1、内科学(心血管病)专业优秀论文 中国北方汉族人群 IL-17A、IL-17F和 IL-18基因与心肌梗死的关联研究关键词：冠心病 心肌梗死 单核苷酸多态性 连锁不平衡 基因启动子 遗传预报因子摘要：心肌梗死(myocardial infarction，MI)是全球范围内最主要的死亡原因之一，而近 90的 MI是由动脉粥样斑块破裂并继发血栓形成导致冠状动脉急性阻塞引起的。当前越来越多的证据支持局部和全身炎症反应在动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)的发生、发展、斑块破裂及血栓形成等过程中起到重要作用。白介素(interleukin，IL)-17A、IL-17F 和 IL-18均为
2、近年新发现的具有多种生物学作用的前炎症细胞因子。已有研究提示 IL-17A、IL-17F 和 IL-18与 AS斑块的不稳定性相关，在冠心病的发展中起着重要作用。目前，已有关于IL-17A基因多态、IL-18 基因启动子区功能多态-607C/A 和-137G/C 及 IL-17F基因第三外显子上的错义突变 His161Arg与哮喘、类风湿性关节炎、肠道炎症等慢性炎症性疾病的关联研究报道，但尚无研究探讨这些基因多态与 MI的关系。考虑到人群和种族的差异，对 IL-17A基因，我们采用候选基因途径基因组扫描策略，系统筛查中国北方汉族人群该基因编码区和侧翼序列识别所有多态位点，并进一步在病例-对照研
3、究中探讨潜在的功能多态位点与 MI的关系。我们还分别利用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reactionsequence-sequence specific primers，PCR-SSP)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reactionsequence-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)技术检测病例-对照组的 IL-18基因启动子区功能多态-607C/A、-137G/C 和 IL-17F基因第 3外显子的基因型，分析这些多态位点对于中国北方汉族人群 MI的影
4、响。 本研究所有入选对象均来自 2005-2008年期间沈阳军区总医院心血管内科收治的住院病人，均为长期居住在我国东北地区无血缘关系的汉族人群。我们随机选取急性心肌梗死患者 513例，选择年龄(2 岁)和性别与病例组匹配、并经冠状动脉造影排除为冠心病(coronary artery disease，CHD)的住院病人 477例作为对照组。IL-17F 基因多态鉴定在上述总样本中进行，IL-18 多态鉴定在上述总样本中选出的 234例 MI患者和与其年龄和性别匹配的 216例对照中进行。对于 IL-17A基因的研究，我们先在随机选取的 48例无血缘关系的 MI病例样本中，利用基因组 DNA直接测
5、序的方法筛查出这个基因编码区及调节区的全部序列变异，然后选择频率gt;5的6个多态位点，在 468例 MI患者和与其年龄和性别匹配的 440例对照中应用直接测序法在病例对照进行基因分型。方差分析及 x2检验用于单变量分析，多元Logistic回归分析用于检验多态位点与疾病的独立关联。用 Haploview软件计算连锁不平衡系数，单倍型的预测和推断用 PHASE软件，回顾性统计效能的估算用 QUANTO软件。主要结果及结论如下： 1.IL-17A 基因的研究结果：3691bp 的测序范围内共发现 10个多态位点，均为单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism，SN
6、P)，其中频率gt;5的常见多态有 6个，频率lt;5的多态有 4个，其中位于启动子区(-175T/C 和-112G/A)和编码区(+1230G/A)共三个 SNP为首次报道；国人的等位基因频率与其他人群存在差异。如-877A/G(rs4711998)G 等位基因频率在高加索人群为 0.73，在日本人群为 0.24，而本研究为 0.31；基因内部常见的多态间存在紧密连锁不平衡很常见。如-121G/A 与-197G/A 彼此间呈强连锁不平衡；单变量分析(包括按性别、年龄分层分析)、多元 Logistic回归和单体型分析都未发现 IL-17A基因多态或其单体型与 MI关联。 2.IL-17F 基因
7、的研究结果：IL-17F 基因His161Arg多态在高加索人群和中国汉族人群中的频率存在显著差异，在我国北方汉族人群的频率明显高于高加索人群(C 等位基因频率：0.11vs.0.03-0.05)，却和韩国人及日本人群相似(0.10-0.13)；单变量分析(包括按性别、年龄、冠状动脉病变的支数分层分析)和多元 Logistic回归分析都未发现 IL-17F基因His161Arg多态与 MI或 CHD的危险因素关联。 3.IL-18 基因的研究结果：不同人群 IL-18基因-607C/A 和-137G/C 多态频率存在显著差异，-607A 和-137C等位基因在我们的人群(0.56，0.16)中
8、频率明显和欧洲高加索人群(0.44，0.28)及非洲人群(0.44，0.29)不同，却和同是蒙古人种的韩国人(0.51，0.11)及日本人(0.61，0.14)的频率非常接近；单变量分析提示-137G/C多态和 MI缺乏关联，而-607C/A 多态与 MI显著相关。在调整 CHD传统危险因素后，-607C/A 多态依然保持了和 MI的关联。-607CC+CA 基因型携带者发生 MI的危险性是-607AA 基因型者的 1.890倍；连锁不平衡和单体型分析显示，IL-18 基因-607C/A 和-137G/C 多态存在连锁不平衡，并主要组成四种单体型 AC、AG、CC 和 CG(按-607C/A
9、和-137G/C 的顺序排列)。CG 与和 MI的危险性正关联，而 AC与 MI的危险性负关联，调整后的 OR值分别为 1.601和0.531。 总之，我们的研究首次发现中国北方汉族人群中，IL-18 基因-607C/A多态与 MI独立关联，提示 IL-18基因可能参与了国人 MI的发生。IL-17A基因多态和 IL-17FHis161Arg多态与：MI 缺乏关联，提示它们可能不是国人患 MI的遗传预报因子。正文内容心肌梗死(myocardial infarction，MI)是全球范围内最主要的死亡原因之一，而近 90的 MI是由动脉粥样斑块破裂并继发血栓形成导致冠状动脉急性阻塞引起的。当前越
10、来越多的证据支持局部和全身炎症反应在动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)的发生、发展、斑块破裂及血栓形成等过程中起到重要作用。白介素(interleukin，IL)-17A、IL-17F 和 IL-18均为近年新发现的具有多种生物学作用的前炎症细胞因子。已有研究提示 IL-17A、IL-17F 和 IL-18与 AS斑块的不稳定性相关，在冠心病的发展中起着重要作用。目前，已有关于IL-17A基因多态、IL-18 基因启动子区功能多态-607C/A 和-137G/C 及 IL-17F基因第三外显子上的错义突变 His161Arg与哮喘、类风湿性关节炎、肠道炎症等慢性炎症性疾病的关
11、联研究报道，但尚无研究探讨这些基因多态与 MI的关系。考虑到人群和种族的差异，对 IL-17A基因，我们采用候选基因途径基因组扫描策略，系统筛查中国北方汉族人群该基因编码区和侧翼序列识别所有多态位点，并进一步在病例-对照研究中探讨潜在的功能多态位点与 MI的关系。我们还分别利用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reactionsequence-sequence specific primers，PCR-SSP)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reactionsequence-restriction fragment lengt
12、h polymorphism，PCR-RFLP)技术检测病例-对照组的 IL-18基因启动子区功能多态-607C/A、-137G/C 和 IL-17F基因第 3外显子的基因型，分析这些多态位点对于中国北方汉族人群 MI的影响。 本研究所有入选对象均来自 2005-2008年期间沈阳军区总医院心血管内科收治的住院病人，均为长期居住在我国东北地区无血缘关系的汉族人群。我们随机选取急性心肌梗死患者 513例，选择年龄(2 岁)和性别与病例组匹配、并经冠状动脉造影排除为冠心病(coronary artery disease，CHD)的住院病人 477例作为对照组。IL-17F 基因多态鉴定在上述总样本
13、中进行，IL-18 多态鉴定在上述总样本中选出的 234例 MI患者和与其年龄和性别匹配的 216例对照中进行。对于 IL-17A基因的研究，我们先在随机选取的 48例无血缘关系的 MI病例样本中，利用基因组 DNA直接测序的方法筛查出这个基因编码区及调节区的全部序列变异，然后选择频率gt;5的6个多态位点，在 468例 MI患者和与其年龄和性别匹配的 440例对照中应用直接测序法在病例对照进行基因分型。方差分析及 x2检验用于单变量分析，多元Logistic回归分析用于检验多态位点与疾病的独立关联。用 Haploview软件计算连锁不平衡系数，单倍型的预测和推断用 PHASE软件，回顾性统计
14、效能的估算用 QUANTO软件。主要结果及结论如下： 1.IL-17A 基因的研究结果：3691bp 的测序范围内共发现 10个多态位点，均为单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism，SNP)，其中频率gt;5的常见多态有 6个，频率lt;5的多态有 4个，其中位于启动子区(-175T/C 和-112G/A)和编码区(+1230G/A)共三个 SNP为首次报道；国人的等位基因频率与其他人群存在差异。如-877A/G(rs4711998)G 等位基因频率在高加索人群为 0.73，在日本人群为 0.24，而本研究为 0.31；基因内部常见的多态间存在紧密连锁不平衡
15、很常见。如-121G/A 与-197G/A 彼此间呈强连锁不平衡；单变量分析(包括按性别、年龄分层分析)、多元 Logistic回归和单体型分析都未发现 IL-17A基因多态或其单体型与 MI关联。 2.IL-17F 基因的研究结果：IL-17F 基因His161Arg多态在高加索人群和中国汉族人群中的频率存在显著差异，在我国北方汉族人群的频率明显高于高加索人群(C 等位基因频率：0.11vs.0.03-0.05)，却和韩国人及日本人群相似(0.10-0.13)；单变量分析(包括按性别、年龄、冠状动脉病变的支数分层分析)和多元 Logistic回归分析都未发现 IL-17F基因His161Ar
16、g多态与 MI或 CHD的危险因素关联。 3.IL-18 基因的研究结果：不同人群 IL-18基因-607C/A 和-137G/C 多态频率存在显著差异，-607A 和-137C等位基因在我们的人群(0.56，0.16)中频率明显和欧洲高加索人群(0.44，0.28)及非洲人群(0.44，0.29)不同，却和同是蒙古人种的韩国人(0.51，0.11)及日本人(0.61，0.14)的频率非常接近；单变量分析提示-137G/C多态和 MI缺乏关联，而-607C/A 多态与 MI显著相关。在调整 CHD传统危险因素后，-607C/A 多态依然保持了和 MI的关联。-607CC+CA 基因型携带者发生
17、 MI的危险性是-607AA 基因型者的 1.890倍；连锁不平衡和单体型分析显示，IL-18 基因-607C/A 和-137G/C 多态存在连锁不平衡，并主要组成四种单体型 AC、AG、CC 和 CG(按-607C/A 和-137G/C 的顺序排列)。CG 与和 MI的危险性正关联，而 AC与 MI的危险性负关联，调整后的 OR值分别为 1.601和0.531。 总之，我们的研究首次发现中国北方汉族人群中，IL-18 基因-607C/A多态与 MI独立关联，提示 IL-18基因可能参与了国人 MI的发生。IL-17A基因多态和 IL-17FHis161Arg多态与：MI 缺乏关联，提示它们可
18、能不是国人患 MI的遗传预报因子。心肌梗死(myocardial infarction，MI)是全球范围内最主要的死亡原因之一，而近 90的 MI是由动脉粥样斑块破裂并继发血栓形成导致冠状动脉急性阻塞引起的。当前越来越多的证据支持局部和全身炎症反应在动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)的发生、发展、斑块破裂及血栓形成等过程中起到重要作用。白介素(interleukin，IL)-17A、IL-17F 和 IL-18均为近年新发现的具有多种生物学作用的前炎症细胞因子。已有研究提示 IL-17A、IL-17F 和 IL-18与 AS斑块的不稳定性相关，在冠心病的发展中起着重要作用。目
19、前，已有关于IL-17A基因多态、IL-18 基因启动子区功能多态-607C/A 和-137G/C 及 IL-17F基因第三外显子上的错义突变 His161Arg与哮喘、类风湿性关节炎、肠道炎症等慢性炎症性疾病的关联研究报道，但尚无研究探讨这些基因多态与 MI的关系。考虑到人群和种族的差异，对 IL-17A基因，我们采用候选基因途径基因组扫描策略，系统筛查中国北方汉族人群该基因编码区和侧翼序列识别所有多态位点，并进一步在病例-对照研究中探讨潜在的功能多态位点与 MI的关系。我们还分别利用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reactionsequence-sequen
20、ce specific primers，PCR-SSP)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reactionsequence-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)技术检测病例-对照组的 IL-18基因启动子区功能多态-607C/A、-137G/C 和 IL-17F基因第 3外显子的基因型，分析这些多态位点对于中国北方汉族人群 MI的影响。 本研究所有入选对象均来自 2005-2008年期间沈阳军区总医院心血管内科收治的住院病人，均为长期居住在我国东北地区无血缘关系的汉族人群。我们随机选取急性心肌
21、梗死患者 513例，选择年龄(2 岁)和性别与病例组匹配、并经冠状动脉造影排除为冠心病(coronary artery disease，CHD)的住院病人 477例作为对照组。IL-17F 基因多态鉴定在上述总样本中进行，IL-18 多态鉴定在上述总样本中选出的 234例 MI患者和与其年龄和性别匹配的 216例对照中进行。对于 IL-17A基因的研究，我们先在随机选取的 48例无血缘关系的 MI病例样本中，利用基因组 DNA直接测序的方法筛查出这个基因编码区及调节区的全部序列变异，然后选择频率gt;5的6个多态位点，在 468例 MI患者和与其年龄和性别匹配的 440例对照中应用直接测序法在
22、病例对照进行基因分型。方差分析及 x2检验用于单变量分析，多元Logistic回归分析用于检验多态位点与疾病的独立关联。用 Haploview软件计算连锁不平衡系数，单倍型的预测和推断用 PHASE软件，回顾性统计效能的估算用 QUANTO软件。主要结果及结论如下： 1.IL-17A 基因的研究结果：3691bp 的测序范围内共发现 10个多态位点，均为单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism，SNP)，其中频率gt;5的常见多态有 6个，频率lt;5的多态有 4个，其中位于启动子区(-175T/C 和-112G/A)和编码区(+1230G/A)共三个 SNP
23、为首次报道；国人的等位基因频率与其他人群存在差异。如-877A/G(rs4711998)G 等位基因频率在高加索人群为 0.73，在日本人群为 0.24，而本研究为 0.31；基因内部常见的多态间存在紧密连锁不平衡很常见。如-121G/A 与-197G/A 彼此间呈强连锁不平衡；单变量分析(包括按性别、年龄分层分析)、多元 Logistic回归和单体型分析都未发现 IL-17A基因多态或其单体型与 MI关联。 2.IL-17F 基因的研究结果：IL-17F 基因His161Arg多态在高加索人群和中国汉族人群中的频率存在显著差异，在我国北方汉族人群的频率明显高于高加索人群(C 等位基因频率：0
24、.11vs.0.03-0.05)，却和韩国人及日本人群相似(0.10-0.13)；单变量分析(包括按性别、年龄、冠状动脉病变的支数分层分析)和多元 Logistic回归分析都未发现 IL-17F基因His161Arg多态与 MI或 CHD的危险因素关联。 3.IL-18 基因的研究结果：不同人群 IL-18基因-607C/A 和-137G/C 多态频率存在显著差异，-607A 和-137C等位基因在我们的人群(0.56，0.16)中频率明显和欧洲高加索人群(0.44，0.28)及非洲人群(0.44，0.29)不同，却和同是蒙古人种的韩国人(0.51，0.11)及日本人(0.61，0.14)的频
25、率非常接近；单变量分析提示-137G/C多态和 MI缺乏关联，而-607C/A 多态与 MI显著相关。在调整 CHD传统危险因素后，-607C/A 多态依然保持了和 MI的关联。-607CC+CA 基因型携带者发生 MI的危险性是-607AA 基因型者的 1.890倍；连锁不平衡和单体型分析显示，IL-18 基因-607C/A 和-137G/C 多态存在连锁不平衡，并主要组成四种单体型 AC、AG、CC 和 CG(按-607C/A 和-137G/C 的顺序排列)。CG 与和 MI的危险性正关联，而 AC与 MI的危险性负关联，调整后的 OR值分别为 1.601和0.531。 总之，我们的研究首
26、次发现中国北方汉族人群中，IL-18 基因-607C/A多态与 MI独立关联，提示 IL-18基因可能参与了国人 MI的发生。IL-17A基因多态和 IL-17FHis161Arg多态与：MI 缺乏关联，提示它们可能不是国人患 MI的遗传预报因子。心肌梗死(myocardial infarction，MI)是全球范围内最主要的死亡原因之一，而近 90的 MI是由动脉粥样斑块破裂并继发血栓形成导致冠状动脉急性阻塞引起的。当前越来越多的证据支持局部和全身炎症反应在动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)的发生、发展、斑块破裂及血栓形成等过程中起到重要作用。白介素(interleukin
27、，IL)-17A、IL-17F 和 IL-18均为近年新发现的具有多种生物学作用的前炎症细胞因子。已有研究提示 IL-17A、IL-17F 和 IL-18与 AS斑块的不稳定性相关，在冠心病的发展中起着重要作用。目前，已有关于IL-17A基因多态、IL-18 基因启动子区功能多态-607C/A 和-137G/C 及 IL-17F基因第三外显子上的错义突变 His161Arg与哮喘、类风湿性关节炎、肠道炎症等慢性炎症性疾病的关联研究报道，但尚无研究探讨这些基因多态与 MI的关系。考虑到人群和种族的差异，对 IL-17A基因，我们采用候选基因途径基因组扫描策略，系统筛查中国北方汉族人群该基因编码区
28、和侧翼序列识别所有多态位点，并进一步在病例-对照研究中探讨潜在的功能多态位点与 MI的关系。我们还分别利用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reactionsequence-sequence specific primers，PCR-SSP)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reactionsequence-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)技术检测病例-对照组的 IL-18基因启动子区功能多态-607C/A、-137G/C 和 IL-17F基因第 3外显子的基因
29、型，分析这些多态位点对于中国北方汉族人群 MI的影响。 本研究所有入选对象均来自 2005-2008年期间沈阳军区总医院心血管内科收治的住院病人，均为长期居住在我国东北地区无血缘关系的汉族人群。我们随机选取急性心肌梗死患者 513例，选择年龄(2 岁)和性别与病例组匹配、并经冠状动脉造影排除为冠心病(coronary artery disease，CHD)的住院病人 477例作为对照组。IL-17F 基因多态鉴定在上述总样本中进行，IL-18 多态鉴定在上述总样本中选出的 234例 MI患者和与其年龄和性别匹配的 216例对照中进行。对于 IL-17A基因的研究，我们先在随机选取的 48例无血
30、缘关系的 MI病例样本中，利用基因组 DNA直接测序的方法筛查出这个基因编码区及调节区的全部序列变异，然后选择频率gt;5的6个多态位点，在 468例 MI患者和与其年龄和性别匹配的 440例对照中应用直接测序法在病例对照进行基因分型。方差分析及 x2检验用于单变量分析，多元Logistic回归分析用于检验多态位点与疾病的独立关联。用 Haploview软件计算连锁不平衡系数，单倍型的预测和推断用 PHASE软件，回顾性统计效能的估算用 QUANTO软件。主要结果及结论如下： 1.IL-17A 基因的研究结果：3691bp 的测序范围内共发现 10个多态位点，均为单核苷酸多态(single n
31、ucleotide polymorphism，SNP)，其中频率gt;5的常见多态有 6个，频率lt;5的多态有 4个，其中位于启动子区(-175T/C 和-112G/A)和编码区(+1230G/A)共三个 SNP为首次报道；国人的等位基因频率与其他人群存在差异。如-877A/G(rs4711998)G 等位基因频率在高加索人群为 0.73，在日本人群为 0.24，而本研究为 0.31；基因内部常见的多态间存在紧密连锁不平衡很常见。如-121G/A 与-197G/A 彼此间呈强连锁不平衡；单变量分析(包括按性别、年龄分层分析)、多元 Logistic回归和单体型分析都未发现 IL-17A基因多
32、态或其单体型与 MI关联。 2.IL-17F 基因的研究结果：IL-17F 基因His161Arg多态在高加索人群和中国汉族人群中的频率存在显著差异，在我国北方汉族人群的频率明显高于高加索人群(C 等位基因频率：0.11vs.0.03-0.05)，却和韩国人及日本人群相似(0.10-0.13)；单变量分析(包括按性别、年龄、冠状动脉病变的支数分层分析)和多元 Logistic回归分析都未发现 IL-17F基因His161Arg多态与 MI或 CHD的危险因素关联。 3.IL-18 基因的研究结果：不同人群 IL-18基因-607C/A 和-137G/C 多态频率存在显著差异，-607A 和-1
33、37C等位基因在我们的人群(0.56，0.16)中频率明显和欧洲高加索人群(0.44，0.28)及非洲人群(0.44，0.29)不同，却和同是蒙古人种的韩国人(0.51，0.11)及日本人(0.61，0.14)的频率非常接近；单变量分析提示-137G/C多态和 MI缺乏关联，而-607C/A 多态与 MI显著相关。在调整 CHD传统危险因素后，-607C/A 多态依然保持了和 MI的关联。-607CC+CA 基因型携带者发生 MI的危险性是-607AA 基因型者的 1.890倍；连锁不平衡和单体型分析显示，IL-18 基因-607C/A 和-137G/C 多态存在连锁不平衡，并主要组成四种单体
34、型 AC、AG、CC 和 CG(按-607C/A 和-137G/C 的顺序排列)。CG 与和 MI的危险性正关联，而 AC与 MI的危险性负关联，调整后的 OR值分别为 1.601和0.531。 总之，我们的研究首次发现中国北方汉族人群中，IL-18 基因-607C/A多态与 MI独立关联，提示 IL-18基因可能参与了国人 MI的发生。IL-17A基因多态和 IL-17FHis161Arg多态与：MI 缺乏关联，提示它们可能不是国人患 MI的遗传预报因子。心肌梗死(myocardial infarction，MI)是全球范围内最主要的死亡原因之一，而近 90的 MI是由动脉粥样斑块破裂并继发
35、血栓形成导致冠状动脉急性阻塞引起的。当前越来越多的证据支持局部和全身炎症反应在动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)的发生、发展、斑块破裂及血栓形成等过程中起到重要作用。白介素(interleukin，IL)-17A、IL-17F 和 IL-18均为近年新发现的具有多种生物学作用的前炎症细胞因子。已有研究提示 IL-17A、IL-17F 和 IL-18与 AS斑块的不稳定性相关，在冠心病的发展中起着重要作用。目前，已有关于IL-17A基因多态、IL-18 基因启动子区功能多态-607C/A 和-137G/C 及 IL-17F基因第三外显子上的错义突变 His161Arg与哮喘、类
36、风湿性关节炎、肠道炎症等慢性炎症性疾病的关联研究报道，但尚无研究探讨这些基因多态与 MI的关系。考虑到人群和种族的差异，对 IL-17A基因，我们采用候选基因途径基因组扫描策略，系统筛查中国北方汉族人群该基因编码区和侧翼序列识别所有多态位点，并进一步在病例-对照研究中探讨潜在的功能多态位点与 MI的关系。我们还分别利用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reactionsequence-sequence specific primers，PCR-SSP)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reactionsequence-restr
37、iction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)技术检测病例-对照组的 IL-18基因启动子区功能多态-607C/A、-137G/C 和 IL-17F基因第 3外显子的基因型，分析这些多态位点对于中国北方汉族人群 MI的影响。 本研究所有入选对象均来自 2005-2008年期间沈阳军区总医院心血管内科收治的住院病人，均为长期居住在我国东北地区无血缘关系的汉族人群。我们随机选取急性心肌梗死患者 513例，选择年龄(2 岁)和性别与病例组匹配、并经冠状动脉造影排除为冠心病(coronary artery disease，CHD)的住院病人 477例作为对照
38、组。IL-17F 基因多态鉴定在上述总样本中进行，IL-18 多态鉴定在上述总样本中选出的 234例 MI患者和与其年龄和性别匹配的 216例对照中进行。对于 IL-17A基因的研究，我们先在随机选取的 48例无血缘关系的 MI病例样本中，利用基因组 DNA直接测序的方法筛查出这个基因编码区及调节区的全部序列变异，然后选择频率gt;5的6个多态位点，在 468例 MI患者和与其年龄和性别匹配的 440例对照中应用直接测序法在病例对照进行基因分型。方差分析及 x2检验用于单变量分析，多元Logistic回归分析用于检验多态位点与疾病的独立关联。用 Haploview软件计算连锁不平衡系数，单倍型
39、的预测和推断用 PHASE软件，回顾性统计效能的估算用 QUANTO软件。主要结果及结论如下： 1.IL-17A 基因的研究结果：3691bp 的测序范围内共发现 10个多态位点，均为单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism，SNP)，其中频率gt;5的常见多态有 6个，频率lt;5的多态有 4个，其中位于启动子区(-175T/C 和-112G/A)和编码区(+1230G/A)共三个 SNP为首次报道；国人的等位基因频率与其他人群存在差异。如-877A/G(rs4711998)G 等位基因频率在高加索人群为 0.73，在日本人群为 0.24，而本研究为 0.3
40、1；基因内部常见的多态间存在紧密连锁不平衡很常见。如-121G/A 与-197G/A 彼此间呈强连锁不平衡；单变量分析(包括按性别、年龄分层分析)、多元 Logistic回归和单体型分析都未发现 IL-17A基因多态或其单体型与 MI关联。 2.IL-17F 基因的研究结果：IL-17F 基因His161Arg多态在高加索人群和中国汉族人群中的频率存在显著差异，在我国北方汉族人群的频率明显高于高加索人群(C 等位基因频率：0.11vs.0.03-0.05)，却和韩国人及日本人群相似(0.10-0.13)；单变量分析(包括按性别、年龄、冠状动脉病变的支数分层分析)和多元 Logistic回归分析
41、都未发现 IL-17F基因His161Arg多态与 MI或 CHD的危险因素关联。 3.IL-18 基因的研究结果：不同人群 IL-18基因-607C/A 和-137G/C 多态频率存在显著差异，-607A 和-137C等位基因在我们的人群(0.56，0.16)中频率明显和欧洲高加索人群(0.44，0.28)及非洲人群(0.44，0.29)不同，却和同是蒙古人种的韩国人(0.51，0.11)及日本人(0.61，0.14)的频率非常接近；单变量分析提示-137G/C多态和 MI缺乏关联，而-607C/A 多态与 MI显著相关。在调整 CHD传统危险因素后，-607C/A 多态依然保持了和 MI的
42、关联。-607CC+CA 基因型携带者发生 MI的危险性是-607AA 基因型者的 1.890倍；连锁不平衡和单体型分析显示，IL-18 基因-607C/A 和-137G/C 多态存在连锁不平衡，并主要组成四种单体型 AC、AG、CC 和 CG(按-607C/A 和-137G/C 的顺序排列)。CG 与和 MI的危险性正关联，而 AC与 MI的危险性负关联，调整后的 OR值分别为 1.601和0.531。 总之，我们的研究首次发现中国北方汉族人群中，IL-18 基因-607C/A多态与 MI独立关联，提示 IL-18基因可能参与了国人 MI的发生。IL-17A基因多态和 IL-17FHis16
43、1Arg多态与：MI 缺乏关联，提示它们可能不是国人患 MI的遗传预报因子。心肌梗死(myocardial infarction，MI)是全球范围内最主要的死亡原因之一，而近 90的 MI是由动脉粥样斑块破裂并继发血栓形成导致冠状动脉急性阻塞引起的。当前越来越多的证据支持局部和全身炎症反应在动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)的发生、发展、斑块破裂及血栓形成等过程中起到重要作用。白介素(interleukin，IL)-17A、IL-17F 和 IL-18均为近年新发现的具有多种生物学作用的前炎症细胞因子。已有研究提示 IL-17A、IL-17F 和 IL-18与 AS斑块的不稳
44、定性相关，在冠心病的发展中起着重要作用。目前，已有关于IL-17A基因多态、IL-18 基因启动子区功能多态-607C/A 和-137G/C 及 IL-17F基因第三外显子上的错义突变 His161Arg与哮喘、类风湿性关节炎、肠道炎症等慢性炎症性疾病的关联研究报道，但尚无研究探讨这些基因多态与 MI的关系。考虑到人群和种族的差异，对 IL-17A基因，我们采用候选基因途径基因组扫描策略，系统筛查中国北方汉族人群该基因编码区和侧翼序列识别所有多态位点，并进一步在病例-对照研究中探讨潜在的功能多态位点与 MI的关系。我们还分别利用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain re
45、actionsequence-sequence specific primers，PCR-SSP)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reactionsequence-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)技术检测病例-对照组的 IL-18基因启动子区功能多态-607C/A、-137G/C 和 IL-17F基因第 3外显子的基因型，分析这些多态位点对于中国北方汉族人群 MI的影响。 本研究所有入选对象均来自 2005-2008年期间沈阳军区总医院心血管内科收治的住院病人，均为长期居住在我国东北地区
46、无血缘关系的汉族人群。我们随机选取急性心肌梗死患者 513例，选择年龄(2 岁)和性别与病例组匹配、并经冠状动脉造影排除为冠心病(coronary artery disease，CHD)的住院病人 477例作为对照组。IL-17F 基因多态鉴定在上述总样本中进行，IL-18 多态鉴定在上述总样本中选出的 234例 MI患者和与其年龄和性别匹配的 216例对照中进行。对于 IL-17A基因的研究，我们先在随机选取的 48例无血缘关系的 MI病例样本中，利用基因组 DNA直接测序的方法筛查出这个基因编码区及调节区的全部序列变异，然后选择频率gt;5的6个多态位点，在 468例 MI患者和与其年龄和
47、性别匹配的 440例对照中应用直接测序法在病例对照进行基因分型。方差分析及 x2检验用于单变量分析，多元Logistic回归分析用于检验多态位点与疾病的独立关联。用 Haploview软件计算连锁不平衡系数，单倍型的预测和推断用 PHASE软件，回顾性统计效能的估算用 QUANTO软件。主要结果及结论如下： 1.IL-17A 基因的研究结果：3691bp 的测序范围内共发现 10个多态位点，均为单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism，SNP)，其中频率gt;5的常见多态有 6个，频率lt;5的多态有 4个，其中位于启动子区(-175T/C 和-112G/A)
48、和编码区(+1230G/A)共三个 SNP为首次报道；国人的等位基因频率与其他人群存在差异。如-877A/G(rs4711998)G 等位基因频率在高加索人群为 0.73，在日本人群为 0.24，而本研究为 0.31；基因内部常见的多态间存在紧密连锁不平衡很常见。如-121G/A 与-197G/A 彼此间呈强连锁不平衡；单变量分析(包括按性别、年龄分层分析)、多元 Logistic回归和单体型分析都未发现 IL-17A基因多态或其单体型与 MI关联。 2.IL-17F 基因的研究结果：IL-17F 基因His161Arg多态在高加索人群和中国汉族人群中的频率存在显著差异，在我国北方汉族人群的频
49、率明显高于高加索人群(C 等位基因频率：0.11vs.0.03-0.05)，却和韩国人及日本人群相似(0.10-0.13)；单变量分析(包括按性别、年龄、冠状动脉病变的支数分层分析)和多元 Logistic回归分析都未发现 IL-17F基因His161Arg多态与 MI或 CHD的危险因素关联。 3.IL-18 基因的研究结果：不同人群 IL-18基因-607C/A 和-137G/C 多态频率存在显著差异，-607A 和-137C等位基因在我们的人群(0.56，0.16)中频率明显和欧洲高加索人群(0.44，0.28)及非洲人群(0.44，0.29)不同，却和同是蒙古人种的韩国人(0.51，0.11)及日本人(0.61，0.14)的频率非常接近；单变量分析提示-137G/C多态和 MI缺乏关联，而-607C/A 多态与 MI显著相关。在调整 CHD传统危险因素后，-607C/A 多态依然保持了和 MI的关联。-607CC+CA 基因型携带者发生 MI的危险性是-607AA 基因型者的 1.890倍；连锁不平衡和单体型分析显示，IL-18 基因-607C/A 和
