1、生物化学与分子生物学专业毕业论文 精品论文 不同 N/P条件下铜绿微囊藻 DNA含量分析、差异蛋白组研究及 PstB的表达分析关键词：铜绿微囊藻 差异蛋白组学 氮磷比例 磷吸收代谢摘要：铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)是富营养化湖泊和水库中形成“水华”的主要藻种。利用分子生物学技术和蛋白质组学，研究常见赤潮、水华藻种在特定环境中的蛋白质组差异，从中寻找出有价值的差异蛋白质分子，这在理论和实践上对水华的防治都具有重要意义。 在水华蓝藻的形成因素中，氮磷比例是一个很大的影响因素，其最适 N/P为 16:1。我们设想，该 N/P值是与细胞的生长分裂相关系的。磷在细胞中的作用
2、是参与一些代谢途径的磷酸化反应，更重要的可能是与细胞 DNA、RNA 的合成有关；氮则是参与了蛋白质的合成，氮磷之间合适的比例，就代表了细胞生长与分裂之间量的关系。为了验证此设想，通过流式细胞术 PI染色法来检测微囊藻细胞的 DNA含量，设置不同的N/P比值，缺 NP、1:1、16:1、160:1 四组，结果表明在 N/P为 16:1时，藻细胞的 DNA含量较其他对照组高，间接地反映了藻细胞的数目，即当 N/P为 16:1藻细胞处于分裂的最佳水平。 微囊藻有较高的磷吸收最大摄取速率，比其它藻类具有更强的储存磷的能力，可以在细胞中储存足够的磷。因此，利用蛋白质组学，分析铜绿微囊藻在不同磷浓度培养
3、水平下的蛋白表达水平，并进行质谱分析，鉴定出关键的差异蛋白，分析这些关键蛋白的作用，对揭示铜绿微囊藻特殊的磷代谢机制有一定的帮助。试验中设置了三个不同磷浓度的诱导水平：即 0.005mg/L，0.05mg/L，0.5mg/L，诱导 72h后进行差异蛋白组分析。结果我们获得了二十多个差异点，选取其中可靠度较好的十一个点进行质谱分析，通过数据库比对，分析了一些与磷代谢相关的蛋白：、硫胺素焦磷酸化酶、磷酸核酮糖激酶、磷酸甘油酸激酶、琥珀酰 CoA合成酶微囊藻毒素相关蛋白 MrpA等，均与磷代谢、缺磷逆境或者核酸代谢相关。 为研究蛋白 PstB在铜绿微囊藻中与磷吸收代谢的关系，成功克隆表达了 pstB
4、，纯化免疫小鼠，制备多克隆抗体用于检测 PstB在藻细胞的表达变化。结果表明，在缺磷条件下，PstB 表达量显著提高，而随着磷浓度的提高，PstB 表达量反而降低至本底水平。PstB 在藻细胞内受到缺磷条件的诱导，能保证藻细胞最大限度地吸收外界磷源。正文内容铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)是富营养化湖泊和水库中形成“水华”的主要藻种。利用分子生物学技术和蛋白质组学，研究常见赤潮、水华藻种在特定环境中的蛋白质组差异，从中寻找出有价值的差异蛋白质分子，这在理论和实践上对水华的防治都具有重要意义。 在水华蓝藻的形成因素中，氮磷比例是一个很大的影响因素，其最适 N/P为 16
5、:1。我们设想，该 N/P值是与细胞的生长分裂相关系的。磷在细胞中的作用是参与一些代谢途径的磷酸化反应，更重要的可能是与细胞 DNA、RNA 的合成有关；氮则是参与了蛋白质的合成，氮磷之间合适的比例，就代表了细胞生长与分裂之间量的关系。为了验证此设想，通过流式细胞术 PI染色法来检测微囊藻细胞的 DNA含量，设置不同的 N/P比值，缺 NP、1:1、16:1、160:1 四组，结果表明在 N/P为 16:1时，藻细胞的DNA含量较其他对照组高，间接地反映了藻细胞的数目，即当 N/P为 16:1藻细胞处于分裂的最佳水平。 微囊藻有较高的磷吸收最大摄取速率，比其它藻类具有更强的储存磷的能力，可以在
6、细胞中储存足够的磷。因此，利用蛋白质组学，分析铜绿微囊藻在不同磷浓度培养水平下的蛋白表达水平，并进行质谱分析，鉴定出关键的差异蛋白，分析这些关键蛋白的作用，对揭示铜绿微囊藻特殊的磷代谢机制有一定的帮助。试验中设置了三个不同磷浓度的诱导水平：即0.005mg/L，0.05mg/L，0.5mg/L，诱导 72h后进行差异蛋白组分析。结果我们获得了二十多个差异点，选取其中可靠度较好的十一个点进行质谱分析，通过数据库比对，分析了一些与磷代谢相关的蛋白：、硫胺素焦磷酸化酶、磷酸核酮糖激酶、磷酸甘油酸激酶、琥珀酰 CoA合成酶微囊藻毒素相关蛋白 MrpA等，均与磷代谢、缺磷逆境或者核酸代谢相关。 为研究蛋
7、白 PstB在铜绿微囊藻中与磷吸收代谢的关系，成功克隆表达了 pstB，纯化免疫小鼠，制备多克隆抗体用于检测 PstB在藻细胞的表达变化。结果表明，在缺磷条件下，PstB 表达量显著提高，而随着磷浓度的提高，PstB 表达量反而降低至本底水平。PstB 在藻细胞内受到缺磷条件的诱导，能保证藻细胞最大限度地吸收外界磷源。铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)是富营养化湖泊和水库中形成“水华”的主要藻种。利用分子生物学技术和蛋白质组学，研究常见赤潮、水华藻种在特定环境中的蛋白质组差异，从中寻找出有价值的差异蛋白质分子，这在理论和实践上对水华的防治都具有重要意义。 在水华蓝藻的形
8、成因素中，氮磷比例是一个很大的影响因素，其最适 N/P为 16:1。我们设想，该 N/P值是与细胞的生长分裂相关系的。磷在细胞中的作用是参与一些代谢途径的磷酸化反应，更重要的可能是与细胞 DNA、RNA 的合成有关；氮则是参与了蛋白质的合成，氮磷之间合适的比例，就代表了细胞生长与分裂之间量的关系。为了验证此设想，通过流式细胞术 PI染色法来检测微囊藻细胞的 DNA含量，设置不同的 N/P比值，缺 NP、1:1、16:1、160:1 四组，结果表明在 N/P为 16:1时，藻细胞的 DNA含量较其他对照组高，间接地反映了藻细胞的数目，即当 N/P为 16:1藻细胞处于分裂的最佳水平。 微囊藻有较
9、高的磷吸收最大摄取速率，比其它藻类具有更强的储存磷的能力，可以在细胞中储存足够的磷。因此，利用蛋白质组学，分析铜绿微囊藻在不同磷浓度培养水平下的蛋白表达水平，并进行质谱分析，鉴定出关键的差异蛋白，分析这些关键蛋白的作用，对揭示铜绿微囊藻特殊的磷代谢机制有一定的帮助。试验中设置了三个不同磷浓度的诱导水平：即0.005mg/L，0.05mg/L，0.5mg/L，诱导 72h后进行差异蛋白组分析。结果我们获得了二十多个差异点，选取其中可靠度较好的十一个点进行质谱分析，通过数据库比对，分析了一些与磷代谢相关的蛋白：、硫胺素焦磷酸化酶、磷酸核酮糖激酶、磷酸甘油酸激酶、琥珀酰 CoA合成酶微囊藻毒素相关蛋
10、白 MrpA等，均与磷代谢、缺磷逆境或者核酸代谢相关。 为研究蛋白 PstB在铜绿微囊藻中与磷吸收代谢的关系，成功克隆表达了 pstB，纯化免疫小鼠，制备多克隆抗体用于检测 PstB在藻细胞的表达变化。结果表明，在缺磷条件下，PstB 表达量显著提高，而随着磷浓度的提高，PstB 表达量反而降低至本底水平。PstB 在藻细胞内受到缺磷条件的诱导，能保证藻细胞最大限度地吸收外界磷源。铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)是富营养化湖泊和水库中形成“水华”的主要藻种。利用分子生物学技术和蛋白质组学，研究常见赤潮、水华藻种在特定环境中的蛋白质组差异，从中寻找出有价值的差异蛋白质分
11、子，这在理论和实践上对水华的防治都具有重要意义。 在水华蓝藻的形成因素中，氮磷比例是一个很大的影响因素，其最适 N/P为 16:1。我们设想，该 N/P值是与细胞的生长分裂相关系的。磷在细胞中的作用是参与一些代谢途径的磷酸化反应，更重要的可能是与细胞 DNA、RNA 的合成有关；氮则是参与了蛋白质的合成，氮磷之间合适的比例，就代表了细胞生长与分裂之间量的关系。为了验证此设想，通过流式细胞术 PI染色法来检测微囊藻细胞的 DNA含量，设置不同的 N/P比值，缺 NP、1:1、16:1、160:1 四组，结果表明在 N/P为 16:1时，藻细胞的 DNA含量较其他对照组高，间接地反映了藻细胞的数目
12、，即当 N/P为 16:1藻细胞处于分裂的最佳水平。 微囊藻有较高的磷吸收最大摄取速率，比其它藻类具有更强的储存磷的能力，可以在细胞中储存足够的磷。因此，利用蛋白质组学，分析铜绿微囊藻在不同磷浓度培养水平下的蛋白表达水平，并进行质谱分析，鉴定出关键的差异蛋白，分析这些关键蛋白的作用，对揭示铜绿微囊藻特殊的磷代谢机制有一定的帮助。试验中设置了三个不同磷浓度的诱导水平：即0.005mg/L，0.05mg/L，0.5mg/L，诱导 72h后进行差异蛋白组分析。结果我们获得了二十多个差异点，选取其中可靠度较好的十一个点进行质谱分析，通过数据库比对，分析了一些与磷代谢相关的蛋白：、硫胺素焦磷酸化酶、磷酸
13、核酮糖激酶、磷酸甘油酸激酶、琥珀酰 CoA合成酶微囊藻毒素相关蛋白 MrpA等，均与磷代谢、缺磷逆境或者核酸代谢相关。 为研究蛋白 PstB在铜绿微囊藻中与磷吸收代谢的关系，成功克隆表达了 pstB，纯化免疫小鼠，制备多克隆抗体用于检测 PstB在藻细胞的表达变化。结果表明，在缺磷条件下，PstB 表达量显著提高，而随着磷浓度的提高，PstB 表达量反而降低至本底水平。PstB 在藻细胞内受到缺磷条件的诱导，能保证藻细胞最大限度地吸收外界磷源。铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)是富营养化湖泊和水库中形成“水华”的主要藻种。利用分子生物学技术和蛋白质组学，研究常见赤潮、水
14、华藻种在特定环境中的蛋白质组差异，从中寻找出有价值的差异蛋白质分子，这在理论和实践上对水华的防治都具有重要意义。 在水华蓝藻的形成因素中，氮磷比例是一个很大的影响因素，其最适 N/P为 16:1。我们设想，该 N/P值是与细胞的生长分裂相关系的。磷在细胞中的作用是参与一些代谢途径的磷酸化反应，更重要的可能是与细胞 DNA、RNA 的合成有关；氮则是参与了蛋白质的合成，氮磷之间合适的比例，就代表了细胞生长与分裂之间量的关系。为了验证此设想，通过流式细胞术 PI染色法来检测微囊藻细胞的 DNA含量，设置不同的 N/P比值，缺 NP、1:1、16:1、160:1 四组，结果表明在 N/P为 16:1
15、时，藻细胞的 DNA含量较其他对照组高，间接地反映了藻细胞的数目，即当 N/P为 16:1藻细胞处于分裂的最佳水平。 微囊藻有较高的磷吸收最大摄取速率，比其它藻类具有更强的储存磷的能力，可以在细胞中储存足够的磷。因此，利用蛋白质组学，分析铜绿微囊藻在不同磷浓度培养水平下的蛋白表达水平，并进行质谱分析，鉴定出关键的差异蛋白，分析这些关键蛋白的作用，对揭示铜绿微囊藻特殊的磷代谢机制有一定的帮助。试验中设置了三个不同磷浓度的诱导水平：即0.005mg/L，0.05mg/L，0.5mg/L，诱导 72h后进行差异蛋白组分析。结果我们获得了二十多个差异点，选取其中可靠度较好的十一个点进行质谱分析，通过数
16、据库比对，分析了一些与磷代谢相关的蛋白：、硫胺素焦磷酸化酶、磷酸核酮糖激酶、磷酸甘油酸激酶、琥珀酰 CoA合成酶微囊藻毒素相关蛋白 MrpA等，均与磷代谢、缺磷逆境或者核酸代谢相关。 为研究蛋白 PstB在铜绿微囊藻中与磷吸收代谢的关系，成功克隆表达了 pstB，纯化免疫小鼠，制备多克隆抗体用于检测 PstB在藻细胞的表达变化。结果表明，在缺磷条件下，PstB 表达量显著提高，而随着磷浓度的提高，PstB 表达量反而降低至本底水平。PstB 在藻细胞内受到缺磷条件的诱导，能保证藻细胞最大限度地吸收外界磷源。铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)是富营养化湖泊和水库中形成“水
17、华”的主要藻种。利用分子生物学技术和蛋白质组学，研究常见赤潮、水华藻种在特定环境中的蛋白质组差异，从中寻找出有价值的差异蛋白质分子，这在理论和实践上对水华的防治都具有重要意义。 在水华蓝藻的形成因素中，氮磷比例是一个很大的影响因素，其最适 N/P为 16:1。我们设想，该 N/P值是与细胞的生长分裂相关系的。磷在细胞中的作用是参与一些代谢途径的磷酸化反应，更重要的可能是与细胞 DNA、RNA 的合成有关；氮则是参与了蛋白质的合成，氮磷之间合适的比例，就代表了细胞生长与分裂之间量的关系。为了验证此设想，通过流式细胞术 PI染色法来检测微囊藻细胞的 DNA含量，设置不同的 N/P比值，缺 NP、1
18、:1、16:1、160:1 四组，结果表明在 N/P为 16:1时，藻细胞的 DNA含量较其他对照组高，间接地反映了藻细胞的数目，即当 N/P为 16:1藻细胞处于分裂的最佳水平。 微囊藻有较高的磷吸收最大摄取速率，比其它藻类具有更强的储存磷的能力，可以在细胞中储存足够的磷。因此，利用蛋白质组学，分析铜绿微囊藻在不同磷浓度培养水平下的蛋白表达水平，并进行质谱分析，鉴定出关键的差异蛋白，分析这些关键蛋白的作用，对揭示铜绿微囊藻特殊的磷代谢机制有一定的帮助。试验中设置了三个不同磷浓度的诱导水平：即0.005mg/L，0.05mg/L，0.5mg/L，诱导 72h后进行差异蛋白组分析。结果我们获得了
19、二十多个差异点，选取其中可靠度较好的十一个点进行质谱分析，通过数据库比对，分析了一些与磷代谢相关的蛋白：、硫胺素焦磷酸化酶、磷酸核酮糖激酶、磷酸甘油酸激酶、琥珀酰 CoA合成酶微囊藻毒素相关蛋白 MrpA等，均与磷代谢、缺磷逆境或者核酸代谢相关。 为研究蛋白 PstB在铜绿微囊藻中与磷吸收代谢的关系，成功克隆表达了 pstB，纯化免疫小鼠，制备多克隆抗体用于检测 PstB在藻细胞的表达变化。结果表明，在缺磷条件下，PstB 表达量显著提高，而随着磷浓度的提高，PstB 表达量反而降低至本底水平。PstB 在藻细胞内受到缺磷条件的诱导，能保证藻细胞最大限度地吸收外界磷源。铜绿微囊藻(Microc
20、ystis aeruginosa)是富营养化湖泊和水库中形成“水华”的主要藻种。利用分子生物学技术和蛋白质组学，研究常见赤潮、水华藻种在特定环境中的蛋白质组差异，从中寻找出有价值的差异蛋白质分子，这在理论和实践上对水华的防治都具有重要意义。 在水华蓝藻的形成因素中，氮磷比例是一个很大的影响因素，其最适 N/P为 16:1。我们设想，该 N/P值是与细胞的生长分裂相关系的。磷在细胞中的作用是参与一些代谢途径的磷酸化反应，更重要的可能是与细胞 DNA、RNA 的合成有关；氮则是参与了蛋白质的合成，氮磷之间合适的比例，就代表了细胞生长与分裂之间量的关系。为了验证此设想，通过流式细胞术 PI染色法来检
21、测微囊藻细胞的 DNA含量，设置不同的 N/P比值，缺 NP、1:1、16:1、160:1 四组，结果表明在 N/P为 16:1时，藻细胞的 DNA含量较其他对照组高，间接地反映了藻细胞的数目，即当 N/P为 16:1藻细胞处于分裂的最佳水平。 微囊藻有较高的磷吸收最大摄取速率，比其它藻类具有更强的储存磷的能力，可以在细胞中储存足够的磷。因此，利用蛋白质组学，分析铜绿微囊藻在不同磷浓度培养水平下的蛋白表达水平，并进行质谱分析，鉴定出关键的差异蛋白，分析这些关键蛋白的作用，对揭示铜绿微囊藻特殊的磷代谢机制有一定的帮助。试验中设置了三个不同磷浓度的诱导水平：即0.005mg/L，0.05mg/L，
22、0.5mg/L，诱导 72h后进行差异蛋白组分析。结果我们获得了二十多个差异点，选取其中可靠度较好的十一个点进行质谱分析，通过数据库比对，分析了一些与磷代谢相关的蛋白：、硫胺素焦磷酸化酶、磷酸核酮糖激酶、磷酸甘油酸激酶、琥珀酰 CoA合成酶微囊藻毒素相关蛋白 MrpA等，均与磷代谢、缺磷逆境或者核酸代谢相关。 为研究蛋白 PstB在铜绿微囊藻中与磷吸收代谢的关系，成功克隆表达了 pstB，纯化免疫小鼠，制备多克隆抗体用于检测 PstB在藻细胞的表达变化。结果表明，在缺磷条件下，PstB 表达量显著提高，而随着磷浓度的提高，PstB 表达量反而降低至本底水平。PstB 在藻细胞内受到缺磷条件的诱
23、导，能保证藻细胞最大限度地吸收外界磷源。铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)是富营养化湖泊和水库中形成“水华”的主要藻种。利用分子生物学技术和蛋白质组学，研究常见赤潮、水华藻种在特定环境中的蛋白质组差异，从中寻找出有价值的差异蛋白质分子，这在理论和实践上对水华的防治都具有重要意义。 在水华蓝藻的形成因素中，氮磷比例是一个很大的影响因素，其最适 N/P为 16:1。我们设想，该 N/P值是与细胞的生长分裂相关系的。磷在细胞中的作用是参与一些代谢途径的磷酸化反应，更重要的可能是与细胞 DNA、RNA 的合成有关；氮则是参与了蛋白质的合成，氮磷之间合适的比例，就代表了细胞生长与
24、分裂之间量的关系。为了验证此设想，通过流式细胞术 PI染色法来检测微囊藻细胞的 DNA含量，设置不同的 N/P比值，缺 NP、1:1、16:1、160:1 四组，结果表明在 N/P为 16:1时，藻细胞的 DNA含量较其他对照组高，间接地反映了藻细胞的数目，即当 N/P为 16:1藻细胞处于分裂的最佳水平。 微囊藻有较高的磷吸收最大摄取速率，比其它藻类具有更强的储存磷的能力，可以在细胞中储存足够的磷。因此，利用蛋白质组学，分析铜绿微囊藻在不同磷浓度培养水平下的蛋白表达水平，并进行质谱分析，鉴定出关键的差异蛋白，分析这些关键蛋白的作用，对揭示铜绿微囊藻特殊的磷代谢机制有一定的帮助。试验中设置了三
25、个不同磷浓度的诱导水平：即0.005mg/L，0.05mg/L，0.5mg/L，诱导 72h后进行差异蛋白组分析。结果我们获得了二十多个差异点，选取其中可靠度较好的十一个点进行质谱分析，通过数据库比对，分析了一些与磷代谢相关的蛋白：、硫胺素焦磷酸化酶、磷酸核酮糖激酶、磷酸甘油酸激酶、琥珀酰 CoA合成酶微囊藻毒素相关蛋白 MrpA等，均与磷代谢、缺磷逆境或者核酸代谢相关。 为研究蛋白 PstB在铜绿微囊藻中与磷吸收代谢的关系，成功克隆表达了 pstB，纯化免疫小鼠，制备多克隆抗体用于检测 PstB在藻细胞的表达变化。结果表明，在缺磷条件下，PstB 表达量显著提高，而随着磷浓度的提高，PstB
26、 表达量反而降低至本底水平。PstB 在藻细胞内受到缺磷条件的诱导，能保证藻细胞最大限度地吸收外界磷源。铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)是富营养化湖泊和水库中形成“水华”的主要藻种。利用分子生物学技术和蛋白质组学，研究常见赤潮、水华藻种在特定环境中的蛋白质组差异，从中寻找出有价值的差异蛋白质分子，这在理论和实践上对水华的防治都具有重要意义。 在水华蓝藻的形成因素中，氮磷比例是一个很大的影响因素，其最适 N/P为 16:1。我们设想，该 N/P值是与细胞的生长分裂相关系的。磷在细胞中的作用是参与一些代谢途径的磷酸化反应，更重要的可能是与细胞 DNA、RNA 的合成有关；
27、氮则是参与了蛋白质的合成，氮磷之间合适的比例，就代表了细胞生长与分裂之间量的关系。为了验证此设想，通过流式细胞术 PI染色法来检测微囊藻细胞的 DNA含量，设置不同的 N/P比值，缺 NP、1:1、16:1、160:1 四组，结果表明在 N/P为 16:1时，藻细胞的 DNA含量较其他对照组高，间接地反映了藻细胞的数目，即当 N/P为 16:1藻细胞处于分裂的最佳水平。 微囊藻有较高的磷吸收最大摄取速率，比其它藻类具有更强的储存磷的能力，可以在细胞中储存足够的磷。因此，利用蛋白质组学，分析铜绿微囊藻在不同磷浓度培养水平下的蛋白表达水平，并进行质谱分析，鉴定出关键的差异蛋白，分析这些关键蛋白的作
28、用，对揭示铜绿微囊藻特殊的磷代谢机制有一定的帮助。试验中设置了三个不同磷浓度的诱导水平：即0.005mg/L，0.05mg/L，0.5mg/L，诱导 72h后进行差异蛋白组分析。结果我们获得了二十多个差异点，选取其中可靠度较好的十一个点进行质谱分析，通过数据库比对，分析了一些与磷代谢相关的蛋白：、硫胺素焦磷酸化酶、磷酸核酮糖激酶、磷酸甘油酸激酶、琥珀酰 CoA合成酶微囊藻毒素相关蛋白 MrpA等，均与磷代谢、缺磷逆境或者核酸代谢相关。 为研究蛋白 PstB在铜绿微囊藻中与磷吸收代谢的关系，成功克隆表达了 pstB，纯化免疫小鼠，制备多克隆抗体用于检测 PstB在藻细胞的表达变化。结果表明，在缺
29、磷条件下，PstB 表达量显著提高，而随着磷浓度的提高，PstB 表达量反而降低至本底水平。PstB 在藻细胞内受到缺磷条件的诱导，能保证藻细胞最大限度地吸收外界磷源。铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)是富营养化湖泊和水库中形成“水华”的主要藻种。利用分子生物学技术和蛋白质组学，研究常见赤潮、水华藻种在特定环境中的蛋白质组差异，从中寻找出有价值的差异蛋白质分子，这在理论和实践上对水华的防治都具有重要意义。 在水华蓝藻的形成因素中，氮磷比例是一个很大的影响因素，其最适 N/P为 16:1。我们设想，该 N/P值是与细胞的生长分裂相关系的。磷在细胞中的作用是参与一些代谢途径
30、的磷酸化反应，更重要的可能是与细胞 DNA、RNA 的合成有关；氮则是参与了蛋白质的合成，氮磷之间合适的比例，就代表了细胞生长与分裂之间量的关系。为了验证此设想，通过流式细胞术 PI染色法来检测微囊藻细胞的 DNA含量，设置不同的 N/P比值，缺 NP、1:1、16:1、160:1 四组，结果表明在 N/P为 16:1时，藻细胞的 DNA含量较其他对照组高，间接地反映了藻细胞的数目，即当 N/P为 16:1藻细胞处于分裂的最佳水平。 微囊藻有较高的磷吸收最大摄取速率，比其它藻类具有更强的储存磷的能力，可以在细胞中储存足够的磷。因此，利用蛋白质组学，分析铜绿微囊藻在不同磷浓度培养水平下的蛋白表达
31、水平，并进行质谱分析，鉴定出关键的差异蛋白，分析这些关键蛋白的作用，对揭示铜绿微囊藻特殊的磷代谢机制有一定的帮助。试验中设置了三个不同磷浓度的诱导水平：即0.005mg/L，0.05mg/L，0.5mg/L，诱导 72h后进行差异蛋白组分析。结果我们获得了二十多个差异点，选取其中可靠度较好的十一个点进行质谱分析，通过数据库比对，分析了一些与磷代谢相关的蛋白：、硫胺素焦磷酸化酶、磷酸核酮糖激酶、磷酸甘油酸激酶、琥珀酰 CoA合成酶微囊藻毒素相关蛋白 MrpA等，均与磷代谢、缺磷逆境或者核酸代谢相关。 为研究蛋白 PstB在铜绿微囊藻中与磷吸收代谢的关系，成功克隆表达了 pstB，纯化免疫小鼠，制
32、备多克隆抗体用于检测 PstB在藻细胞的表达变化。结果表明，在缺磷条件下，PstB 表达量显著提高，而随着磷浓度的提高，PstB 表达量反而降低至本底水平。PstB 在藻细胞内受到缺磷条件的诱导，能保证藻细胞最大限度地吸收外界磷源。铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)是富营养化湖泊和水库中形成“水华”的主要藻种。利用分子生物学技术和蛋白质组学，研究常见赤潮、水华藻种在特定环境中的蛋白质组差异，从中寻找出有价值的差异蛋白质分子，这在理论和实践上对水华的防治都具有重要意义。 在水华蓝藻的形成因素中，氮磷比例是一个很大的影响因素，其最适 N/P为 16:1。我们设想，该 N/P
33、值是与细胞的生长分裂相关系的。磷在细胞中的作用是参与一些代谢途径的磷酸化反应，更重要的可能是与细胞 DNA、RNA 的合成有关；氮则是参与了蛋白质的合成，氮磷之间合适的比例，就代表了细胞生长与分裂之间量的关系。为了验证此设想，通过流式细胞术 PI染色法来检测微囊藻细胞的 DNA含量，设置不同的 N/P比值，缺 NP、1:1、16:1、160:1 四组，结果表明在 N/P为 16:1时，藻细胞的 DNA含量较其他对照组高，间接地反映了藻细胞的数目，即当 N/P为 16:1藻细胞处于分裂的最佳水平。 微囊藻有较高的磷吸收最大摄取速率，比其它藻类具有更强的储存磷的能力，可以在细胞中储存足够的磷。因此
34、，利用蛋白质组学，分析铜绿微囊藻在不同磷浓度培养水平下的蛋白表达水平，并进行质谱分析，鉴定出关键的差异蛋白，分析这些关键蛋白的作用，对揭示铜绿微囊藻特殊的磷代谢机制有一定的帮助。试验中设置了三个不同磷浓度的诱导水平：即0.005mg/L，0.05mg/L，0.5mg/L，诱导 72h后进行差异蛋白组分析。结果我们获得了二十多个差异点，选取其中可靠度较好的十一个点进行质谱分析，通过数据库比对，分析了一些与磷代谢相关的蛋白：、硫胺素焦磷酸化酶、磷酸核酮糖激酶、磷酸甘油酸激酶、琥珀酰 CoA合成酶微囊藻毒素相关蛋白 MrpA等，均与磷代谢、缺磷逆境或者核酸代谢相关。 为研究蛋白 PstB在铜绿微囊藻
35、中与磷吸收代谢的关系，成功克隆表达了 pstB，纯化免疫小鼠，制备多克隆抗体用于检测 PstB在藻细胞的表达变化。结果表明，在缺磷条件下，PstB 表达量显著提高，而随着磷浓度的提高，PstB 表达量反而降低至本底水平。PstB 在藻细胞内受到缺磷条件的诱导，能保证藻细胞最大限度地吸收外界磷源。特别提醒 ：正文内容由 PDF文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。“垐垯櫃 换烫梯葺铑?endstreamendobj2x滌?U 閩 AZ箾 FTP 鈦X飼?狛P
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