中医祛毒汤对anll-cr患者bmnc来源dcyou导作用研究.doc

1、中医内科学专业优秀论文 祛毒汤对 ANLL-CR 患者 BMNC 来源 DC 诱导作用研究关键词：祛毒汤 急性髓细胞白血病 骨髓单个核细胞 诱导分化 树突状细胞摘要：目的：本实验以体外培养的方法，将达到完全缓解标准的急性髓细胞白血病患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC）与祛毒汤含药血清共同培养，观察含药血清对此来源的树突状细胞（DC）分化成熟的影响。用此法诱导分化的树突状细胞（DC）与纯化的正常人和缓解期患者外周血 T 细胞共同培养，得到激发 T 细胞，用激发的 T 细胞与白血病细胞株（K562）共同培育，以 MTT 法测定该 T 细胞对 K562 细胞株的杀伤活性，探讨

2、祛毒汤对急性髓细胞白血病完全缓解期患者 DC 的免疫功能的影响。 方法： 第一、应用绵羊红细胞玫瑰花结程序从 ANLLCR 患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC） ，用含 10%FBS 的 RPMI1640 培养液调整 TDBMNC 细胞浓度后加入 24 孔板中培养，培养 9d，隔日换液 1 次，以不同浓度中药含药血清、中药含药血清联合细胞因子（GMCSF、IL4、TNF） 、细胞因子、空白血清组分别培养。 第二、在培养过程中观察细胞的形态，并拍照。 第三、用FITC 标记的 CD1a、HLADR 和 CD86 抗体标记各组细胞，用流式细胞仪检测各组的 DC 表面标志 C

3、D1a、HLADR 和 CD86 分子的表达率。 第四、分别收集纯化的同种异体 T 细胞、ANLLCR 患者自体 T 细胞，与 AMLCR 患者 TDMNC来源的 DC 以 10：1 比例加入 24 孔培养板培养 5d，培养基中加入 100U/ml 的IL2 进行同种异体 T 细胞及自体 T 细胞的激发。 第五、激发后的各组 T 细胞与 K562 细胞分别以 10：1、20：1、40：1 效：靶比例培养 24h，MTT 法检测不同条件培养的 DC 诱导 T 细胞的杀伤效应。 结果： 1.用倒置显微镜观察发现祛毒汤含药血清组、含药血清联合细胞因子组、细胞因子组 DC 的形态无差别。 2.祛毒汤各

4、剂量组，细胞因子联合祛毒汤各剂量组，细胞因子组与空白血清组诱导 DC 的 CD1a、CD86、HLADR 的表达比较有显著差异（Plt;0.01） ，均优于空白血清组；祛毒汤低剂量组、祛毒汤中剂量组与细胞因子组诱导 DC 的 CD1a 表达有差异（Plt;0.05） ，祛毒汤高剂量组、细胞因子联合祛毒汤低、中剂量组与细胞因子组 CD1a 的表达有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组 CD1a 有差异（Plt;0.05） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与细胞因子联合祛毒汤低、中剂量组诱导 DC 的 CD1a 有差异（Plt;0.05） 。祛毒汤高组与细胞因子组

5、诱导 DC 的 CD86 表达差异（Plt;0.05） ；祛毒汤高剂量组与祛毒汤低剂量组诱导 DC 的 CD86 的表达有差异（Plt;0.05） 。祛毒汤低、中、高剂量组和细胞因子联合祛毒汤低、中组诱导 DC 的 HLADR 的表达与细胞因子组诱导 DC 的 HLADR 的表达有显著差异（Plt;0.01） ，细胞因子联合祛毒汤中剂量组与祛毒汤中剂量组有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组有显著差异（Plt;0.01） 。 3.各组激活 T细胞对 K562 细胞均有杀伤作用，各组别与空白血清（KB）组杀伤率均有显著差异（Plt;0.01） ，各组别均优于

6、空白血清组。各组内比较：正常人 T 细胞祛毒汤中剂量组 40：1 与 10：1 效靶比杀伤率有显著差异（Plt;0.01） ，余各组无差异，正常人 T 细胞祛毒汤中剂量组 20：1 与 10：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ；正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 10：1 与40：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ，正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 20：1 与 40：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ，余各组之间效靶比无差异。患者 T 细胞祛毒汤中低剂量组效靶比 40：1 与 10：1 有差异（Plt;0.05） ，余各组效靶比之间无差异（Pgt;0.05） 。

7、 结论： 1.急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞经祛毒汤含药血清诱导培养可获得具备典型特征和细胞表型的 DC. 2.祛毒汤含药血清诱导的 DC 激活的 T 淋巴细胞能够特异性杀伤 K562 肿瘤细胞。正文内容目的：本实验以体外培养的方法，将达到完全缓解标准的急性髓细胞白血病患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC）与祛毒汤含药血清共同培养，观察含药血清对此来源的树突状细胞（DC）分化成熟的影响。用此法诱导分化的树突状细胞（DC）与纯化的正常人和缓解期患者外周血 T 细胞共同培养，得到激发 T 细胞，用激发的 T 细胞与白血病细胞株（K562）共同培育，以 MTT 法测定该 T

8、 细胞对 K562 细胞株的杀伤活性，探讨祛毒汤对急性髓细胞白血病完全缓解期患者 DC 的免疫功能的影响。 方法： 第一、应用绵羊红细胞玫瑰花结程序从 ANLLCR 患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC） ，用含 10%FBS 的 RPMI1640 培养液调整 TDBMNC 细胞浓度后加入24 孔板中培养，培养 9d，隔日换液 1 次，以不同浓度中药含药血清、中药含药血清联合细胞因子（GMCSF、IL4、TNF） 、细胞因子、空白血清组分别培养。 第二、在培养过程中观察细胞的形态，并拍照。 第三、用 FITC 标记的 CD1a、HLADR 和 CD86 抗体标记各组细胞，

9、用流式细胞仪检测各组的DC 表面标志 CD1a、HLADR 和 CD86 分子的表达率。 第四、分别收集纯化的同种异体 T 细胞、ANLLCR 患者自体 T 细胞，与 AMLCR 患者 TDMNC 来源的DC 以 10：1 比例加入 24 孔培养板培养 5d，培养基中加入 100U/ml 的 IL2 进行同种异体 T 细胞及自体 T 细胞的激发。 第五、激发后的各组 T 细胞与K562 细胞分别以 10：1、20：1、40：1 效：靶比例培养 24h，MTT 法检测不同条件培养的 DC 诱导 T 细胞的杀伤效应。 结果： 1.用倒置显微镜观察发现祛毒汤含药血清组、含药血清联合细胞因子组、细胞因

10、子组 DC 的形态无差别。 2.祛毒汤各剂量组，细胞因子联合祛毒汤各剂量组，细胞因子组与空白血清组诱导 DC 的 CD1a、CD86、HLADR 的表达比较有显著差异（Plt;0.01） ，均优于空白血清组；祛毒汤低剂量组、祛毒汤中剂量组与细胞因子组诱导 DC的 CD1a 表达有差异（Plt;0.05） ，祛毒汤高剂量组、细胞因子联合祛毒汤低、中剂量组与细胞因子组 CD1a 的表达有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组 CD1a 有差异（Plt;0.05） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与细胞因子联合祛毒汤低、中剂量组诱导 DC 的CD1a 有差异（Plt;

11、0.05） 。祛毒汤高组与细胞因子组诱导 DC 的 CD86 表达差异（Plt;0.05） ；祛毒汤高剂量组与祛毒汤低剂量组诱导 DC 的 CD86的表达有差异（Plt;0.05） 。祛毒汤低、中、高剂量组和细胞因子联合祛毒汤低、中组诱导 DC 的 HLADR 的表达与细胞因子组诱导 DC 的 HLADR 的表达有显著差异（Plt;0.01） ，细胞因子联合祛毒汤中剂量组与祛毒汤中剂量组有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组有显著差异（Plt;0.01） 。 3.各组激活 T 细胞对 K562 细胞均有杀伤作用，各组别与空白血清（KB）组杀伤率均有显著差异

12、（Plt;0.01） ，各组别均优于空白血清组。各组内比较：正常人 T 细胞祛毒汤中剂量组 40：1与 10：1 效靶比杀伤率有显著差异（Plt;0.01） ，余各组无差异，正常人T 细胞祛毒汤中剂量组 20：1 与 10：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ；正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 10：1 与 40：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ，正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 20：1 与40：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ，余各组之间效靶比无差异。患者 T 细胞祛毒汤中低剂量组效靶比 40：1 与 10：1 有差异（Plt;0.05） ，余各组效靶比之

13、间无差异（Pgt;0.05） 。 结论： 1.急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞经祛毒汤含药血清诱导培养可获得具备典型特征和细胞表型的DC. 2.祛毒汤含药血清诱导的 DC 激活的 T 淋巴细胞能够特异性杀伤 K562 肿瘤细胞。目的：本实验以体外培养的方法，将达到完全缓解标准的急性髓细胞白血病患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC）与祛毒汤含药血清共同培养，观察含药血清对此来源的树突状细胞（DC）分化成熟的影响。用此法诱导分化的树突状细胞（DC）与纯化的正常人和缓解期患者外周血 T 细胞共同培养，得到激发 T 细胞，用激发的 T 细胞与白血病细胞株（K562）共同培育，以

14、 MTT 法测定该 T 细胞对 K562 细胞株的杀伤活性，探讨祛毒汤对急性髓细胞白血病完全缓解期患者 DC 的免疫功能的影响。 方法： 第一、应用绵羊红细胞玫瑰花结程序从 ANLLCR 患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC） ，用含 10%FBS 的 RPMI1640 培养液调整 TDBMNC 细胞浓度后加入24 孔板中培养，培养 9d，隔日换液 1 次，以不同浓度中药含药血清、中药含药血清联合细胞因子（GMCSF、IL4、TNF） 、细胞因子、空白血清组分别培养。 第二、在培养过程中观察细胞的形态，并拍照。 第三、用 FITC 标记的 CD1a、HLADR 和 CD8

15、6 抗体标记各组细胞，用流式细胞仪检测各组的DC 表面标志 CD1a、HLADR 和 CD86 分子的表达率。 第四、分别收集纯化的同种异体 T 细胞、ANLLCR 患者自体 T 细胞，与 AMLCR 患者 TDMNC 来源的DC 以 10：1 比例加入 24 孔培养板培养 5d，培养基中加入 100U/ml 的 IL2 进行同种异体 T 细胞及自体 T 细胞的激发。 第五、激发后的各组 T 细胞与K562 细胞分别以 10：1、20：1、40：1 效：靶比例培养 24h，MTT 法检测不同条件培养的 DC 诱导 T 细胞的杀伤效应。 结果： 1.用倒置显微镜观察发现祛毒汤含药血清组、含药血清

16、联合细胞因子组、细胞因子组 DC 的形态无差别。 2.祛毒汤各剂量组，细胞因子联合祛毒汤各剂量组，细胞因子组与空白血清组诱导 DC 的 CD1a、CD86、HLADR 的表达比较有显著差异（Plt;0.01） ，均优于空白血清组；祛毒汤低剂量组、祛毒汤中剂量组与细胞因子组诱导 DC的 CD1a 表达有差异（Plt;0.05） ，祛毒汤高剂量组、细胞因子联合祛毒汤低、中剂量组与细胞因子组 CD1a 的表达有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组 CD1a 有差异（Plt;0.05） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与细胞因子联合祛毒汤低、中剂量组诱导 DC 的CD

17、1a 有差异（Plt;0.05） 。祛毒汤高组与细胞因子组诱导 DC 的 CD86 表达差异（Plt;0.05） ；祛毒汤高剂量组与祛毒汤低剂量组诱导 DC 的 CD86的表达有差异（Plt;0.05） 。祛毒汤低、中、高剂量组和细胞因子联合祛毒汤低、中组诱导 DC 的 HLADR 的表达与细胞因子组诱导 DC 的 HLADR 的表达有显著差异（Plt;0.01） ，细胞因子联合祛毒汤中剂量组与祛毒汤中剂量组有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组有显著差异（Plt;0.01） 。 3.各组激活 T 细胞对 K562 细胞均有杀伤作用，各组别与空白血清（KB

18、）组杀伤率均有显著差异（Plt;0.01） ，各组别均优于空白血清组。各组内比较：正常人 T 细胞祛毒汤中剂量组 40：1与 10：1 效靶比杀伤率有显著差异（Plt;0.01） ，余各组无差异，正常人T 细胞祛毒汤中剂量组 20：1 与 10：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ；正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 10：1 与 40：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ，正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 20：1 与40：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ，余各组之间效靶比无差异。患者 T 细胞祛毒汤中低剂量组效靶比 40：1 与 10：1 有差异（Plt;0.0

19、5） ，余各组效靶比之间无差异（Pgt;0.05） 。 结论： 1.急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞经祛毒汤含药血清诱导培养可获得具备典型特征和细胞表型的DC. 2.祛毒汤含药血清诱导的 DC 激活的 T 淋巴细胞能够特异性杀伤 K562 肿瘤细胞。目的：本实验以体外培养的方法，将达到完全缓解标准的急性髓细胞白血病患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC）与祛毒汤含药血清共同培养，观察含药血清对此来源的树突状细胞（DC）分化成熟的影响。用此法诱导分化的树突状细胞（DC）与纯化的正常人和缓解期患者外周血 T 细胞共同培养，得到激发 T 细胞，用激发的 T 细胞与白血病细胞株（

20、K562）共同培育，以 MTT 法测定该 T 细胞对 K562 细胞株的杀伤活性，探讨祛毒汤对急性髓细胞白血病完全缓解期患者 DC 的免疫功能的影响。 方法： 第一、应用绵羊红细胞玫瑰花结程序从 ANLLCR 患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC） ，用含 10%FBS 的 RPMI1640 培养液调整 TDBMNC 细胞浓度后加入24 孔板中培养，培养 9d，隔日换液 1 次，以不同浓度中药含药血清、中药含药血清联合细胞因子（GMCSF、IL4、TNF） 、细胞因子、空白血清组分别培养。 第二、在培养过程中观察细胞的形态，并拍照。 第三、用 FITC 标记的 CD1a、

21、HLADR 和 CD86 抗体标记各组细胞，用流式细胞仪检测各组的DC 表面标志 CD1a、HLADR 和 CD86 分子的表达率。 第四、分别收集纯化的同种异体 T 细胞、ANLLCR 患者自体 T 细胞，与 AMLCR 患者 TDMNC 来源的DC 以 10：1 比例加入 24 孔培养板培养 5d，培养基中加入 100U/ml 的 IL2 进行同种异体 T 细胞及自体 T 细胞的激发。 第五、激发后的各组 T 细胞与K562 细胞分别以 10：1、20：1、40：1 效：靶比例培养 24h，MTT 法检测不同条件培养的 DC 诱导 T 细胞的杀伤效应。 结果： 1.用倒置显微镜观察发现祛毒

22、汤含药血清组、含药血清联合细胞因子组、细胞因子组 DC 的形态无差别。 2.祛毒汤各剂量组，细胞因子联合祛毒汤各剂量组，细胞因子组与空白血清组诱导 DC 的 CD1a、CD86、HLADR 的表达比较有显著差异（Plt;0.01） ，均优于空白血清组；祛毒汤低剂量组、祛毒汤中剂量组与细胞因子组诱导 DC的 CD1a 表达有差异（Plt;0.05） ，祛毒汤高剂量组、细胞因子联合祛毒汤低、中剂量组与细胞因子组 CD1a 的表达有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组 CD1a 有差异（Plt;0.05） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与细胞因子联合祛毒汤低、中剂

23、量组诱导 DC 的CD1a 有差异（Plt;0.05） 。祛毒汤高组与细胞因子组诱导 DC 的 CD86 表达差异（Plt;0.05） ；祛毒汤高剂量组与祛毒汤低剂量组诱导 DC 的 CD86的表达有差异（Plt;0.05） 。祛毒汤低、中、高剂量组和细胞因子联合祛毒汤低、中组诱导 DC 的 HLADR 的表达与细胞因子组诱导 DC 的 HLADR 的表达有显著差异（Plt;0.01） ，细胞因子联合祛毒汤中剂量组与祛毒汤中剂量组有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组有显著差异（Plt;0.01） 。 3.各组激活 T 细胞对 K562 细胞均有杀伤作用，

24、各组别与空白血清（KB）组杀伤率均有显著差异（Plt;0.01） ，各组别均优于空白血清组。各组内比较：正常人 T 细胞祛毒汤中剂量组 40：1与 10：1 效靶比杀伤率有显著差异（Plt;0.01） ，余各组无差异，正常人T 细胞祛毒汤中剂量组 20：1 与 10：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ；正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 10：1 与 40：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ，正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 20：1 与40：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ，余各组之间效靶比无差异。患者 T 细胞祛毒汤中低剂量组效靶比 40：1 与 10：1

25、有差异（Plt;0.05） ，余各组效靶比之间无差异（Pgt;0.05） 。 结论： 1.急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞经祛毒汤含药血清诱导培养可获得具备典型特征和细胞表型的DC. 2.祛毒汤含药血清诱导的 DC 激活的 T 淋巴细胞能够特异性杀伤 K562 肿瘤细胞。目的：本实验以体外培养的方法，将达到完全缓解标准的急性髓细胞白血病患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC）与祛毒汤含药血清共同培养，观察含药血清对此来源的树突状细胞（DC）分化成熟的影响。用此法诱导分化的树突状细胞（DC）与纯化的正常人和缓解期患者外周血 T 细胞共同培养，得到激发 T 细胞，用激发的 T

26、 细胞与白血病细胞株（K562）共同培育，以 MTT 法测定该 T 细胞对 K562 细胞株的杀伤活性，探讨祛毒汤对急性髓细胞白血病完全缓解期患者 DC 的免疫功能的影响。 方法： 第一、应用绵羊红细胞玫瑰花结程序从 ANLLCR 患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC） ，用含 10%FBS 的 RPMI1640 培养液调整 TDBMNC 细胞浓度后加入24 孔板中培养，培养 9d，隔日换液 1 次，以不同浓度中药含药血清、中药含药血清联合细胞因子（GMCSF、IL4、TNF） 、细胞因子、空白血清组分别培养。 第二、在培养过程中观察细胞的形态，并拍照。 第三、用 FIT

27、C 标记的 CD1a、HLADR 和 CD86 抗体标记各组细胞，用流式细胞仪检测各组的DC 表面标志 CD1a、HLADR 和 CD86 分子的表达率。 第四、分别收集纯化的同种异体 T 细胞、ANLLCR 患者自体 T 细胞，与 AMLCR 患者 TDMNC 来源的DC 以 10：1 比例加入 24 孔培养板培养 5d，培养基中加入 100U/ml 的 IL2 进行同种异体 T 细胞及自体 T 细胞的激发。 第五、激发后的各组 T 细胞与K562 细胞分别以 10：1、20：1、40：1 效：靶比例培养 24h，MTT 法检测不同条件培养的 DC 诱导 T 细胞的杀伤效应。 结果： 1.用

28、倒置显微镜观察发现祛毒汤含药血清组、含药血清联合细胞因子组、细胞因子组 DC 的形态无差别。 2.祛毒汤各剂量组，细胞因子联合祛毒汤各剂量组，细胞因子组与空白血清组诱导 DC 的 CD1a、CD86、HLADR 的表达比较有显著差异（Plt;0.01） ，均优于空白血清组；祛毒汤低剂量组、祛毒汤中剂量组与细胞因子组诱导 DC的 CD1a 表达有差异（Plt;0.05） ，祛毒汤高剂量组、细胞因子联合祛毒汤低、中剂量组与细胞因子组 CD1a 的表达有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组 CD1a 有差异（Plt;0.05） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与细胞

29、因子联合祛毒汤低、中剂量组诱导 DC 的CD1a 有差异（Plt;0.05） 。祛毒汤高组与细胞因子组诱导 DC 的 CD86 表达差异（Plt;0.05） ；祛毒汤高剂量组与祛毒汤低剂量组诱导 DC 的 CD86的表达有差异（Plt;0.05） 。祛毒汤低、中、高剂量组和细胞因子联合祛毒汤低、中组诱导 DC 的 HLADR 的表达与细胞因子组诱导 DC 的 HLADR 的表达有显著差异（Plt;0.01） ，细胞因子联合祛毒汤中剂量组与祛毒汤中剂量组有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组有显著差异（Plt;0.01） 。 3.各组激活 T 细胞对 K56

30、2 细胞均有杀伤作用，各组别与空白血清（KB）组杀伤率均有显著差异（Plt;0.01） ，各组别均优于空白血清组。各组内比较：正常人 T 细胞祛毒汤中剂量组 40：1与 10：1 效靶比杀伤率有显著差异（Plt;0.01） ，余各组无差异，正常人T 细胞祛毒汤中剂量组 20：1 与 10：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ；正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 10：1 与 40：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ，正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 20：1 与40：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ，余各组之间效靶比无差异。患者 T 细胞祛毒汤中低剂量组效靶比 4

31、0：1 与 10：1 有差异（Plt;0.05） ，余各组效靶比之间无差异（Pgt;0.05） 。 结论： 1.急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞经祛毒汤含药血清诱导培养可获得具备典型特征和细胞表型的DC. 2.祛毒汤含药血清诱导的 DC 激活的 T 淋巴细胞能够特异性杀伤 K562 肿瘤细胞。目的：本实验以体外培养的方法，将达到完全缓解标准的急性髓细胞白血病患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC）与祛毒汤含药血清共同培养，观察含药血清对此来源的树突状细胞（DC）分化成熟的影响。用此法诱导分化的树突状细胞（DC）与纯化的正常人和缓解期患者外周血 T 细胞共同培养，得到激发

32、T 细胞，用激发的 T 细胞与白血病细胞株（K562）共同培育，以 MTT 法测定该 T 细胞对 K562 细胞株的杀伤活性，探讨祛毒汤对急性髓细胞白血病完全缓解期患者 DC 的免疫功能的影响。 方法： 第一、应用绵羊红细胞玫瑰花结程序从 ANLLCR 患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC） ，用含 10%FBS 的 RPMI1640 培养液调整 TDBMNC 细胞浓度后加入24 孔板中培养，培养 9d，隔日换液 1 次，以不同浓度中药含药血清、中药含药血清联合细胞因子（GMCSF、IL4、TNF） 、细胞因子、空白血清组分别培养。 第二、在培养过程中观察细胞的形态，并拍

33、照。 第三、用 FITC 标记的 CD1a、HLADR 和 CD86 抗体标记各组细胞，用流式细胞仪检测各组的DC 表面标志 CD1a、HLADR 和 CD86 分子的表达率。 第四、分别收集纯化的同种异体 T 细胞、ANLLCR 患者自体 T 细胞，与 AMLCR 患者 TDMNC 来源的DC 以 10：1 比例加入 24 孔培养板培养 5d，培养基中加入 100U/ml 的 IL2 进行同种异体 T 细胞及自体 T 细胞的激发。 第五、激发后的各组 T 细胞与K562 细胞分别以 10：1、20：1、40：1 效：靶比例培养 24h，MTT 法检测不同条件培养的 DC 诱导 T 细胞的杀伤

34、效应。 结果： 1.用倒置显微镜观察发现祛毒汤含药血清组、含药血清联合细胞因子组、细胞因子组 DC 的形态无差别。 2.祛毒汤各剂量组，细胞因子联合祛毒汤各剂量组，细胞因子组与空白血清组诱导 DC 的 CD1a、CD86、HLADR 的表达比较有显著差异（Plt;0.01） ，均优于空白血清组；祛毒汤低剂量组、祛毒汤中剂量组与细胞因子组诱导 DC的 CD1a 表达有差异（Plt;0.05） ，祛毒汤高剂量组、细胞因子联合祛毒汤低、中剂量组与细胞因子组 CD1a 的表达有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组 CD1a 有差异（Plt;0.05） ；细胞因子联

35、合祛毒汤高剂量组与细胞因子联合祛毒汤低、中剂量组诱导 DC 的CD1a 有差异（Plt;0.05） 。祛毒汤高组与细胞因子组诱导 DC 的 CD86 表达差异（Plt;0.05） ；祛毒汤高剂量组与祛毒汤低剂量组诱导 DC 的 CD86的表达有差异（Plt;0.05） 。祛毒汤低、中、高剂量组和细胞因子联合祛毒汤低、中组诱导 DC 的 HLADR 的表达与细胞因子组诱导 DC 的 HLADR 的表达有显著差异（Plt;0.01） ，细胞因子联合祛毒汤中剂量组与祛毒汤中剂量组有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组有显著差异（Plt;0.01） 。 3.各组激

36、活 T 细胞对 K562 细胞均有杀伤作用，各组别与空白血清（KB）组杀伤率均有显著差异（Plt;0.01） ，各组别均优于空白血清组。各组内比较：正常人 T 细胞祛毒汤中剂量组 40：1与 10：1 效靶比杀伤率有显著差异（Plt;0.01） ，余各组无差异，正常人T 细胞祛毒汤中剂量组 20：1 与 10：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ；正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 10：1 与 40：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ，正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 20：1 与40：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ，余各组之间效靶比无差异。患者 T 细胞祛毒

37、汤中低剂量组效靶比 40：1 与 10：1 有差异（Plt;0.05） ，余各组效靶比之间无差异（Pgt;0.05） 。 结论： 1.急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞经祛毒汤含药血清诱导培养可获得具备典型特征和细胞表型的DC. 2.祛毒汤含药血清诱导的 DC 激活的 T 淋巴细胞能够特异性杀伤 K562 肿瘤细胞。目的：本实验以体外培养的方法，将达到完全缓解标准的急性髓细胞白血病患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC）与祛毒汤含药血清共同培养，观察含药血清对此来源的树突状细胞（DC）分化成熟的影响。用此法诱导分化的树突状细胞（DC）与纯化的正常人和缓解期患者外周血 T 细

38、胞共同培养，得到激发 T 细胞，用激发的 T 细胞与白血病细胞株（K562）共同培育，以 MTT 法测定该 T 细胞对 K562 细胞株的杀伤活性，探讨祛毒汤对急性髓细胞白血病完全缓解期患者 DC 的免疫功能的影响。 方法： 第一、应用绵羊红细胞玫瑰花结程序从 ANLLCR 患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC） ，用含 10%FBS 的 RPMI1640 培养液调整 TDBMNC 细胞浓度后加入24 孔板中培养，培养 9d，隔日换液 1 次，以不同浓度中药含药血清、中药含药血清联合细胞因子（GMCSF、IL4、TNF） 、细胞因子、空白血清组分别培养。 第二、在培养过程

39、中观察细胞的形态，并拍照。 第三、用 FITC 标记的 CD1a、HLADR 和 CD86 抗体标记各组细胞，用流式细胞仪检测各组的DC 表面标志 CD1a、HLADR 和 CD86 分子的表达率。 第四、分别收集纯化的同种异体 T 细胞、ANLLCR 患者自体 T 细胞，与 AMLCR 患者 TDMNC 来源的DC 以 10：1 比例加入 24 孔培养板培养 5d，培养基中加入 100U/ml 的 IL2 进行同种异体 T 细胞及自体 T 细胞的激发。 第五、激发后的各组 T 细胞与K562 细胞分别以 10：1、20：1、40：1 效：靶比例培养 24h，MTT 法检测不同条件培养的 DC

40、 诱导 T 细胞的杀伤效应。 结果： 1.用倒置显微镜观察发现祛毒汤含药血清组、含药血清联合细胞因子组、细胞因子组 DC 的形态无差别。 2.祛毒汤各剂量组，细胞因子联合祛毒汤各剂量组，细胞因子组与空白血清组诱导 DC 的 CD1a、CD86、HLADR 的表达比较有显著差异（Plt;0.01） ，均优于空白血清组；祛毒汤低剂量组、祛毒汤中剂量组与细胞因子组诱导 DC的 CD1a 表达有差异（Plt;0.05） ，祛毒汤高剂量组、细胞因子联合祛毒汤低、中剂量组与细胞因子组 CD1a 的表达有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组 CD1a 有差异（Plt;0

41、.05） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与细胞因子联合祛毒汤低、中剂量组诱导 DC 的CD1a 有差异（Plt;0.05） 。祛毒汤高组与细胞因子组诱导 DC 的 CD86 表达差异（Plt;0.05） ；祛毒汤高剂量组与祛毒汤低剂量组诱导 DC 的 CD86的表达有差异（Plt;0.05） 。祛毒汤低、中、高剂量组和细胞因子联合祛毒汤低、中组诱导 DC 的 HLADR 的表达与细胞因子组诱导 DC 的 HLADR 的表达有显著差异（Plt;0.01） ，细胞因子联合祛毒汤中剂量组与祛毒汤中剂量组有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组有显著差异（Plt;0.

42、01） 。 3.各组激活 T 细胞对 K562 细胞均有杀伤作用，各组别与空白血清（KB）组杀伤率均有显著差异（Plt;0.01） ，各组别均优于空白血清组。各组内比较：正常人 T 细胞祛毒汤中剂量组 40：1与 10：1 效靶比杀伤率有显著差异（Plt;0.01） ，余各组无差异，正常人T 细胞祛毒汤中剂量组 20：1 与 10：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ；正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 10：1 与 40：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ，正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 20：1 与40：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ，余各组之间效靶比无差

43、异。患者 T 细胞祛毒汤中低剂量组效靶比 40：1 与 10：1 有差异（Plt;0.05） ，余各组效靶比之间无差异（Pgt;0.05） 。 结论： 1.急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞经祛毒汤含药血清诱导培养可获得具备典型特征和细胞表型的DC. 2.祛毒汤含药血清诱导的 DC 激活的 T 淋巴细胞能够特异性杀伤 K562 肿瘤细胞。目的：本实验以体外培养的方法，将达到完全缓解标准的急性髓细胞白血病患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC）与祛毒汤含药血清共同培养，观察含药血清对此来源的树突状细胞（DC）分化成熟的影响。用此法诱导分化的树突状细胞（DC）与纯化的正常人和缓

44、解期患者外周血 T 细胞共同培养，得到激发 T 细胞，用激发的 T 细胞与白血病细胞株（K562）共同培育，以 MTT 法测定该 T 细胞对 K562 细胞株的杀伤活性，探讨祛毒汤对急性髓细胞白血病完全缓解期患者 DC 的免疫功能的影响。 方法： 第一、应用绵羊红细胞玫瑰花结程序从 ANLLCR 患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC） ，用含 10%FBS 的 RPMI1640 培养液调整 TDBMNC 细胞浓度后加入24 孔板中培养，培养 9d，隔日换液 1 次，以不同浓度中药含药血清、中药含药血清联合细胞因子（GMCSF、IL4、TNF） 、细胞因子、空白血清组分别培

45、养。 第二、在培养过程中观察细胞的形态，并拍照。 第三、用 FITC 标记的 CD1a、HLADR 和 CD86 抗体标记各组细胞，用流式细胞仪检测各组的DC 表面标志 CD1a、HLADR 和 CD86 分子的表达率。 第四、分别收集纯化的同种异体 T 细胞、ANLLCR 患者自体 T 细胞，与 AMLCR 患者 TDMNC 来源的DC 以 10：1 比例加入 24 孔培养板培养 5d，培养基中加入 100U/ml 的 IL2 进行同种异体 T 细胞及自体 T 细胞的激发。 第五、激发后的各组 T 细胞与K562 细胞分别以 10：1、20：1、40：1 效：靶比例培养 24h，MTT 法检

46、测不同条件培养的 DC 诱导 T 细胞的杀伤效应。 结果： 1.用倒置显微镜观察发现祛毒汤含药血清组、含药血清联合细胞因子组、细胞因子组 DC 的形态无差别。 2.祛毒汤各剂量组，细胞因子联合祛毒汤各剂量组，细胞因子组与空白血清组诱导 DC 的 CD1a、CD86、HLADR 的表达比较有显著差异（Plt;0.01） ，均优于空白血清组；祛毒汤低剂量组、祛毒汤中剂量组与细胞因子组诱导 DC的 CD1a 表达有差异（Plt;0.05） ，祛毒汤高剂量组、细胞因子联合祛毒汤低、中剂量组与细胞因子组 CD1a 的表达有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组 CD1

47、a 有差异（Plt;0.05） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与细胞因子联合祛毒汤低、中剂量组诱导 DC 的CD1a 有差异（Plt;0.05） 。祛毒汤高组与细胞因子组诱导 DC 的 CD86 表达差异（Plt;0.05） ；祛毒汤高剂量组与祛毒汤低剂量组诱导 DC 的 CD86的表达有差异（Plt;0.05） 。祛毒汤低、中、高剂量组和细胞因子联合祛毒汤低、中组诱导 DC 的 HLADR 的表达与细胞因子组诱导 DC 的 HLADR 的表达有显著差异（Plt;0.01） ，细胞因子联合祛毒汤中剂量组与祛毒汤中剂量组有显著差异（Plt;0.01） ；细胞因子联合祛毒汤高剂量组与祛毒汤高剂量组有

48、显著差异（Plt;0.01） 。 3.各组激活 T 细胞对 K562 细胞均有杀伤作用，各组别与空白血清（KB）组杀伤率均有显著差异（Plt;0.01） ，各组别均优于空白血清组。各组内比较：正常人 T 细胞祛毒汤中剂量组 40：1与 10：1 效靶比杀伤率有显著差异（Plt;0.01） ，余各组无差异，正常人T 细胞祛毒汤中剂量组 20：1 与 10：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ；正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 10：1 与 40：1 效靶比有差异（Plt;0.05） ，正常人 T 细胞祛毒汤中剂量联合细胞因子组 20：1 与40：1 效靶比有差异（Plt;0.05）

49、，余各组之间效靶比无差异。患者 T 细胞祛毒汤中低剂量组效靶比 40：1 与 10：1 有差异（Plt;0.05） ，余各组效靶比之间无差异（Pgt;0.05） 。 结论： 1.急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞经祛毒汤含药血清诱导培养可获得具备典型特征和细胞表型的DC. 2.祛毒汤含药血清诱导的 DC 激活的 T 淋巴细胞能够特异性杀伤 K562 肿瘤细胞。目的：本实验以体外培养的方法，将达到完全缓解标准的急性髓细胞白血病患者骨髓中分离出去 T 细胞的骨髓单个核细胞（TDBMNC）与祛毒汤含药血清共同培养，观察含药血清对此来源的树突状细胞（DC）分化成熟的影响。用此法诱导分化的树突状细胞（DC）与纯化的正常人和缓