料 SH2 细胞系来自初诊
29、时 1 例 35 岁男性 AMLM2a 患者骨髓，该患者对多种化疗药物耐药，于接受异基因半相合外周血造血干细胞移植后 1 月余死于白血病复发。 2、细胞系的建立应用淋巴细胞分离液梯度密度离心法常规分离骨髓单个核细胞，以含 20%胎牛血清的 IMDM 培养基调整细胞密度为2*106/ml，接种于 25c培养瓶中，置 37、5%CO2、饱和湿度培养箱中培养，每 34d2/3半量换液 1 次，约一周后瓶底出现贴壁黏附的基质细胞，每次换液保留部分贴壁基质细胞与悬浮的白血病细胞共培养，并调整细胞密度为（0.21）*106/ml。约一个月后培养细胞出现缓慢增殖，在培养基中加入细胞因子 10ug/ml 的
30、rhIL3，3 个月后增殖速度有所增快，4 个月后培养体系中撤去 rhIL3，每 3d 继续 2/3 换液 1 次。目前已在体外培养 22 月，能耐受冻存和复苏，命名为 SH2。 3、SH2 细胞的形态学特征及组化染色 SH2 细胞在瑞氏染色下呈中等大小，大多为圆形和类圆形，胞核圆形，少数胞核可见轻度凹陷，核染色质呈细致，部分可见核仁，胞浆量中等，染灰蓝色，部分细胞胞浆中可见少量紫红色嗜天青颗粒。POX 染色 58%为阳性。醋酸萘酚酯酶染色 39%为阳性，不被氟化钠抑制。糖原染色 18%阳性。 4、SH2 细胞的超微结构特征 透射电镜下 SH2 细胞呈圆或椭圆形，细胞表面有短小微绒毛，细胞质内
31、可见丰富的细胞器如：线粒体、内质网、糖原颗粒和溶酶体颗粒，核型不规则，部分细胞可见核仁。 5、SH2 细胞的免疫表型 FCM 检测显示 SH2 细胞主要表达髓系、NK 系抗原，也有部分 T 淋系的标志。其中CD13、CD33、CD38、CD117、CD7、CD56、CD25、CD16/56 和 MPO 阳性，而 T 系抗原 CD2、CD3、CD4、CD5 阴性；B 系抗原 CD10、CD19、CD20、CD22 阴性；单核细胞系抗原 CD14 阴性；巨核系 CD41、CD61、CD42b 阴性；另外 CD34、MDR1表达阴性；嗜碱粒细胞标记 CD203 阴性。 6、SH2 细胞的细胞和分子遗
32、传学特征 患者 2005 年 6 月 23 日原代骨髓细胞核型分析结果提示 45，X，Y，der（16）t（16；17） （q24；q12） ，17，+1918。高剂量化疗一疗程后核型为 45，X，Y，der（16）t（16；17） ，17，+1921/78，der（16）t（16；17）1。2006215（培养 5 个多月）细胞系核型分析结果为：45，X，Y，der（16）t（16；17） （q24； q12） ，17，+195/45，X，Y，del（4） （q2？6） 、der（16）t（16；17） （q24；q12） ，17，+192/69105，含 der（16）t（16；17）21
33、5。培养 22 个月 SH2 核型分析：染色体数目分别为73，75，75，76，76，77，77，78，79，79，81，81，82，85，88，92，94，100，101，102，核型为：73102（80） ，XX，Y，Y，del（1q31）x2，der（16）t（16；17） （q24； q12）2，17，17，+19，+1920。 应用 16 号和 17 号整条染色体涂抹探针进行染色体涂抹，结果显示：1 条 16 号和 1 条 17 号染色体分别呈现整条红色和整条绿色的荧光信号，提示为正常的16 和 17 号染色体，1 条 16 号染色体呈现大的红色荧光信号和小的绿色荧光信号并存，证实
34、16 和 17 号染色体之间发生了不平衡易位，形成衍生 16 号染色体同时丢失了一条 17 号染色体。染色体涂抹检测 19 号染色体三体显示：分裂相中有 3 条整条呈绿色荧光信号的染色体，提示为三体 19 号染色体。 FISH检测 PML/RAR 融合基因：所有分析的中期和间期细胞均显示分离的双红双绿荧光信号，未见 PMLRAR 融合信号，表明该例的 t（16；17）易位未涉及RAR 基因。16 和 17 号染色体断裂位点定位：（1）FISH 检测 CBF 基因：在同一条 16 号染色体上可见二个黄色荧光信号（CBFp）靠近二个红色荧光信号（16 号着丝粒） ，提示衍生 16 号染色体的长臂断
35、裂位点位于 CBF 所在的位点16q22 以下。 （2）FISH 检测 RAR 基因：采用 16 号着丝粒（红色信号）加RAR 双色（红绿融合信号） ，一条染色体显示红色荧光信号提示为正常 16 号染色体；1 条染色体显示红绿融合信号提示正常的 17 号染色体；另 1 条染色体中间呈红色信号而另一端呈红绿融合信号，提示为 16 和 17 号染色体易位所致的衍生 16 号染色体，并且表明 17 号染色体断裂位点位于 RAR 基因的上方。（3）FISH 检测 16q 断裂点：同时应用 16 号着丝粒探针（红色）和一条 16q 亚端粒探针（绿色）进行双色 FISH 检测，结果显示：一条较小的染色体上
36、同时呈现一个红色信号以及一个小的绿色信号提示为正常的 16 号染色体，另一条衍生16 号染色体中间可见一个红色信号而在长臂中段可见绿色信号，提示 16 号染色体的断裂位点位于 q24。17 号上 p53 探针检测显示 SH2 细胞中期相一条 17号染色体上存在 2 个绿色荧光信号为 p53 信号，而另一条 17 号染色体缺失。PCR 扩增 p53 基因 5、6、7 和 8 号外显子所得产物经序列分析发现有 p53 基因的 5 号外显子存在突变，自 p53 基因起动子开始的第 576 号碱基 GT，密码子CAGCAT，相应编码的氨基酸在 192 位处由谷氨酸组氨酸。 多色 FISH：产用 Vys
37、is Spectra VysionTMMFISH 探针试剂盒，应用 5 种荧光素SpectrumGold、SpectrumFred、SpectrumAqua、SpectrumRe特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。我们还可提供代笔服务，价格优惠，服务周到，包您通过。“垐垯櫃 换烫梯葺铑?endstreamendobj2x 滌甸?*U 躆 跦?l, 墀 VGi?o 嫅#4K 錶 c#x 刔 彟 2Z 皙笜?D 剧珞 H 鏋
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