1、水产养殖专业毕业论文 精品论文 仿刺参(Apostichopus japonicus，Selenka)体腔液中调理素样分子的研究关键词：仿刺参 棘皮动物 体腔液 调理素样分子 凝集素 吞噬细胞摘要：仿刺参是我国辽宁、山东、河北等北方沿海省份重要的养殖经济种类。仿刺参体腔液中的吞噬细胞在吞噬过程中起重要作用，而吞噬作用在无脊椎动物免疫防御中居于核心地位。调理素是一些血浆蛋白质，它们可以结合到病原体表面，使其成为靶细胞，为吞噬作用提供标记，从而增强吞噬细胞对病原体的吞噬作用。目前已在少数无脊椎动物中发现了调理素样分子。为了探究仿刺参体腔液中是否存在调理素样分子，且分析其调理素样分子的的性质，采用热
2、致死酵母细胞作为吞噬实验靶细胞。通过 SDS-PAGE，凝胶过滤层析，质谱分析，氨基酸序列分析等方法进行蛋白质的纯化和分析；吞噬细胞对酵母细胞的吞噬作用研究采用荧光显微镜观察。结果表明，仿刺参的吞噬细胞在等渗缓冲液、无细胞体腔液和酵母细胞作用的无细胞体腔液中均具有吞噬能力。在不同的反应基质条件下，吞噬细胞对酵母细胞的吞噬率有所不同。当反应基质为无细胞体腔液时，吞噬细胞对酵母细胞的吞噬率最高。SDS-PAGE 分析结果表明，一种分子量约为 18 kDa的分子可以结合到热致死酵母细胞上，增强吞噬作用。通过凝胶过滤层析纯化出这种调理素样分子。调理素样分子功能检测实验表明，这种约 18 kDa的调理素
3、样分子可增强吞噬细胞的吞噬作用，但其并不能单独提高吞噬作用，还需要和体腔液中某种物质共同作用才可使吞噬作用得以增强。调理素样分子 N端前 15个氨基酸序列及质谱分析结果表明，此调理素样分子是无脊椎动物调理素样分子中的新成员。 Western blots 与 ELISA分析结果均表明，脂多糖(LPS)免疫刺激和受伤均可使体腔内调理素样分子水平增加。注射LPS的仿刺参体腔液中调理素样分子含量在注射后 1h显著增加(P0.05)。注射后 1h到 2d内显著高于注射前 15 min水平(P0.05)。最大量出现在注射后3d到 6d，且显著高于注射后 1h到 2d水平(P0.05)。6d 后，调理素样分
4、子水平开始下降，并恢复到在注射后 1h到 2d水平(P0.05)。注无菌海水(SSW)的海参体内调理素样分子水平较低。注射前 15min到注射后 12 h体腔液中调理素样分子含量均无显著变化(P0.05)。注射后第 2 d到 8 d，调理素样分子含量升高并显著高于注射前 15 min到注射后 12 h水平(P0.05)。这是因为采取注射的方式，仿刺参会受伤，而受伤所产生的应激也可刺激机体产生免疫应答。 注射 LPS的仿刺参体腔液中调理素样分子水平除注射前 15 min，注射后第 2 d和 8 d无显著差异外(P0.05)，其它时间均显著高于注射 SSW组(P0.05)。这表明了 LPS免疫刺激
5、及受伤刺激均可使仿刺参体内调理素样分子含量增加。而受伤和 LPS共同刺激可使机体分泌更多的调理素样分子。 该调理素样分子具凝集素性质，推测它是一种凝集素。该调理素样分子可以凝集兔、鸡、鼠、鲫和人的 A、B、O、AB 型红细胞。其凝集结果为：鸡兔人(A=B=O=AB)鼠鲫。凝菌结果表明，纯化的调理素样分子可凝集革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌。细菌中以鳗弧菌对调理素样分子最敏感。在 25-60保温 30 min，凝集活性均未见改变。在 7030 min 热处理后仍然对鸡红细胞显示出凝集活性，活性开始下降。在 80热处理 30 min后失去凝集活力。当 5.0pH9.0 时，仿刺参调理素样分子具有活
6、性，当 pH为 6.0-8.0时，活性最高，当 pH为 5.0或 9.0时，活性下降，当 pH10.0 或4.0 时，失去凝集活力。调理素样分子不被所测试的 D-葡萄糖(D-Glueose)、D-半乳糖(D-Galaetose)、L-Arabinose(L-岩藻糖)、D-木糖(D-Xylose)、D-甘露糖(D-Mannose)、L-鼠李糖(L-Rhamnose)、D-果糖(D-Frutose)和 LPS所抑制。可被 N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、N-乙酰神经氨酸(NeuAc)、牛下颚粘液素(Bovine submaxillary mucin，BSM)、胎
7、球蛋白(Fetuin)、脱唾液酸牛下颚粘液素(Asialo-BSM)、脱唾液酸胎球蛋白(Asialo-Fetuin)所抑制。N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)和 N-乙酰神经氨酸(NeuAc)的最小抑制浓度分别为 20.15 mmol/L、12.50 mmol/L 和 0.25mmol/L。牛下颚粘液素(Bovine submaxillary mucin，BSM)、胎球蛋白(Fetuin)、脱唾液酸牛下颚粘液素(Asialo-BSM)、脱唾液酸胎球蛋白(Asialo-Fetuin)的最小抑制浓度分别为0.39 mg/mL、1.56 mg/mL、3.12 mg/m
8、L 和6.26mg/mL。EDTA，Mn2+、Ca2+、Mg2+、K+等金属离子作用的调理素样分子对鸡红细胞的凝集活性保持不变，即它们的存在不影响该调理素样分子的凝集活性。正文内容仿刺参是我国辽宁、山东、河北等北方沿海省份重要的养殖经济种类。仿刺参体腔液中的吞噬细胞在吞噬过程中起重要作用，而吞噬作用在无脊椎动物免疫防御中居于核心地位。调理素是一些血浆蛋白质，它们可以结合到病原体表面，使其成为靶细胞，为吞噬作用提供标记，从而增强吞噬细胞对病原体的吞噬作用。目前已在少数无脊椎动物中发现了调理素样分子。为了探究仿刺参体腔液中是否存在调理素样分子，且分析其调理素样分子的的性质，采用热致死酵母细胞作为吞
9、噬实验靶细胞。通过 SDS-PAGE，凝胶过滤层析，质谱分析，氨基酸序列分析等方法进行蛋白质的纯化和分析；吞噬细胞对酵母细胞的吞噬作用研究采用荧光显微镜观察。结果表明，仿刺参的吞噬细胞在等渗缓冲液、无细胞体腔液和酵母细胞作用的无细胞体腔液中均具有吞噬能力。在不同的反应基质条件下，吞噬细胞对酵母细胞的吞噬率有所不同。当反应基质为无细胞体腔液时，吞噬细胞对酵母细胞的吞噬率最高。SDS-PAGE 分析结果表明，一种分子量约为 18 kDa的分子可以结合到热致死酵母细胞上，增强吞噬作用。通过凝胶过滤层析纯化出这种调理素样分子。调理素样分子功能检测实验表明，这种约 18 kDa的调理素样分子可增强吞噬细
10、胞的吞噬作用，但其并不能单独提高吞噬作用，还需要和体腔液中某种物质共同作用才可使吞噬作用得以增强。调理素样分子 N端前 15个氨基酸序列及质谱分析结果表明，此调理素样分子是无脊椎动物调理素样分子中的新成员。 Western blots 与 ELISA分析结果均表明，脂多糖(LPS)免疫刺激和受伤均可使体腔内调理素样分子水平增加。注射LPS的仿刺参体腔液中调理素样分子含量在注射后 1h显著增加(P0.05)。注射后 1h到 2d内显著高于注射前 15 min水平(P0.05)。最大量出现在注射后3d到 6d，且显著高于注射后 1h到 2d水平(P0.05)。6d 后，调理素样分子水平开始下降，并
11、恢复到在注射后 1h到 2d水平(P0.05)。注无菌海水(SSW)的海参体内调理素样分子水平较低。注射前 15min到注射后 12 h体腔液中调理素样分子含量均无显著变化(P0.05)。注射后第 2 d到 8 d，调理素样分子含量升高并显著高于注射前 15 min到注射后 12 h水平(P0.05)。这是因为采取注射的方式，仿刺参会受伤，而受伤所产生的应激也可刺激机体产生免疫应答。 注射 LPS的仿刺参体腔液中调理素样分子水平除注射前 15 min，注射后第 2 d和 8 d无显著差异外(P0.05)，其它时间均显著高于注射 SSW组(P0.05)。这表明了 LPS免疫刺激及受伤刺激均可使仿
12、刺参体内调理素样分子含量增加。而受伤和 LPS共同刺激可使机体分泌更多的调理素样分子。 该调理素样分子具凝集素性质，推测它是一种凝集素。该调理素样分子可以凝集兔、鸡、鼠、鲫和人的 A、B、O、AB 型红细胞。其凝集结果为：鸡兔人(A=B=O=AB)鼠鲫。凝菌结果表明，纯化的调理素样分子可凝集革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌。细菌中以鳗弧菌对调理素样分子最敏感。在 25-60保温 30 min，凝集活性均未见改变。在 7030 min 热处理后仍然对鸡红细胞显示出凝集活性，活性开始下降。在 80热处理 30 min后失去凝集活力。当 5.0pH9.0 时，仿刺参调理素样分子具有活性，当 pH为 6
13、.0-8.0时，活性最高，当 pH为 5.0或 9.0时，活性下降，当 pH10.0 或4.0 时，失去凝集活力。调理素样分子不被所测试的 D-葡萄糖(D-Glueose)、D-半乳糖(D-Galaetose)、L-Arabinose(L-岩藻糖)、D-木糖(D-Xylose)、D-甘露糖(D-Mannose)、L-鼠李糖(L-Rhamnose)、D-果糖(D-Frutose)和 LPS所抑制。可被 N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、N-乙酰神经氨酸(NeuAc)、牛下颚粘液素(Bovine submaxillary mucin，BSM)、胎球蛋白(Fetui
14、n)、脱唾液酸牛下颚粘液素(Asialo-BSM)、脱唾液酸胎球蛋白(Asialo-Fetuin)所抑制。N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)和 N-乙酰神经氨酸(NeuAc)的最小抑制浓度分别为 20.15 mmol/L、12.50 mmol/L 和 0.25mmol/L。牛下颚粘液素(Bovine submaxillary mucin，BSM)、胎球蛋白(Fetuin)、脱唾液酸牛下颚粘液素(Asialo-BSM)、脱唾液酸胎球蛋白(Asialo-Fetuin)的最小抑制浓度分别为0.39 mg/mL、1.56 mg/mL、3.12 mg/mL 和6.26mg
15、/mL。EDTA，Mn2+、Ca2+、Mg2+、K+等金属离子作用的调理素样分子对鸡红细胞的凝集活性保持不变，即它们的存在不影响该调理素样分子的凝集活性。仿刺参是我国辽宁、山东、河北等北方沿海省份重要的养殖经济种类。仿刺参体腔液中的吞噬细胞在吞噬过程中起重要作用，而吞噬作用在无脊椎动物免疫防御中居于核心地位。调理素是一些血浆蛋白质，它们可以结合到病原体表面，使其成为靶细胞，为吞噬作用提供标记，从而增强吞噬细胞对病原体的吞噬作用。目前已在少数无脊椎动物中发现了调理素样分子。为了探究仿刺参体腔液中是否存在调理素样分子，且分析其调理素样分子的的性质，采用热致死酵母细胞作为吞噬实验靶细胞。通过 SDS
16、-PAGE，凝胶过滤层析，质谱分析，氨基酸序列分析等方法进行蛋白质的纯化和分析；吞噬细胞对酵母细胞的吞噬作用研究采用荧光显微镜观察。结果表明，仿刺参的吞噬细胞在等渗缓冲液、无细胞体腔液和酵母细胞作用的无细胞体腔液中均具有吞噬能力。在不同的反应基质条件下，吞噬细胞对酵母细胞的吞噬率有所不同。当反应基质为无细胞体腔液时，吞噬细胞对酵母细胞的吞噬率最高。SDS-PAGE 分析结果表明，一种分子量约为 18 kDa的分子可以结合到热致死酵母细胞上，增强吞噬作用。通过凝胶过滤层析纯化出这种调理素样分子。调理素样分子功能检测实验表明，这种约 18 kDa的调理素样分子可增强吞噬细胞的吞噬作用，但其并不能单
17、独提高吞噬作用，还需要和体腔液中某种物质共同作用才可使吞噬作用得以增强。调理素样分子 N端前 15个氨基酸序列及质谱分析结果表明，此调理素样分子是无脊椎动物调理素样分子中的新成员。 Western blots 与 ELISA分析结果均表明，脂多糖(LPS)免疫刺激和受伤均可使体腔内调理素样分子水平增加。注射 LPS的仿刺参体腔液中调理素样分子含量在注射后 1h显著增加(P0.05)。注射后 1h到 2d内显著高于注射前 15 min水平(P0.05)。最大量出现在注射后 3d到6d，且显著高于注射后 1h到 2d水平(P0.05)。6d 后，调理素样分子水平开始下降，并恢复到在注射后 1h到
18、2d水平(P0.05)。注无菌海水(SSW)的海参体内调理素样分子水平较低。注射前 15min到注射后 12 h体腔液中调理素样分子含量均无显著变化(P0.05)。注射后第 2 d到 8 d，调理素样分子含量升高并显著高于注射前 15 min到注射后 12 h水平(P0.05)。这是因为采取注射的方式，仿刺参会受伤，而受伤所产生的应激也可刺激机体产生免疫应答。 注射 LPS的仿刺参体腔液中调理素样分子水平除注射前 15 min，注射后第 2 d和8 d无显著差异外(P0.05)，其它时间均显著高于注射 SSW组(P0.05)。这表明了 LPS免疫刺激及受伤刺激均可使仿刺参体内调理素样分子含量增
19、加。而受伤和 LPS共同刺激可使机体分泌更多的调理素样分子。 该调理素样分子具凝集素性质，推测它是一种凝集素。该调理素样分子可以凝集兔、鸡、鼠、鲫和人的 A、B、O、AB 型红细胞。其凝集结果为：鸡兔人(A=B=O=AB)鼠鲫。凝菌结果表明，纯化的调理素样分子可凝集革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌。细菌中以鳗弧菌对调理素样分子最敏感。在 25-60保温 30 min，凝集活性均未见改变。在 7030 min 热处理后仍然对鸡红细胞显示出凝集活性，活性开始下降。在 80热处理 30 min后失去凝集活力。当 5.0pH9.0 时，仿刺参调理素样分子具有活性，当 pH为 6.0-8.0时，活性最高，
20、当 pH为 5.0或9.0时，活性下降，当 pH10.0 或4.0 时，失去凝集活力。调理素样分子不被所测试的 D-葡萄糖(D-Glueose)、D-半乳糖(D-Galaetose)、L-Arabinose(L-岩藻糖)、D-木糖(D-Xylose)、D-甘露糖(D-Mannose)、L-鼠李糖(L-Rhamnose)、D-果糖(D-Frutose)和 LPS所抑制。可被 N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、N-乙酰神经氨酸(NeuAc)、牛下颚粘液素(Bovine submaxillary mucin，BSM)、胎球蛋白(Fetuin)、脱唾液酸牛下颚粘液素(
21、Asialo-BSM)、脱唾液酸胎球蛋白(Asialo-Fetuin)所抑制。N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)和 N-乙酰神经氨酸(NeuAc)的最小抑制浓度分别为 20.15 mmol/L、12.50 mmol/L 和 0.25mmol/L。牛下颚粘液素(Bovine submaxillary mucin，BSM)、胎球蛋白(Fetuin)、脱唾液酸牛下颚粘液素(Asialo-BSM)、脱唾液酸胎球蛋白(Asialo-Fetuin)的最小抑制浓度分别为0.39 mg/mL、1.56 mg/mL、3.12 mg/mL 和6.26mg/mL。EDTA，Mn2+、
22、Ca2+、Mg2+、K+等金属离子作用的调理素样分子对鸡红细胞的凝集活性保持不变，即它们的存在不影响该调理素样分子的凝集活性。仿刺参是我国辽宁、山东、河北等北方沿海省份重要的养殖经济种类。仿刺参体腔液中的吞噬细胞在吞噬过程中起重要作用，而吞噬作用在无脊椎动物免疫防御中居于核心地位。调理素是一些血浆蛋白质，它们可以结合到病原体表面，使其成为靶细胞，为吞噬作用提供标记，从而增强吞噬细胞对病原体的吞噬作用。目前已在少数无脊椎动物中发现了调理素样分子。为了探究仿刺参体腔液中是否存在调理素样分子，且分析其调理素样分子的的性质，采用热致死酵母细胞作为吞噬实验靶细胞。通过 SDS-PAGE，凝胶过滤层析，质
23、谱分析，氨基酸序列分析等方法进行蛋白质的纯化和分析；吞噬细胞对酵母细胞的吞噬作用研究采用荧光显微镜观察。结果表明，仿刺参的吞噬细胞在等渗缓冲液、无细胞体腔液和酵母细胞作用的无细胞体腔液中均具有吞噬能力。在不同的反应基质条件下，吞噬细胞对酵母细胞的吞噬率有所不同。当反应基质为无细胞体腔液时，吞噬细胞对酵母细胞的吞噬率最高。SDS-PAGE 分析结果表明，一种分子量约为 18 kDa的分子可以结合到热致死酵母细胞上，增强吞噬作用。通过凝胶过滤层析纯化出这种调理素样分子。调理素样分子功能检测实验表明，这种约 18 kDa的调理素样分子可增强吞噬细胞的吞噬作用，但其并不能单独提高吞噬作用，还需要和体腔
24、液中某种物质共同作用才可使吞噬作用得以增强。调理素样分子 N端前 15个氨基酸序列及质谱分析结果表明，此调理素样分子是无脊椎动物调理素样分子中的新成员。 Western blots 与 ELISA分析结果均表明，脂多糖(LPS)免疫刺激和受伤均可使体腔内调理素样分子水平增加。注射 LPS的仿刺参体腔液中调理素样分子含量在注射后 1h显著增加(P0.05)。注射后 1h到 2d内显著高于注射前 15 min水平(P0.05)。最大量出现在注射后 3d到6d，且显著高于注射后 1h到 2d水平(P0.05)。6d 后，调理素样分子水平开始下降，并恢复到在注射后 1h到 2d水平(P0.05)。注无
25、菌海水(SSW)的海参体内调理素样分子水平较低。注射前 15min到注射后 12 h体腔液中调理素样分子含量均无显著变化(P0.05)。注射后第 2 d到 8 d，调理素样分子含量升高并显著高于注射前 15 min到注射后 12 h水平(P0.05)。这是因为采取注射的方式，仿刺参会受伤，而受伤所产生的应激也可刺激机体产生免疫应答。 注射 LPS的仿刺参体腔液中调理素样分子水平除注射前 15 min，注射后第 2 d和8 d无显著差异外(P0.05)，其它时间均显著高于注射 SSW组(P0.05)。这表明了 LPS免疫刺激及受伤刺激均可使仿刺参体内调理素样分子含量增加。而受伤和 LPS共同刺激
26、可使机体分泌更多的调理素样分子。 该调理素样分子具凝集素性质，推测它是一种凝集素。该调理素样分子可以凝集兔、鸡、鼠、鲫和人的 A、B、O、AB 型红细胞。其凝集结果为：鸡兔人(A=B=O=AB)鼠鲫。凝菌结果表明，纯化的调理素样分子可凝集革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌。细菌中以鳗弧菌对调理素样分子最敏感。在 25-60保温 30 min，凝集活性均未见改变。在 7030 min 热处理后仍然对鸡红细胞显示出凝集活性，活性开始下降。在 80热处理 30 min后失去凝集活力。当 5.0pH9.0 时，仿刺参调理素样分子具有活性，当 pH为 6.0-8.0时，活性最高，当 pH为 5.0或9.0时
27、，活性下降，当 pH10.0 或4.0 时，失去凝集活力。调理素样分子不被所测试的 D-葡萄糖(D-Glueose)、D-半乳糖(D-Galaetose)、L-Arabinose(L-岩藻糖)、D-木糖(D-Xylose)、D-甘露糖(D-Mannose)、L-鼠李糖(L-Rhamnose)、D-果糖(D-Frutose)和 LPS所抑制。可被 N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、N-乙酰神经氨酸(NeuAc)、牛下颚粘液素(Bovine submaxillary mucin，BSM)、胎球蛋白(Fetuin)、脱唾液酸牛下颚粘液素(Asialo-BSM)、脱唾
28、液酸胎球蛋白(Asialo-Fetuin)所抑制。N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)和 N-乙酰神经氨酸(NeuAc)的最小抑制浓度分别为 20.15 mmol/L、12.50 mmol/L 和 0.25mmol/L。牛下颚粘液素(Bovine submaxillary mucin，BSM)、胎球蛋白(Fetuin)、脱唾液酸牛下颚粘液素(Asialo-BSM)、脱唾液酸胎球蛋白(Asialo-Fetuin)的最小抑制浓度分别为0.39 mg/mL、1.56 mg/mL、3.12 mg/mL 和6.26mg/mL。EDTA，Mn2+、Ca2+、Mg2+、K+等金
29、属离子作用的调理素样分子对鸡红细胞的凝集活性保持不变，即它们的存在不影响该调理素样分子的凝集活性。仿刺参是我国辽宁、山东、河北等北方沿海省份重要的养殖经济种类。仿刺参体腔液中的吞噬细胞在吞噬过程中起重要作用，而吞噬作用在无脊椎动物免疫防御中居于核心地位。调理素是一些血浆蛋白质，它们可以结合到病原体表面，使其成为靶细胞，为吞噬作用提供标记，从而增强吞噬细胞对病原体的吞噬作用。目前已在少数无脊椎动物中发现了调理素样分子。为了探究仿刺参体腔液中是否存在调理素样分子，且分析其调理素样分子的的性质，采用热致死酵母细胞作为吞噬实验靶细胞。通过 SDS-PAGE，凝胶过滤层析，质谱分析，氨基酸序列分析等方法
30、进行蛋白质的纯化和分析；吞噬细胞对酵母细胞的吞噬作用研究采用荧光显微镜观察。结果表明，仿刺参的吞噬细胞在等渗缓冲液、无细胞体腔液和酵母细胞作用的无细胞体腔液中均具有吞噬能力。在不同的反应基质条件下，吞噬细胞对酵母细胞的吞噬率有所不同。当反应基质为无细胞体腔液时，吞噬细胞对酵母细胞的吞噬率最高。SDS-PAGE 分析结果表明，一种分子量约为 18 kDa的分子可以结合到热致死酵母细胞上，增强吞噬作用。通过凝胶过滤层析纯化出这种调理素样分子。调理素样分子功能检测实验表明，这种约 18 kDa的调理素样分子可增强吞噬细胞的吞噬作用，但其并不能单独提高吞噬作用，还需要和体腔液中某种物质共同作用才可使吞
31、噬作用得以增强。调理素样分子 N端前 15个氨基酸序列及质谱分析结果表明，此调理素样分子是无脊椎动物调理素样分子中的新成员。 Western blots 与 ELISA分析结果均表明，脂多糖(LPS)免疫刺激和受伤均可使体腔内调理素样分子水平增加。注射 LPS的仿刺参体腔液中调理素样分子含量在注射后 1h显著增加(P0.05)。注射后 1h到 2d内显著高于注射前 15 min水平(P0.05)。最大量出现在注射后 3d到6d，且显著高于注射后 1h到 2d水平(P0.05)。6d 后，调理素样分子水平开始下降，并恢复到在注射后 1h到 2d水平(P0.05)。注无菌海水(SSW)的海参体内调
32、理素样分子水平较低。注射前 15min到注射后 12 h体腔液中调理素样分子含量均无显著变化(P0.05)。注射后第 2 d到 8 d，调理素样分子含量升高并显著高于注射前 15 min到注射后 12 h水平(P0.05)。这是因为采取注射的方式，仿刺参会受伤，而受伤所产生的应激也可刺激机体产生免疫应答。 注射 LPS的仿刺参体腔液中调理素样分子水平除注射前 15 min，注射后第 2 d和8 d无显著差异外(P0.05)，其它时间均显著高于注射 SSW组(P0.05)。这表明了 LPS免疫刺激及受伤刺激均可使仿刺参体内调理素样分子含量增加。而受伤和 LPS共同刺激可使机体分泌更多的调理素样分
33、子。 该调理素样分子具凝集素性质，推测它是一种凝集素。该调理素样分子可以凝集兔、鸡、鼠、鲫和人的 A、B、O、AB 型红细胞。其凝集结果为：鸡兔人(A=B=O=AB)鼠鲫。凝菌结果表明，纯化的调理素样分子可凝集革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌。细菌中以鳗弧菌对调理素样分子最敏感。在 25-60保温 30 min，凝集活性均未见改变。在 7030 min 热处理后仍然对鸡红细胞显示出凝集活性，活性开始下降。在 80热处理 30 min后失去凝集活力。当 5.0pH9.0 时，仿刺参调理素样分子具有活性，当 pH为 6.0-8.0时，活性最高，当 pH为 5.0或9.0时，活性下降，当 pH10.0
34、 或4.0 时，失去凝集活力。调理素样分子不被所测试的 D-葡萄糖(D-Glueose)、D-半乳糖(D-Galaetose)、L-Arabinose(L-岩藻糖)、D-木糖(D-Xylose)、D-甘露糖(D-Mannose)、L-鼠李糖(L-Rhamnose)、D-果糖(D-Frutose)和 LPS所抑制。可被 N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、N-乙酰神经氨酸(NeuAc)、牛下颚粘液素(Bovine submaxillary mucin，BSM)、胎球蛋白(Fetuin)、脱唾液酸牛下颚粘液素(Asialo-BSM)、脱唾液酸胎球蛋白(Asialo-
35、Fetuin)所抑制。N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)和 N-乙酰神经氨酸(NeuAc)的最小抑制浓度分别为 20.15 mmol/L、12.50 mmol/L 和 0.25mmol/L。牛下颚粘液素(Bovine submaxillary mucin，BSM)、胎球蛋白(Fetuin)、脱唾液酸牛下颚粘液素(Asialo-BSM)、脱唾液酸胎球蛋白(Asialo-Fetuin)的最小抑制浓度分别为0.39 mg/mL、1.56 mg/mL、3.12 mg/mL 和6.26mg/mL。EDTA，Mn2+、Ca2+、Mg2+、K+等金属离子作用的调理素样分子对鸡
36、红细胞的凝集活性保持不变，即它们的存在不影响该调理素样分子的凝集活性。仿刺参是我国辽宁、山东、河北等北方沿海省份重要的养殖经济种类。仿刺参体腔液中的吞噬细胞在吞噬过程中起重要作用，而吞噬作用在无脊椎动物免疫防御中居于核心地位。调理素是一些血浆蛋白质，它们可以结合到病原体表面，使其成为靶细胞，为吞噬作用提供标记，从而增强吞噬细胞对病原体的吞噬作用。目前已在少数无脊椎动物中发现了调理素样分子。为了探究仿刺参体腔液中是否存在调理素样分子，且分析其调理素样分子的的性质，采用热致死酵母细胞作为吞噬实验靶细胞。通过 SDS-PAGE，凝胶过滤层析，质谱分析，氨基酸序列分析等方法进行蛋白质的纯化和分析；吞噬
37、细胞对酵母细胞的吞噬作用研究采用荧光显微镜观察。结果表明，仿刺参的吞噬细胞在等渗缓冲液、无细胞体腔液和酵母细胞作用的无细胞体腔液中均具有吞噬能力。在不同的反应基质条件下，吞噬细胞对酵母细胞的吞噬率有所不同。当反应基质为无细胞体腔液时，吞噬细胞对酵母细胞的吞噬率最高。SDS-PAGE 分析结果表明，一种分子量约为 18 kDa的分子可以结合到热致死酵母细胞上，增强吞噬作用。通过凝胶过滤层析纯化出这种调理素样分子。调理素样分子功能检测实验表明，这种约 18 kDa的调理素样分子可增强吞噬细胞的吞噬作用，但其并不能单独提高吞噬作用，还需要和体腔液中某种物质共同作用才可使吞噬作用得以增强。调理素样分子
38、 N端前 15个氨基酸序列及质谱分析结果表明，此调理素样分子是无脊椎动物调理素样分子中的新成员。 Western blots 与 ELISA分析结果均表明，脂多糖(LPS)免疫刺激和受伤均可使体腔内调理素样分子水平增加。注射 LPS的仿刺参体腔液中调理素样分子含量在注射后 1h显著增加(P0.05)。注射后 1h到 2d内显著高于注射前 15 min水平(P0.05)。最大量出现在注射后 3d到6d，且显著高于注射后 1h到 2d水平(P0.05)。6d 后，调理素样分子水平开始下降，并恢复到在注射后 1h到 2d水平(P0.05)。注无菌海水(SSW)的海参体内调理素样分子水平较低。注射前
39、15min到注射后 12 h体腔液中调理素样分子含量均无显著变化(P0.05)。注射后第 2 d到 8 d，调理素样分子含量升高并显著高于注射前 15 min到注射后 12 h水平(P0.05)。这是因为采取注射的方式，仿刺参会受伤，而受伤所产生的应激也可刺激机体产生免疫应答。 注射 LPS的仿刺参体腔液中调理素样分子水平除注射前 15 min，注射后第 2 d和8 d无显著差异外(P0.05)，其它时间均显著高于注射 SSW组(P0.05)。这表明了 LPS免疫刺激及受伤刺激均可使仿刺参体内调理素样分子含量增加。而受伤和 LPS共同刺激可使机体分泌更多的调理素样分子。 该调理素样分子具凝集素
40、性质，推测它是一种凝集素。该调理素样分子可以凝集兔、鸡、鼠、鲫和人的 A、B、O、AB 型红细胞。其凝集结果为：鸡兔人(A=B=O=AB)鼠鲫。凝菌结果表明，纯化的调理素样分子可凝集革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌。细菌中以鳗弧菌对调理素样分子最敏感。在 25-60保温 30 min，凝集活性均未见改变。在 7030 min 热处理后仍然对鸡红细胞显示出凝集活性，活性开始下降。在 80热处理 30 min后失去凝集活力。当 5.0pH9.0 时，仿刺参调理素样分子具有活性，当 pH为 6.0-8.0时，活性最高，当 pH为 5.0或9.0时，活性下降，当 pH10.0 或4.0 时，失去凝集活力
41、。调理素样分子不被所测试的 D-葡萄糖(D-Glueose)、D-半乳糖(D-Galaetose)、L-Arabinose(L-岩藻糖)、D-木糖(D-Xylose)、D-甘露糖(D-Mannose)、L-鼠李糖(L-Rhamnose)、D-果糖(D-Frutose)和 LPS所抑制。可被 N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、N-乙酰神经氨酸(NeuAc)、牛下颚粘液素(Bovine submaxillary mucin，BSM)、胎球蛋白(Fetuin)、脱唾液酸牛下颚粘液素(Asialo-BSM)、脱唾液酸胎球蛋白(Asialo-Fetuin)所抑制。N-乙
42、酰葡萄糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)和 N-乙酰神经氨酸(NeuAc)的最小抑制浓度分别为 20.15 mmol/L、12.50 mmol/L 和 0.25mmol/L。牛下颚粘液素(Bovine submaxillary mucin，BSM)、胎球蛋白(Fetuin)、脱唾液酸牛下颚粘液素(Asialo-BSM)、脱唾液酸胎球蛋白(Asialo-Fetuin)的最小抑制浓度分别为0.39 mg/mL、1.56 mg/mL、3.12 mg/mL 和6.26mg/mL。EDTA，Mn2+、Ca2+、Mg2+、K+等金属离子作用的调理素样分子对鸡红细胞的凝集活性保持不变，即
43、它们的存在不影响该调理素样分子的凝集活性。仿刺参是我国辽宁、山东、河北等北方沿海省份重要的养殖经济种类。仿刺参体腔液中的吞噬细胞在吞噬过程中起重要作用，而吞噬作用在无脊椎动物免疫防御中居于核心地位。调理素是一些血浆蛋白质，它们可以结合到病原体表面，使其成为靶细胞，为吞噬作用提供标记，从而增强吞噬细胞对病原体的吞噬作用。目前已在少数无脊椎动物中发现了调理素样分子。为了探究仿刺参体腔液中是否存在调理素样分子，且分析其调理素样分子的的性质，采用热致死酵母细胞作为吞噬实验靶细胞。通过 SDS-PAGE，凝胶过滤层析，质谱分析，氨基酸序列分析等方法进行蛋白质的纯化和分析；吞噬细胞对酵母细胞的吞噬作用研究
44、采用荧光显微镜观察。结果表明，仿刺参的吞噬细胞在等渗缓冲液、无细胞体腔液和酵母细胞作用的无细胞体腔液中均具有吞噬能力。在不同的反应基质条件下，吞噬细胞对酵母细胞的吞噬率有所不同。当反应基质为无细胞体腔液时，吞噬细胞对酵母细胞的吞噬率最高。SDS-PAGE 分析结果表明，一种分子量约为 18 kDa的分子可以结合到热致死酵母细胞上，增强吞噬作用。通过凝胶过滤层析纯化出这种调理素样分子。调理素样分子功能检测实验表明，这种约 18 kDa的调理素样分子可增强吞噬细胞的吞噬作用，但其并不能单独提高吞噬作用，还需要和体腔液中某种物质共同作用才可使吞噬作用得以增强。调理素样分子 N端前 15个氨基酸序列及
45、质谱分析结果表明，此调理素样分子是无脊椎动物调理素样分子中的新成员。 Western blots 与 ELISA分析结果均表明，脂多糖(LPS)免疫刺激和受伤均可使体腔内调理素样分子水平增加。注射 LPS的仿刺参体腔液中调理素样分子含量在注射后 1h显著增加(P0.05)。注射后 1h到 2d内显著高于注射前 15 min水平(P0.05)。最大量出现在注射后 3d到6d，且显著高于注射后 1h到 2d水平(P0.05)。6d 后，调理素样分子水平开始下降，并恢复到在注射后 1h到 2d水平(P0.05)。注无菌海水(SSW)的海参体内调理素样分子水平较低。注射前 15min到注射后 12 h
46、体腔液中调理素样分子含量均无显著变化(P0.05)。注射后第 2 d到 8 d，调理素样分子含量升高并显著高于注射前 15 min到注射后 12 h水平(P0.05)。这是因为采取注射的方式，仿刺参会受伤，而受伤所产生的应激也可刺激机体产生免疫应答。 注射 LPS的仿刺参体腔液中调理素样分子水平除注射前 15 min，注射后第 2 d和8 d无显著差异外(P0.05)，其它时间均显著高于注射 SSW组(P0.05)。这表明了 LPS免疫刺激及受伤刺激均可使仿刺参体内调理素样分子含量增加。而受伤和 LPS共同刺激可使机体分泌更多的调理素样分子。 该调理素样分子具凝集素性质，推测它是一种凝集素。该
47、调理素样分子可以凝集兔、鸡、鼠、鲫和人的 A、B、O、AB 型红细胞。其凝集结果为：鸡兔人(A=B=O=AB)鼠鲫。凝菌结果表明，纯化的调理素样分子可凝集革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌。细菌中以鳗弧菌对调理素样分子最敏感。在 25-60保温 30 min，凝集活性均未见改变。在 7030 min 热处理后仍然对鸡红细胞显示出凝集活性，活性开始下降。在 80热处理 30 min后失去凝集活力。当 5.0pH9.0 时，仿刺参调理素样分子具有活性，当 pH为 6.0-8.0时，活性最高，当 pH为 5.0或9.0时，活性下降，当 pH10.0 或4.0 时，失去凝集活力。调理素样分子不被所测试的
48、D-葡萄糖(D-Glueose)、D-半乳糖(D-Galaetose)、L-Arabinose(L-岩藻糖)、D-木糖(D-Xylose)、D-甘露糖(D-Mannose)、L-鼠李糖(L-Rhamnose)、D-果糖(D-Frutose)和 LPS所抑制。可被 N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、N-乙酰神经氨酸(NeuAc)、牛下颚粘液素(Bovine submaxillary mucin，BSM)、胎球蛋白(Fetuin)、脱唾液酸牛下颚粘液素(Asialo-BSM)、脱唾液酸胎球蛋白(Asialo-Fetuin)所抑制。N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、
49、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)和 N-乙酰神经氨酸(NeuAc)的最小抑制浓度分别为 20.15 mmol/L、12.50 mmol/L 和 0.25mmol/L。牛下颚粘液素(Bovine submaxillary mucin，BSM)、胎球蛋白(Fetuin)、脱唾液酸牛下颚粘液素(Asialo-BSM)、脱唾液酸胎球蛋白(Asialo-Fetuin)的最小抑制浓度分别为0.39 mg/mL、1.56 mg/mL、3.12 mg/mL 和6.26mg/mL。EDTA，Mn2+、Ca2+、Mg2+、K+等金属离子作用的调理素样分子对鸡红细胞的凝集活性保持不变，即它们的存在不影响该调理素样分子的凝集活性。仿刺参是我国辽宁、山东、河北等北方沿海省份重要的养殖经济种类。仿刺参体腔液中的吞噬细胞在吞噬过程中起重要作用，而吞噬作用在无脊椎动物免疫防御中居于核心地位。调理素是一些血浆蛋白质，它们可以结合到病原体表面，使其成为靶细胞，为吞噬作用提供标记，从而增强吞噬细胞对病原体的吞噬作
