1、麻醉学专业毕业论文 精品论文 中枢一氧化氮介导莫索尼定心血管抑制效应的研究关键词：中枢性降压药 咪唑啉受体 一氧化氮 血流动力学 微量注射 侧脑室置管摘要：背景和目的 头端延髓腹外侧区(rostral ventrolateral medulla，RVLM)是交感神经活动和心血管功能调控的重要整合中枢，RVLM 内的前交感神经元(presympathetic orpremotor neuron)直接投射于脊髓中间外侧柱(intermediolateral column)，其紧张性活动是交感神经活动的基础，在心血管功能调控中发挥重要作用。RVLM 内分布有高密度的咪唑啉 1 受体(Il-imida
2、zoline receptor，IlR)及 2 肾上腺素受体(2-adrenaline receptor，2AR)。RVLM 和孤束核(nucleus tractus solitarius，NTS；含高密度的 2AR)是中枢性降压药物发挥作用的主要靶区域。 莫索尼定(moxonidine，MOX)是第二代中枢性降压药，主要通过激活 RVLM 中 IlR(MOX 对IlR 的亲和力为 2AR 的 4070 倍)抑制交感神经活性而引起血压(blood pressure，BP)下降和心率(heart rate，HR)减慢。近期研究认为，非特异性抑制中枢神经系统内源性一氧化氮(nitric oxide
3、，No)生成能显著减弱可乐定(clonidine)和 MOX 的降压和减慢 HR 效应；且 RVLM 中诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)介导中枢交感抑制，神经型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase，nNOS)介导中枢交感兴奋，iNOS 与nNOS 之间的“平横”是维持血流动力学稳定的重要因素。 本研究通过观察在中枢神经系统特异性抑制 iNOS-NO 对 MOX 交感抑制的影响，定量检测 MOX 慢性脑室内(intracerebroventricular，ICV)灌注后 RVLM 和 NTS 中
4、iNOS 的蛋白表达，研究 MOX 的心血管抑制效应是否由 RVLM 中 iNOS-NO 机制所介导。 方法 实验动物为雄性 Sprague-Dawley(SD)大鼠。将不同剂量的 iNOS 特异性抑制剂 S-甲基异硫脲(S-methylisothiourea，SMT)预给于侧脑室(1 nmol，10 nmol，100 nmol)或 RVLM(20 pmol，200 pmol)，分别观察其对 MOX 经 ICV(20 nmol)和 RVLM(5 nmol)及静脉(50g/kg)给药后心血管抑制的影响；通过免疫组织化学和 Western Blot 技术定量检测 ICV 慢性给予 MOX(20 n
5、mol/d，2 weeks)后 RVLM 和 NTS 中 iNOS 的蛋白表达。本研究包括三部分实验：SMT 急性ICV 灌注，SMT RVLM 微量注射和 MOX 慢性 ICV 灌注。 1 SMT 急性 ICV 灌注 连续监测大鼠的平均动脉压(mean arterial pressure，MAP)和 HR。ICV 给予人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid，aCSF；5l)或不同剂量 SMT(1 nmol，10 nmol，100 nmol；5l)，30min 后 ICV 给予 MOX(20 nmol：5l)，观察 SMT 预处理对 MOX 心血管抑制效应的影
6、响。27 只雄性 SD 大鼠随机分为aCSF+aCSF 组(n=5)，aCSF+MOX 组(n=5)，SMT100 nmol+MOX 组(n=6)，SMT10 nmol+MOX 组(n=6)和 SMT1 nmol+MOX 组(n=5)。 2 SMTRVLM 微量注射 2.1连续监测大鼠的 MAP、HR 和肾交感神经活性(renal sympathetic nerve activity，RSNA)。单侧 RVLM 微量注射 aCSF(100 nl)或不同剂量的 SMT(20 pmol，200 pmol；100 nl)，10min 后同侧 RVLM 微量注射 MOX(5 nmol：100nl)，观
7、察 SMT 预处理对 MOX 心血管抑制效应的影响。19 只雄性 SD 大鼠随机分为aCSF+aCSF 组(n=4)，aCSF+MOX 组(n=5)，SMT200 pmol+MOX 组(n=5)和 SMT20 pmol+MOX 组(n=5)。 2.2 双侧 RVLM 分别微量注射 aCSF(100nl)或 SMT(每侧20 pmol，200 pmol；100 nl)，10min 后静脉注射 MOX(50g/kg)，观察 SMT 预处理对 MOX 心血管抑制效应的影响。16 只雄性 SD 大鼠随机分为 aCSF+MOX 组(n=4)，SMT20 pmol+MOX 组(n=5)，SMT200 pm
8、ol+MOX 组(n=7)。 3 慢性 ICV灌注 大鼠侧脑室置管后，连续 2 周每日 ICV 给予的 aCSF(5l)或 MOX(20 nmol；5l)，实验结束后在麻醉状态下测定 MAP 和 HR，并取脑，通过免疫组织化学和 Western Blot 技术定量检测 RVLM 及 NTS 中 iNOS 蛋白表达，并比较灌注 aCSF 和 MOX 后 iNOS 蛋白表达的差异。20 只雄性 SD 大鼠随机分为 aCSF 组(n=10)和 MOX20nmol/d 组(n=10)。结果 1 SMT 急性 ICV 灌注 aCSF 经ICV 注射后给予 MOX20 nmol，可引起显著的 MAP(-2
9、23 mmHg)下降和 HR(-5813 bpm)减慢(P0.05)。SMT(1，10，100 nmol)剂量依赖性的减弱 MOX 的降压(-20+2 mmHg；-9+4 mmHg；-103 mmHg)和 HR 减慢(-4213 bpm；-189 bpm：-117 bpm)效应。 2 SMT RVLM 微量注射 2.1 RVLM 单侧微注射MOX5 nmol 可引起显著的 MAP(-253 mmHg)、HR(-4511 bpm)和 RSNA(-447)下降(P0.05)。同侧 SMT(20，200 pmol)剂量依赖性的减弱 MOX 的上述效应(-14+3 mmHg，-63 mmHg；-207
10、 bpm，-189bpm；-234，-113)(P0.05)。 2.2 双侧 RVLM 微量注射 aCSF 后静脉注射MOX(50g/kg)可引起显著的 MAP(-325 mmHg)下降和 HR(-5914 bpm)减慢(P0.05)。双侧 RVLM 各微量注射 SMT200 pmol 可显著减弱 MOX 静脉注射引起的 MAP(-15-+2 mmHg)下降(P0.05)，对 HR(-5416 bpm)减慢效应无显著影响(P0.05)。SMT20 pmol RVLM 预处理对 MOX 的效应无显著影响(-319 mmHg；-579 bpm)(P0.05)。 3 慢性侧脑室灌注 灌注两周后，与
11、aCSF组相比，MOX(20 nmol/d，2weeks)组基础 MAP(aCSF：1144 mmHg，MOX：933 mmHg)显著下降(P0.05)，基础 HR(aCSF：4068 bpm，MOX：3387 bpm)显著减慢(P0.05)；免疫组织化学和 Western Blot 显示，RVLM 中 iNOS 蛋白表达亦显著上调(P0.05)。两组 NTS 中 iNOS 蛋白表达无显著差异(P0.05)。 结论 中枢阻断 iNOS 源性 NO 释放可明显减弱MOX 的心血管抑制效应。慢性 ICV 给予 MOX 可选择性的上调 RVLM 中 iNOS 蛋白表达。本研究提示，RVLM 中 iN
12、OS-NO 机制在介导中枢性降压药 MOX 产生心血管抑制效应中起重要作用。正文内容背景和目的 头端延髓腹外侧区(rostral ventrolateral medulla，RVLM)是交感神经活动和心血管功能调控的重要整合中枢，RVLM 内的前交感神经元(presympathetic orpremotor neuron)直接投射于脊髓中间外侧柱(intermediolateral column)，其紧张性活动是交感神经活动的基础，在心血管功能调控中发挥重要作用。RVLM 内分布有高密度的咪唑啉 1 受体(Il-imidazoline receptor，IlR)及 2 肾上腺素受体(2-adr
13、enaline receptor，2AR)。RVLM 和孤束核(nucleus tractus solitarius，NTS；含高密度的 2AR)是中枢性降压药物发挥作用的主要靶区域。 莫索尼定(moxonidine，MOX)是第二代中枢性降压药，主要通过激活 RVLM 中 IlR(MOX 对IlR 的亲和力为 2AR 的 4070 倍)抑制交感神经活性而引起血压(blood pressure，BP)下降和心率(heart rate，HR)减慢。近期研究认为，非特异性抑制中枢神经系统内源性一氧化氮(nitric oxide，No)生成能显著减弱可乐定(clonidine)和 MOX 的降压和减
14、慢 HR 效应；且 RVLM 中诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)介导中枢交感抑制，神经型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase，nNOS)介导中枢交感兴奋，iNOS 与nNOS 之间的“平横”是维持血流动力学稳定的重要因素。 本研究通过观察在中枢神经系统特异性抑制 iNOS-NO 对 MOX 交感抑制的影响，定量检测 MOX 慢性脑室内(intracerebroventricular，ICV)灌注后 RVLM 和 NTS 中 iNOS 的蛋白表达，研究 MOX 的心血管抑制效应是否由 RVLM 中
15、 iNOS-NO 机制所介导。 方法 实验动物为雄性 Sprague-Dawley(SD)大鼠。将不同剂量的 iNOS 特异性抑制剂 S-甲基异硫脲(S-methylisothiourea，SMT)预给于侧脑室(1 nmol，10 nmol，100 nmol)或 RVLM(20 pmol，200 pmol)，分别观察其对 MOX 经 ICV(20 nmol)和 RVLM(5 nmol)及静脉(50g/kg)给药后心血管抑制的影响；通过免疫组织化学和 Western Blot 技术定量检测 ICV 慢性给予 MOX(20 nmol/d，2 weeks)后 RVLM 和 NTS 中 iNOS 的蛋
16、白表达。本研究包括三部分实验：SMT 急性ICV 灌注，SMT RVLM 微量注射和 MOX 慢性 ICV 灌注。 1 SMT 急性 ICV 灌注 连续监测大鼠的平均动脉压(mean arterial pressure，MAP)和 HR。ICV 给予人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid，aCSF；5l)或不同剂量 SMT(1 nmol，10 nmol，100 nmol；5l)，30min 后 ICV 给予 MOX(20 nmol：5l)，观察 SMT 预处理对 MOX 心血管抑制效应的影响。27 只雄性 SD 大鼠随机分为aCSF+aCSF 组(n=5)，a
17、CSF+MOX 组(n=5)，SMT100 nmol+MOX 组(n=6)，SMT10 nmol+MOX 组(n=6)和 SMT1 nmol+MOX 组(n=5)。 2 SMTRVLM 微量注射 2.1连续监测大鼠的 MAP、HR 和肾交感神经活性(renal sympathetic nerve activity，RSNA)。单侧 RVLM 微量注射 aCSF(100 nl)或不同剂量的 SMT(20 pmol，200 pmol；100 nl)，10min 后同侧 RVLM 微量注射 MOX(5 nmol：100nl)，观察 SMT 预处理对 MOX 心血管抑制效应的影响。19 只雄性 SD
18、大鼠随机分为aCSF+aCSF 组(n=4)，aCSF+MOX 组(n=5)，SMT200 pmol+MOX 组(n=5)和 SMT20 pmol+MOX 组(n=5)。 2.2 双侧 RVLM 分别微量注射 aCSF(100nl)或 SMT(每侧20 pmol，200 pmol；100 nl)，10min 后静脉注射 MOX(50g/kg)，观察 SMT 预处理对 MOX 心血管抑制效应的影响。16 只雄性 SD 大鼠随机分为 aCSF+MOX 组(n=4)，SMT20 pmol+MOX 组(n=5)，SMT200 pmol+MOX 组(n=7)。 3 慢性 ICV灌注 大鼠侧脑室置管后，连
19、续 2 周每日 ICV 给予的 aCSF(5l)或 MOX(20 nmol；5l)，实验结束后在麻醉状态下测定 MAP 和 HR，并取脑，通过免疫组织化学和 Western Blot 技术定量检测 RVLM 及 NTS 中 iNOS 蛋白表达，并比较灌注 aCSF 和 MOX 后 iNOS 蛋白表达的差异。20 只雄性 SD 大鼠随机分为 aCSF 组(n=10)和 MOX20nmol/d 组(n=10)。结果 1 SMT 急性 ICV 灌注 aCSF 经ICV 注射后给予 MOX20 nmol，可引起显著的 MAP(-223 mmHg)下降和 HR(-5813 bpm)减慢(P0.05)。S
20、MT(1，10，100 nmol)剂量依赖性的减弱 MOX 的降压(-20+2 mmHg；-9+4 mmHg；-103 mmHg)和 HR 减慢(-4213 bpm；-189 bpm：-117 bpm)效应。 2 SMT RVLM 微量注射 2.1 RVLM 单侧微注射MOX5 nmol 可引起显著的 MAP(-253 mmHg)、HR(-4511 bpm)和 RSNA(-447)下降(P0.05)。同侧 SMT(20，200 pmol)剂量依赖性的减弱 MOX 的上述效应(-14+3 mmHg，-63 mmHg；-207 bpm，-189bpm；-234，-113)(P0.05)。 2.2
21、双侧 RVLM 微量注射 aCSF 后静脉注射MOX(50g/kg)可引起显著的 MAP(-325 mmHg)下降和 HR(-5914 bpm)减慢(P0.05)。双侧 RVLM 各微量注射 SMT200 pmol 可显著减弱 MOX 静脉注射引起的 MAP(-15-+2 mmHg)下降(P0.05)，对 HR(-5416 bpm)减慢效应无显著影响(P0.05)。SMT20 pmol RVLM 预处理对 MOX 的效应无显著影响(-319 mmHg；-579 bpm)(P0.05)。 3 慢性侧脑室灌注 灌注两周后，与 aCSF组相比，MOX(20 nmol/d，2weeks)组基础 MAP
22、(aCSF：1144 mmHg，MOX：933 mmHg)显著下降(P0.05)，基础 HR(aCSF：4068 bpm，MOX：3387 bpm)显著减慢(P0.05)；免疫组织化学和 Western Blot 显示，RVLM 中 iNOS 蛋白表达亦显著上调(P0.05)。两组 NTS 中 iNOS 蛋白表达无显著差异(P0.05)。 结论 中枢阻断 iNOS 源性 NO 释放可明显减弱MOX 的心血管抑制效应。慢性 ICV 给予 MOX 可选择性的上调 RVLM 中 iNOS 蛋白表达。本研究提示，RVLM 中 iNOS-NO 机制在介导中枢性降压药 MOX 产生心血管抑制效应中起重要作
23、用。背景和目的 头端延髓腹外侧区(rostral ventrolateral medulla，RVLM)是交感神经活动和心血管功能调控的重要整合中枢，RVLM 内的前交感神经元(presympathetic orpremotor neuron)直接投射于脊髓中间外侧柱(intermediolateral column)，其紧张性活动是交感神经活动的基础，在心血管功能调控中发挥重要作用。RVLM 内分布有高密度的咪唑啉 1 受体(Il-imidazoline receptor，IlR)及 2 肾上腺素受体(2-adrenaline receptor，2AR)。RVLM 和孤束核(nucleus
24、tractus solitarius，NTS；含高密度的 2AR)是中枢性降压药物发挥作用的主要靶区域。 莫索尼定(moxonidine，MOX)是第二代中枢性降压药，主要通过激活 RVLM 中 IlR(MOX 对IlR 的亲和力为 2AR 的 4070 倍)抑制交感神经活性而引起血压(blood pressure，BP)下降和心率(heart rate，HR)减慢。近期研究认为，非特异性抑制中枢神经系统内源性一氧化氮(nitric oxide，No)生成能显著减弱可乐定(clonidine)和 MOX 的降压和减慢 HR 效应；且 RVLM 中诱生型一氧化氮合酶(inducible nitr
25、ic oxide synthase，iNOS)介导中枢交感抑制，神经型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase，nNOS)介导中枢交感兴奋，iNOS 与nNOS 之间的“平横”是维持血流动力学稳定的重要因素。 本研究通过观察在中枢神经系统特异性抑制 iNOS-NO 对 MOX 交感抑制的影响，定量检测 MOX 慢性脑室内(intracerebroventricular，ICV)灌注后 RVLM 和 NTS 中 iNOS 的蛋白表达，研究 MOX 的心血管抑制效应是否由 RVLM 中 iNOS-NO 机制所介导。 方法 实验动物为雄性 Sprague-Dawle
26、y(SD)大鼠。将不同剂量的 iNOS 特异性抑制剂 S-甲基异硫脲(S-methylisothiourea，SMT)预给于侧脑室(1 nmol，10 nmol，100 nmol)或 RVLM(20 pmol，200 pmol)，分别观察其对 MOX 经 ICV(20 nmol)和 RVLM(5 nmol)及静脉(50g/kg)给药后心血管抑制的影响；通过免疫组织化学和 Western Blot 技术定量检测 ICV 慢性给予 MOX(20 nmol/d，2 weeks)后 RVLM 和 NTS 中 iNOS 的蛋白表达。本研究包括三部分实验：SMT 急性ICV 灌注，SMT RVLM 微量注
27、射和 MOX 慢性 ICV 灌注。 1 SMT 急性 ICV 灌注 连续监测大鼠的平均动脉压(mean arterial pressure，MAP)和 HR。ICV 给予人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid，aCSF；5l)或不同剂量 SMT(1 nmol，10 nmol，100 nmol；5l)，30min 后 ICV 给予 MOX(20 nmol：5l)，观察 SMT 预处理对 MOX 心血管抑制效应的影响。27 只雄性 SD 大鼠随机分为aCSF+aCSF 组(n=5)，aCSF+MOX 组(n=5)，SMT100 nmol+MOX 组(n=6)，SM
28、T10 nmol+MOX 组(n=6)和 SMT1 nmol+MOX 组(n=5)。 2 SMTRVLM 微量注射 2.1连续监测大鼠的 MAP、HR 和肾交感神经活性(renal sympathetic nerve activity，RSNA)。单侧 RVLM 微量注射 aCSF(100 nl)或不同剂量的 SMT(20 pmol，200 pmol；100 nl)，10min 后同侧 RVLM 微量注射 MOX(5 nmol：100nl)，观察 SMT 预处理对 MOX 心血管抑制效应的影响。19 只雄性 SD 大鼠随机分为aCSF+aCSF 组(n=4)，aCSF+MOX 组(n=5)，S
29、MT200 pmol+MOX 组(n=5)和 SMT20 pmol+MOX 组(n=5)。 2.2 双侧 RVLM 分别微量注射 aCSF(100nl)或 SMT(每侧20 pmol，200 pmol；100 nl)，10min 后静脉注射 MOX(50g/kg)，观察 SMT 预处理对 MOX 心血管抑制效应的影响。16 只雄性 SD 大鼠随机分为 aCSF+MOX 组(n=4)，SMT20 pmol+MOX 组(n=5)，SMT200 pmol+MOX 组(n=7)。 3 慢性 ICV灌注 大鼠侧脑室置管后，连续 2 周每日 ICV 给予的 aCSF(5l)或 MOX(20 nmol；5l
30、)，实验结束后在麻醉状态下测定 MAP 和 HR，并取脑，通过免疫组织化学和 Western Blot 技术定量检测 RVLM 及 NTS 中 iNOS 蛋白表达，并比较灌注 aCSF 和 MOX 后 iNOS 蛋白表达的差异。20 只雄性 SD 大鼠随机分为 aCSF 组(n=10)和 MOX20nmol/d 组(n=10)。结果 1 SMT 急性 ICV 灌注 aCSF 经ICV 注射后给予 MOX20 nmol，可引起显著的 MAP(-223 mmHg)下降和 HR(-5813 bpm)减慢(P0.05)。SMT(1，10，100 nmol)剂量依赖性的减弱 MOX 的降压(-20+2
31、mmHg；-9+4 mmHg；-103 mmHg)和 HR 减慢(-4213 bpm；-189 bpm：-117 bpm)效应。 2 SMT RVLM 微量注射 2.1 RVLM 单侧微注射MOX5 nmol 可引起显著的 MAP(-253 mmHg)、HR(-4511 bpm)和 RSNA(-447)下降(P0.05)。同侧 SMT(20，200 pmol)剂量依赖性的减弱 MOX 的上述效应(-14+3 mmHg，-63 mmHg；-207 bpm，-189bpm；-234，-113)(P0.05)。 2.2 双侧 RVLM 微量注射 aCSF 后静脉注射MOX(50g/kg)可引起显著的
32、 MAP(-325 mmHg)下降和 HR(-5914 bpm)减慢(P0.05)。双侧 RVLM 各微量注射 SMT200 pmol 可显著减弱 MOX 静脉注射引起的 MAP(-15-+2 mmHg)下降(P0.05)，对 HR(-5416 bpm)减慢效应无显著影响(P0.05)。SMT20 pmol RVLM 预处理对 MOX 的效应无显著影响(-319 mmHg；-579 bpm)(P0.05)。 3 慢性侧脑室灌注 灌注两周后，与 aCSF组相比，MOX(20 nmol/d，2weeks)组基础 MAP(aCSF：1144 mmHg，MOX：933 mmHg)显著下降(P0.05)
33、，基础 HR(aCSF：4068 bpm，MOX：3387 bpm)显著减慢(P0.05)；免疫组织化学和 Western Blot 显示，RVLM 中 iNOS 蛋白表达亦显著上调(P0.05)。两组 NTS 中 iNOS 蛋白表达无显著差异(P0.05)。 结论 中枢阻断 iNOS 源性 NO 释放可明显减弱MOX 的心血管抑制效应。慢性 ICV 给予 MOX 可选择性的上调 RVLM 中 iNOS 蛋白表达。本研究提示，RVLM 中 iNOS-NO 机制在介导中枢性降压药 MOX 产生心血管抑制效应中起重要作用。背景和目的 头端延髓腹外侧区(rostral ventrolateral m
34、edulla，RVLM)是交感神经活动和心血管功能调控的重要整合中枢，RVLM 内的前交感神经元(presympathetic orpremotor neuron)直接投射于脊髓中间外侧柱(intermediolateral column)，其紧张性活动是交感神经活动的基础，在心血管功能调控中发挥重要作用。RVLM 内分布有高密度的咪唑啉 1 受体(Il-imidazoline receptor，IlR)及 2 肾上腺素受体(2-adrenaline receptor，2AR)。RVLM 和孤束核(nucleus tractus solitarius，NTS；含高密度的 2AR)是中枢性降压药
35、物发挥作用的主要靶区域。 莫索尼定(moxonidine，MOX)是第二代中枢性降压药，主要通过激活 RVLM 中 IlR(MOX 对IlR 的亲和力为 2AR 的 4070 倍)抑制交感神经活性而引起血压(blood pressure，BP)下降和心率(heart rate，HR)减慢。近期研究认为，非特异性抑制中枢神经系统内源性一氧化氮(nitric oxide，No)生成能显著减弱可乐定(clonidine)和 MOX 的降压和减慢 HR 效应；且 RVLM 中诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)介导中枢交感抑制，神经型一氧化氮合
36、酶(neuronal nitric oxide synthase，nNOS)介导中枢交感兴奋，iNOS 与nNOS 之间的“平横”是维持血流动力学稳定的重要因素。 本研究通过观察在中枢神经系统特异性抑制 iNOS-NO 对 MOX 交感抑制的影响，定量检测 MOX 慢性脑室内(intracerebroventricular，ICV)灌注后 RVLM 和 NTS 中 iNOS 的蛋白表达，研究 MOX 的心血管抑制效应是否由 RVLM 中 iNOS-NO 机制所介导。 方法 实验动物为雄性 Sprague-Dawley(SD)大鼠。将不同剂量的 iNOS 特异性抑制剂 S-甲基异硫脲(S-met
37、hylisothiourea，SMT)预给于侧脑室(1 nmol，10 nmol，100 nmol)或 RVLM(20 pmol，200 pmol)，分别观察其对 MOX 经 ICV(20 nmol)和 RVLM(5 nmol)及静脉(50g/kg)给药后心血管抑制的影响；通过免疫组织化学和 Western Blot 技术定量检测 ICV 慢性给予 MOX(20 nmol/d，2 weeks)后 RVLM 和 NTS 中 iNOS 的蛋白表达。本研究包括三部分实验：SMT 急性ICV 灌注，SMT RVLM 微量注射和 MOX 慢性 ICV 灌注。 1 SMT 急性 ICV 灌注 连续监测大鼠
38、的平均动脉压(mean arterial pressure，MAP)和 HR。ICV 给予人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid，aCSF；5l)或不同剂量 SMT(1 nmol，10 nmol，100 nmol；5l)，30min 后 ICV 给予 MOX(20 nmol：5l)，观察 SMT 预处理对 MOX 心血管抑制效应的影响。27 只雄性 SD 大鼠随机分为aCSF+aCSF 组(n=5)，aCSF+MOX 组(n=5)，SMT100 nmol+MOX 组(n=6)，SMT10 nmol+MOX 组(n=6)和 SMT1 nmol+MOX 组(n=5
39、)。 2 SMTRVLM 微量注射 2.1连续监测大鼠的 MAP、HR 和肾交感神经活性(renal sympathetic nerve activity，RSNA)。单侧 RVLM 微量注射 aCSF(100 nl)或不同剂量的 SMT(20 pmol，200 pmol；100 nl)，10min 后同侧 RVLM 微量注射 MOX(5 nmol：100nl)，观察 SMT 预处理对 MOX 心血管抑制效应的影响。19 只雄性 SD 大鼠随机分为aCSF+aCSF 组(n=4)，aCSF+MOX 组(n=5)，SMT200 pmol+MOX 组(n=5)和 SMT20 pmol+MOX 组(
40、n=5)。 2.2 双侧 RVLM 分别微量注射 aCSF(100nl)或 SMT(每侧20 pmol，200 pmol；100 nl)，10min 后静脉注射 MOX(50g/kg)，观察 SMT 预处理对 MOX 心血管抑制效应的影响。16 只雄性 SD 大鼠随机分为 aCSF+MOX 组(n=4)，SMT20 pmol+MOX 组(n=5)，SMT200 pmol+MOX 组(n=7)。 3 慢性 ICV灌注 大鼠侧脑室置管后，连续 2 周每日 ICV 给予的 aCSF(5l)或 MOX(20 nmol；5l)，实验结束后在麻醉状态下测定 MAP 和 HR，并取脑，通过免疫组织化学和 W
41、estern Blot 技术定量检测 RVLM 及 NTS 中 iNOS 蛋白表达，并比较灌注 aCSF 和 MOX 后 iNOS 蛋白表达的差异。20 只雄性 SD 大鼠随机分为 aCSF 组(n=10)和 MOX20nmol/d 组(n=10)。结果 1 SMT 急性 ICV 灌注 aCSF 经ICV 注射后给予 MOX20 nmol，可引起显著的 MAP(-223 mmHg)下降和 HR(-5813 bpm)减慢(P0.05)。SMT(1，10，100 nmol)剂量依赖性的减弱 MOX 的降压(-20+2 mmHg；-9+4 mmHg；-103 mmHg)和 HR 减慢(-4213 b
42、pm；-189 bpm：-117 bpm)效应。 2 SMT RVLM 微量注射 2.1 RVLM 单侧微注射MOX5 nmol 可引起显著的 MAP(-253 mmHg)、HR(-4511 bpm)和 RSNA(-447)下降(P0.05)。同侧 SMT(20，200 pmol)剂量依赖性的减弱 MOX 的上述效应(-14+3 mmHg，-63 mmHg；-207 bpm，-189bpm；-234，-113)(P0.05)。 2.2 双侧 RVLM 微量注射 aCSF 后静脉注射MOX(50g/kg)可引起显著的 MAP(-325 mmHg)下降和 HR(-5914 bpm)减慢(P0.05
43、)。双侧 RVLM 各微量注射 SMT200 pmol 可显著减弱 MOX 静脉注射引起的 MAP(-15-+2 mmHg)下降(P0.05)，对 HR(-5416 bpm)减慢效应无显著影响(P0.05)。SMT20 pmol RVLM 预处理对 MOX 的效应无显著影响(-319 mmHg；-579 bpm)(P0.05)。 3 慢性侧脑室灌注 灌注两周后，与 aCSF组相比，MOX(20 nmol/d，2weeks)组基础 MAP(aCSF：1144 mmHg，MOX：933 mmHg)显著下降(P0.05)，基础 HR(aCSF：4068 bpm，MOX：3387 bpm)显著减慢(P
44、0.05)；免疫组织化学和 Western Blot 显示，RVLM 中 iNOS 蛋白表达亦显著上调(P0.05)。两组 NTS 中 iNOS 蛋白表达无显著差异(P0.05)。 结论 中枢阻断 iNOS 源性 NO 释放可明显减弱MOX 的心血管抑制效应。慢性 ICV 给予 MOX 可选择性的上调 RVLM 中 iNOS 蛋白表达。本研究提示，RVLM 中 iNOS-NO 机制在介导中枢性降压药 MOX 产生心血管抑制效应中起重要作用。背景和目的 头端延髓腹外侧区(rostral ventrolateral medulla，RVLM)是交感神经活动和心血管功能调控的重要整合中枢，RVLM
45、内的前交感神经元(presympathetic orpremotor neuron)直接投射于脊髓中间外侧柱(intermediolateral column)，其紧张性活动是交感神经活动的基础，在心血管功能调控中发挥重要作用。RVLM 内分布有高密度的咪唑啉 1 受体(Il-imidazoline receptor，IlR)及 2 肾上腺素受体(2-adrenaline receptor，2AR)。RVLM 和孤束核(nucleus tractus solitarius，NTS；含高密度的 2AR)是中枢性降压药物发挥作用的主要靶区域。 莫索尼定(moxonidine，MOX)是第二代中枢性
46、降压药，主要通过激活 RVLM 中 IlR(MOX 对IlR 的亲和力为 2AR 的 4070 倍)抑制交感神经活性而引起血压(blood pressure，BP)下降和心率(heart rate，HR)减慢。近期研究认为，非特异性抑制中枢神经系统内源性一氧化氮(nitric oxide，No)生成能显著减弱可乐定(clonidine)和 MOX 的降压和减慢 HR 效应；且 RVLM 中诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)介导中枢交感抑制，神经型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase，nNOS)介导
47、中枢交感兴奋，iNOS 与nNOS 之间的“平横”是维持血流动力学稳定的重要因素。 本研究通过观察在中枢神经系统特异性抑制 iNOS-NO 对 MOX 交感抑制的影响，定量检测 MOX 慢性脑室内(intracerebroventricular，ICV)灌注后 RVLM 和 NTS 中 iNOS 的蛋白表达，研究 MOX 的心血管抑制效应是否由 RVLM 中 iNOS-NO 机制所介导。 方法 实验动物为雄性 Sprague-Dawley(SD)大鼠。将不同剂量的 iNOS 特异性抑制剂 S-甲基异硫脲(S-methylisothiourea，SMT)预给于侧脑室(1 nmol，10 nmol
48、，100 nmol)或 RVLM(20 pmol，200 pmol)，分别观察其对 MOX 经 ICV(20 nmol)和 RVLM(5 nmol)及静脉(50g/kg)给药后心血管抑制的影响；通过免疫组织化学和 Western Blot 技术定量检测 ICV 慢性给予 MOX(20 nmol/d，2 weeks)后 RVLM 和 NTS 中 iNOS 的蛋白表达。本研究包括三部分实验：SMT 急性ICV 灌注，SMT RVLM 微量注射和 MOX 慢性 ICV 灌注。 1 SMT 急性 ICV 灌注 连续监测大鼠的平均动脉压(mean arterial pressure，MAP)和 HR。ICV 给予人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid，aCSF；5l)或不同剂量 SMT(1 nmol，10 nmol，100 nmol；5l)，30min 后 ICV 给予 MOX(20 nmol：5l)，观察 SMT 预处理对 MOX 心血管抑制效应的影响。27 只雄性 SD 大鼠随机分为aCSF+aCSF 组(n=5)，aCSF+MOX 组(n=5)，SMT100 nmol+MOX 组(n=6)，SMT10 nmol+MOX 组(n=6)和 SMT1 nmol+MOX 组(
