1、泌尿外科学专业毕业论文 精品论文 IL-15/lysate-DC 新型前列腺癌疫苗免疫生物学特性的实验研究关键词：肿瘤抗原 树突状细胞 前列腺癌 免疫生物学摘要：目的： 探讨 IL-15 基因转染联合肿瘤抗原负载的新型前列腺癌树突状细胞疫苗(IL-15/lysate-DC)的免疫生物学特性。 方法： 1.以小鼠肾脏cDNA 为模板用 pfx DNA ploymerase 扩增 mIL-15 目的基因，将扩增得到的 mIL-15 目的基因片段克隆到 pGEM-T Easy Vector 上，得到 mIL15-T 克隆载体。从mIL-15-T 克隆载体上 EcoRI 酶切得到 mIL-15 基因，
2、连接到 pShuttle-GFP-CMV载体上组装成 pShuttle-GFP-mIL-15，再转移到 pAdxsi 载体上，得到 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒，并完成腺病毒的大量扩增和纯化。 2.从 C57BL/6 小鼠骨髓分离树突状细胞(dendritic cells，DCs)前体细胞，经 rmGM-CSF、rmIL-4 诱导分化制备骨髓源性 DC。光镜下观察形态学变化，流式细胞仪检测未成熟 DC表面共刺激分子表达。收集培养的第 5 天未成熟 DC，通过 Ad-GFP-mIL-15 转染联合 RM-1 前列腺癌细胞裂解产物(lysate)上清共同修饰 DC，制备 IL-15/Lys
3、ate-DC 疫苗。流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗细胞表面共刺激分子表达。检测 IL-15/Lysate-DC 瘤苗刺激同基因型 T 淋巴细胞增值能力、诱导CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性。 结果： 1.将所构建的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒经酶切、电泳、测序及 RT-PCR 鉴定证实病毒质粒构建正确，插入片段包含mIL-15 基因序列。 2.经流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗 DC 细胞表面共刺激分子 CD80、CD86、CD40、CD11c 及 MHC-分子表达上调。其细胞表面共刺激分子 CD80、CD40 与其它各组 DC 比较差异有显著性
4、(Plt;0.05)。IL-15/Lysate-DC 疫苗刺激同基因 T 淋巴细胞增殖能力明显增高，较 GFP/Lysate-DC、Lysate-DC 差异有显著性(Plt;0.05)。诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性实验结果提示 IL-15/Lysate-DC 疫苗对于特异性杀伤肿瘤细胞作用优于Lysate-DC 疫苗及 GFP/lysate-DC 疫苗(Plt;0.05)。 结论： 成功构建了含 mIL15 基因的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒；IL-15/Lysate-DC 可以有效上调 DC 表面特异性共刺激分子表达，促进 DC 成熟；IL-15/Lysate-DC 可以有效
5、刺激同基因型 T 细胞增值能力；能诱导特异性 CTL 分化并对 RM-1 细胞有显著杀伤作用。正文内容目的： 探讨 IL-15 基因转染联合肿瘤抗原负载的新型前列腺癌树突状细胞疫苗(IL-15/lysate-DC)的免疫生物学特性。 方法： 1.以小鼠肾脏cDNA 为模板用 pfx DNA ploymerase 扩增 mIL-15 目的基因，将扩增得到的 mIL-15 目的基因片段克隆到 pGEM-T Easy Vector 上，得到 mIL15-T 克隆载体。从mIL-15-T 克隆载体上 EcoRI 酶切得到 mIL-15 基因，连接到 pShuttle-GFP-CMV载体上组装成 pSh
6、uttle-GFP-mIL-15，再转移到 pAdxsi 载体上，得到 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒，并完成腺病毒的大量扩增和纯化。 2.从 C57BL/6 小鼠骨髓分离树突状细胞(dendritic cells，DCs)前体细胞，经 rmGM-CSF、rmIL-4 诱导分化制备骨髓源性 DC。光镜下观察形态学变化，流式细胞仪检测未成熟 DC表面共刺激分子表达。收集培养的第 5 天未成熟 DC，通过 Ad-GFP-mIL-15 转染联合 RM-1 前列腺癌细胞裂解产物(lysate)上清共同修饰 DC，制备 IL-15/Lysate-DC 疫苗。流式细胞仪检测 IL-15/Lysate
7、-DC 疫苗细胞表面共刺激分子表达。检测 IL-15/Lysate-DC 瘤苗刺激同基因型 T 淋巴细胞增值能力、诱导CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性。 结果： 1.将所构建的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒经酶切、电泳、测序及 RT-PCR 鉴定证实病毒质粒构建正确，插入片段包含mIL-15 基因序列。 2.经流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗 DC 细胞表面共刺激分子 CD80、CD86、CD40、CD11c 及 MHC-分子表达上调。其细胞表面共刺激分子 CD80、CD40 与其它各组 DC 比较差异有显著性(Plt;0.05)。IL-15/Lysate-DC 疫苗刺
8、激同基因 T 淋巴细胞增殖能力明显增高，较 GFP/Lysate-DC、Lysate-DC 差异有显著性(Plt;0.05)。诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性实验结果提示 IL-15/Lysate-DC 疫苗对于特异性杀伤肿瘤细胞作用优于Lysate-DC 疫苗及 GFP/lysate-DC 疫苗(Plt;0.05)。 结论： 成功构建了含 mIL15 基因的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒；IL-15/Lysate-DC 可以有效上调 DC 表面特异性共刺激分子表达，促进 DC 成熟；IL-15/Lysate-DC 可以有效刺激同基因型 T 细胞增值能力；能诱导特异性 CTL 分化并
9、对 RM-1 细胞有显著杀伤作用。目的： 探讨 IL-15 基因转染联合肿瘤抗原负载的新型前列腺癌树突状细胞疫苗(IL-15/lysate-DC)的免疫生物学特性。 方法： 1.以小鼠肾脏 cDNA 为模板用 pfx DNA ploymerase 扩增 mIL-15 目的基因，将扩增得到的 mIL-15 目的基因片段克隆到 pGEM-T Easy Vector 上，得到 mIL15-T 克隆载体。从 mIL-15-T 克隆载体上 EcoRI 酶切得到 mIL-15 基因，连接到 pShuttle-GFP-CMV 载体上组装成 pShuttle-GFP-mIL-15，再转移到 pAdxsi 载体
10、上，得到 Ad-GFP-mIL-15病毒质粒，并完成腺病毒的大量扩增和纯化。 2.从 C57BL/6 小鼠骨髓分离树突状细胞(dendritic cells，DCs)前体细胞，经 rmGM-CSF、rmIL-4 诱导分化制备骨髓源性 DC。光镜下观察形态学变化，流式细胞仪检测未成熟 DC 表面共刺激分子表达。收集培养的第 5 天未成熟 DC，通过 Ad-GFP-mIL-15 转染联合 RM-1前列腺癌细胞裂解产物(lysate)上清共同修饰 DC，制备 IL-15/Lysate-DC 疫苗。流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗细胞表面共刺激分子表达。检测 IL-15/Lysat
11、e-DC 瘤苗刺激同基因型 T 淋巴细胞增值能力、诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性。 结果： 1.将所构建的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒经酶切、电泳、测序及 RT-PCR 鉴定证实病毒质粒构建正确，插入片段包含 mIL-15 基因序列。 2.经流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗 DC 细胞表面共刺激分子CD80、CD86、CD40、CD11c 及 MHC-分子表达上调。其细胞表面共刺激分子CD80、CD40 与其它各组 DC 比较差异有显著性(Plt;0.05)。IL-15/Lysate-DC 疫苗刺激同基因 T 淋巴细胞增殖能力明显增高，较 GFP/Lysate
12、-DC、Lysate-DC 差异有显著性(Plt;0.05)。诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性实验结果提示 IL-15/Lysate-DC 疫苗对于特异性杀伤肿瘤细胞作用优于Lysate-DC 疫苗及 GFP/lysate-DC 疫苗(Plt;0.05)。 结论： 成功构建了含 mIL15 基因的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒；IL-15/Lysate-DC 可以有效上调 DC 表面特异性共刺激分子表达，促进 DC 成熟；IL-15/Lysate-DC 可以有效刺激同基因型 T 细胞增值能力；能诱导特异性 CTL 分化并对 RM-1 细胞有显著杀伤作用。目的： 探讨 IL-15 基因
13、转染联合肿瘤抗原负载的新型前列腺癌树突状细胞疫苗(IL-15/lysate-DC)的免疫生物学特性。 方法： 1.以小鼠肾脏 cDNA 为模板用 pfx DNA ploymerase 扩增 mIL-15 目的基因，将扩增得到的 mIL-15 目的基因片段克隆到 pGEM-T Easy Vector 上，得到 mIL15-T 克隆载体。从 mIL-15-T 克隆载体上 EcoRI 酶切得到 mIL-15 基因，连接到 pShuttle-GFP-CMV 载体上组装成 pShuttle-GFP-mIL-15，再转移到 pAdxsi 载体上，得到 Ad-GFP-mIL-15病毒质粒，并完成腺病毒的大量
14、扩增和纯化。 2.从 C57BL/6 小鼠骨髓分离树突状细胞(dendritic cells，DCs)前体细胞，经 rmGM-CSF、rmIL-4 诱导分化制备骨髓源性 DC。光镜下观察形态学变化，流式细胞仪检测未成熟 DC 表面共刺激分子表达。收集培养的第 5 天未成熟 DC，通过 Ad-GFP-mIL-15 转染联合 RM-1前列腺癌细胞裂解产物(lysate)上清共同修饰 DC，制备 IL-15/Lysate-DC 疫苗。流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗细胞表面共刺激分子表达。检测 IL-15/Lysate-DC 瘤苗刺激同基因型 T 淋巴细胞增值能力、诱导 CTL
15、及其杀伤肿瘤细胞活性。 结果： 1.将所构建的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒经酶切、电泳、测序及 RT-PCR 鉴定证实病毒质粒构建正确，插入片段包含 mIL-15 基因序列。 2.经流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗 DC 细胞表面共刺激分子CD80、CD86、CD40、CD11c 及 MHC-分子表达上调。其细胞表面共刺激分子CD80、CD40 与其它各组 DC 比较差异有显著性(Plt;0.05)。IL-15/Lysate-DC 疫苗刺激同基因 T 淋巴细胞增殖能力明显增高，较 GFP/Lysate-DC、Lysate-DC 差异有显著性(Plt;0.05)。诱
16、导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性实验结果提示 IL-15/Lysate-DC 疫苗对于特异性杀伤肿瘤细胞作用优于Lysate-DC 疫苗及 GFP/lysate-DC 疫苗(Plt;0.05)。 结论： 成功构建了含 mIL15 基因的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒；IL-15/Lysate-DC 可以有效上调 DC 表面特异性共刺激分子表达，促进 DC 成熟；IL-15/Lysate-DC 可以有效刺激同基因型 T 细胞增值能力；能诱导特异性 CTL 分化并对 RM-1 细胞有显著杀伤作用。目的： 探讨 IL-15 基因转染联合肿瘤抗原负载的新型前列腺癌树突状细胞疫苗(IL-15/l
17、ysate-DC)的免疫生物学特性。 方法： 1.以小鼠肾脏 cDNA 为模板用 pfx DNA ploymerase 扩增 mIL-15 目的基因，将扩增得到的 mIL-15 目的基因片段克隆到 pGEM-T Easy Vector 上，得到 mIL15-T 克隆载体。从 mIL-15-T 克隆载体上 EcoRI 酶切得到 mIL-15 基因，连接到 pShuttle-GFP-CMV 载体上组装成 pShuttle-GFP-mIL-15，再转移到 pAdxsi 载体上，得到 Ad-GFP-mIL-15病毒质粒，并完成腺病毒的大量扩增和纯化。 2.从 C57BL/6 小鼠骨髓分离树突状细胞(d
18、endritic cells，DCs)前体细胞，经 rmGM-CSF、rmIL-4 诱导分化制备骨髓源性 DC。光镜下观察形态学变化，流式细胞仪检测未成熟 DC 表面共刺激分子表达。收集培养的第 5 天未成熟 DC，通过 Ad-GFP-mIL-15 转染联合 RM-1前列腺癌细胞裂解产物(lysate)上清共同修饰 DC，制备 IL-15/Lysate-DC 疫苗。流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗细胞表面共刺激分子表达。检测 IL-15/Lysate-DC 瘤苗刺激同基因型 T 淋巴细胞增值能力、诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性。 结果： 1.将所构建的 Ad-GFP-m
19、IL-15 病毒质粒经酶切、电泳、测序及 RT-PCR 鉴定证实病毒质粒构建正确，插入片段包含 mIL-15 基因序列。 2.经流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗 DC 细胞表面共刺激分子CD80、CD86、CD40、CD11c 及 MHC-分子表达上调。其细胞表面共刺激分子CD80、CD40 与其它各组 DC 比较差异有显著性(Plt;0.05)。IL-15/Lysate-DC 疫苗刺激同基因 T 淋巴细胞增殖能力明显增高，较 GFP/Lysate-DC、Lysate-DC 差异有显著性(Plt;0.05)。诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性实验结果提示 IL-15/Lys
20、ate-DC 疫苗对于特异性杀伤肿瘤细胞作用优于Lysate-DC 疫苗及 GFP/lysate-DC 疫苗(Plt;0.05)。 结论： 成功构建了含 mIL15 基因的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒；IL-15/Lysate-DC 可以有效上调 DC 表面特异性共刺激分子表达，促进 DC 成熟；IL-15/Lysate-DC 可以有效刺激同基因型 T 细胞增值能力；能诱导特异性 CTL 分化并对 RM-1 细胞有显著杀伤作用。目的： 探讨 IL-15 基因转染联合肿瘤抗原负载的新型前列腺癌树突状细胞疫苗(IL-15/lysate-DC)的免疫生物学特性。 方法： 1.以小鼠肾脏 c
21、DNA 为模板用 pfx DNA ploymerase 扩增 mIL-15 目的基因，将扩增得到的 mIL-15 目的基因片段克隆到 pGEM-T Easy Vector 上，得到 mIL15-T 克隆载体。从 mIL-15-T 克隆载体上 EcoRI 酶切得到 mIL-15 基因，连接到 pShuttle-GFP-CMV 载体上组装成 pShuttle-GFP-mIL-15，再转移到 pAdxsi 载体上，得到 Ad-GFP-mIL-15病毒质粒，并完成腺病毒的大量扩增和纯化。 2.从 C57BL/6 小鼠骨髓分离树突状细胞(dendritic cells，DCs)前体细胞，经 rmGM-C
22、SF、rmIL-4 诱导分化制备骨髓源性 DC。光镜下观察形态学变化，流式细胞仪检测未成熟 DC 表面共刺激分子表达。收集培养的第 5 天未成熟 DC，通过 Ad-GFP-mIL-15 转染联合 RM-1前列腺癌细胞裂解产物(lysate)上清共同修饰 DC，制备 IL-15/Lysate-DC 疫苗。流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗细胞表面共刺激分子表达。检测 IL-15/Lysate-DC 瘤苗刺激同基因型 T 淋巴细胞增值能力、诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性。 结果： 1.将所构建的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒经酶切、电泳、测序及 RT-PCR 鉴定证实
23、病毒质粒构建正确，插入片段包含 mIL-15 基因序列。 2.经流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗 DC 细胞表面共刺激分子CD80、CD86、CD40、CD11c 及 MHC-分子表达上调。其细胞表面共刺激分子CD80、CD40 与其它各组 DC 比较差异有显著性(Plt;0.05)。IL-15/Lysate-DC 疫苗刺激同基因 T 淋巴细胞增殖能力明显增高，较 GFP/Lysate-DC、Lysate-DC 差异有显著性(Plt;0.05)。诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性实验结果提示 IL-15/Lysate-DC 疫苗对于特异性杀伤肿瘤细胞作用优于Lysate-D
24、C 疫苗及 GFP/lysate-DC 疫苗(Plt;0.05)。 结论： 成功构建了含 mIL15 基因的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒；IL-15/Lysate-DC 可以有效上调 DC 表面特异性共刺激分子表达，促进 DC 成熟；IL-15/Lysate-DC 可以有效刺激同基因型 T 细胞增值能力；能诱导特异性 CTL 分化并对 RM-1 细胞有显著杀伤作用。目的： 探讨 IL-15 基因转染联合肿瘤抗原负载的新型前列腺癌树突状细胞疫苗(IL-15/lysate-DC)的免疫生物学特性。 方法： 1.以小鼠肾脏 cDNA 为模板用 pfx DNA ploymerase 扩增 m
25、IL-15 目的基因，将扩增得到的 mIL-15 目的基因片段克隆到 pGEM-T Easy Vector 上，得到 mIL15-T 克隆载体。从 mIL-15-T 克隆载体上 EcoRI 酶切得到 mIL-15 基因，连接到 pShuttle-GFP-CMV 载体上组装成 pShuttle-GFP-mIL-15，再转移到 pAdxsi 载体上，得到 Ad-GFP-mIL-15病毒质粒，并完成腺病毒的大量扩增和纯化。 2.从 C57BL/6 小鼠骨髓分离树突状细胞(dendritic cells，DCs)前体细胞，经 rmGM-CSF、rmIL-4 诱导分化制备骨髓源性 DC。光镜下观察形态学
26、变化，流式细胞仪检测未成熟 DC 表面共刺激分子表达。收集培养的第 5 天未成熟 DC，通过 Ad-GFP-mIL-15 转染联合 RM-1前列腺癌细胞裂解产物(lysate)上清共同修饰 DC，制备 IL-15/Lysate-DC 疫苗。流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗细胞表面共刺激分子表达。检测 IL-15/Lysate-DC 瘤苗刺激同基因型 T 淋巴细胞增值能力、诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性。 结果： 1.将所构建的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒经酶切、电泳、测序及 RT-PCR 鉴定证实病毒质粒构建正确，插入片段包含 mIL-15 基因序列。 2.经
27、流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗 DC 细胞表面共刺激分子CD80、CD86、CD40、CD11c 及 MHC-分子表达上调。其细胞表面共刺激分子CD80、CD40 与其它各组 DC 比较差异有显著性(Plt;0.05)。IL-15/Lysate-DC 疫苗刺激同基因 T 淋巴细胞增殖能力明显增高，较 GFP/Lysate-DC、Lysate-DC 差异有显著性(Plt;0.05)。诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性实验结果提示 IL-15/Lysate-DC 疫苗对于特异性杀伤肿瘤细胞作用优于Lysate-DC 疫苗及 GFP/lysate-DC 疫苗(Plt;0.05)
28、。 结论： 成功构建了含 mIL15 基因的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒；IL-15/Lysate-DC 可以有效上调 DC 表面特异性共刺激分子表达，促进 DC 成熟；IL-15/Lysate-DC 可以有效刺激同基因型 T 细胞增值能力；能诱导特异性 CTL 分化并对 RM-1 细胞有显著杀伤作用。目的： 探讨 IL-15 基因转染联合肿瘤抗原负载的新型前列腺癌树突状细胞疫苗(IL-15/lysate-DC)的免疫生物学特性。 方法： 1.以小鼠肾脏 cDNA 为模板用 pfx DNA ploymerase 扩增 mIL-15 目的基因，将扩增得到的 mIL-15 目的基因片段克
29、隆到 pGEM-T Easy Vector 上，得到 mIL15-T 克隆载体。从 mIL-15-T 克隆载体上 EcoRI 酶切得到 mIL-15 基因，连接到 pShuttle-GFP-CMV 载体上组装成 pShuttle-GFP-mIL-15，再转移到 pAdxsi 载体上，得到 Ad-GFP-mIL-15病毒质粒，并完成腺病毒的大量扩增和纯化。 2.从 C57BL/6 小鼠骨髓分离树突状细胞(dendritic cells，DCs)前体细胞，经 rmGM-CSF、rmIL-4 诱导分化制备骨髓源性 DC。光镜下观察形态学变化，流式细胞仪检测未成熟 DC 表面共刺激分子表达。收集培养的
30、第 5 天未成熟 DC，通过 Ad-GFP-mIL-15 转染联合 RM-1前列腺癌细胞裂解产物(lysate)上清共同修饰 DC，制备 IL-15/Lysate-DC 疫苗。流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗细胞表面共刺激分子表达。检测 IL-15/Lysate-DC 瘤苗刺激同基因型 T 淋巴细胞增值能力、诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性。 结果： 1.将所构建的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒经酶切、电泳、测序及 RT-PCR 鉴定证实病毒质粒构建正确，插入片段包含 mIL-15 基因序列。 2.经流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗 DC 细胞
31、表面共刺激分子CD80、CD86、CD40、CD11c 及 MHC-分子表达上调。其细胞表面共刺激分子CD80、CD40 与其它各组 DC 比较差异有显著性(Plt;0.05)。IL-15/Lysate-DC 疫苗刺激同基因 T 淋巴细胞增殖能力明显增高，较 GFP/Lysate-DC、Lysate-DC 差异有显著性(Plt;0.05)。诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性实验结果提示 IL-15/Lysate-DC 疫苗对于特异性杀伤肿瘤细胞作用优于Lysate-DC 疫苗及 GFP/lysate-DC 疫苗(Plt;0.05)。 结论： 成功构建了含 mIL15 基因的 Ad-GFP-mI
32、L-15 病毒质粒；IL-15/Lysate-DC 可以有效上调 DC 表面特异性共刺激分子表达，促进 DC 成熟；IL-15/Lysate-DC 可以有效刺激同基因型 T 细胞增值能力；能诱导特异性 CTL 分化并对 RM-1 细胞有显著杀伤作用。目的： 探讨 IL-15 基因转染联合肿瘤抗原负载的新型前列腺癌树突状细胞疫苗(IL-15/lysate-DC)的免疫生物学特性。 方法： 1.以小鼠肾脏 cDNA 为模板用 pfx DNA ploymerase 扩增 mIL-15 目的基因，将扩增得到的 mIL-15 目的基因片段克隆到 pGEM-T Easy Vector 上，得到 mIL15
33、-T 克隆载体。从 mIL-15-T 克隆载体上 EcoRI 酶切得到 mIL-15 基因，连接到 pShuttle-GFP-CMV 载体上组装成 pShuttle-GFP-mIL-15，再转移到 pAdxsi 载体上，得到 Ad-GFP-mIL-15病毒质粒，并完成腺病毒的大量扩增和纯化。 2.从 C57BL/6 小鼠骨髓分离树突状细胞(dendritic cells，DCs)前体细胞，经 rmGM-CSF、rmIL-4 诱导分化制备骨髓源性 DC。光镜下观察形态学变化，流式细胞仪检测未成熟 DC 表面共刺激分子表达。收集培养的第 5 天未成熟 DC，通过 Ad-GFP-mIL-15 转染联
34、合 RM-1前列腺癌细胞裂解产物(lysate)上清共同修饰 DC，制备 IL-15/Lysate-DC 疫苗。流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗细胞表面共刺激分子表达。检测 IL-15/Lysate-DC 瘤苗刺激同基因型 T 淋巴细胞增值能力、诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性。 结果： 1.将所构建的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒经酶切、电泳、测序及 RT-PCR 鉴定证实病毒质粒构建正确，插入片段包含 mIL-15 基因序列。 2.经流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗 DC 细胞表面共刺激分子CD80、CD86、CD40、CD11c 及 MH
35、C-分子表达上调。其细胞表面共刺激分子CD80、CD40 与其它各组 DC 比较差异有显著性(Plt;0.05)。IL-15/Lysate-DC 疫苗刺激同基因 T 淋巴细胞增殖能力明显增高，较 GFP/Lysate-DC、Lysate-DC 差异有显著性(Plt;0.05)。诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性实验结果提示 IL-15/Lysate-DC 疫苗对于特异性杀伤肿瘤细胞作用优于Lysate-DC 疫苗及 GFP/lysate-DC 疫苗(Plt;0.05)。 结论： 成功构建了含 mIL15 基因的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒；IL-15/Lysate-DC 可以有效上调
36、 DC 表面特异性共刺激分子表达，促进 DC 成熟；IL-15/Lysate-DC 可以有效刺激同基因型 T 细胞增值能力；能诱导特异性 CTL 分化并对 RM-1 细胞有显著杀伤作用。目的： 探讨 IL-15 基因转染联合肿瘤抗原负载的新型前列腺癌树突状细胞疫苗(IL-15/lysate-DC)的免疫生物学特性。 方法： 1.以小鼠肾脏 cDNA 为模板用 pfx DNA ploymerase 扩增 mIL-15 目的基因，将扩增得到的 mIL-15 目的基因片段克隆到 pGEM-T Easy Vector 上，得到 mIL15-T 克隆载体。从 mIL-15-T 克隆载体上 EcoRI 酶
37、切得到 mIL-15 基因，连接到 pShuttle-GFP-CMV 载体上组装成 pShuttle-GFP-mIL-15，再转移到 pAdxsi 载体上，得到 Ad-GFP-mIL-15病毒质粒，并完成腺病毒的大量扩增和纯化。 2.从 C57BL/6 小鼠骨髓分离树突状细胞(dendritic cells，DCs)前体细胞，经 rmGM-CSF、rmIL-4 诱导分化制备骨髓源性 DC。光镜下观察形态学变化，流式细胞仪检测未成熟 DC 表面共刺激分子表达。收集培养的第 5 天未成熟 DC，通过 Ad-GFP-mIL-15 转染联合 RM-1前列腺癌细胞裂解产物(lysate)上清共同修饰 D
38、C，制备 IL-15/Lysate-DC 疫苗。流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗细胞表面共刺激分子表达。检测 IL-15/Lysate-DC 瘤苗刺激同基因型 T 淋巴细胞增值能力、诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性。 结果： 1.将所构建的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒经酶切、电泳、测序及 RT-PCR 鉴定证实病毒质粒构建正确，插入片段包含 mIL-15 基因序列。 2.经流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗 DC 细胞表面共刺激分子CD80、CD86、CD40、CD11c 及 MHC-分子表达上调。其细胞表面共刺激分子CD80、CD40 与其它
39、各组 DC 比较差异有显著性(Plt;0.05)。IL-15/Lysate-DC 疫苗刺激同基因 T 淋巴细胞增殖能力明显增高，较 GFP/Lysate-DC、Lysate-DC 差异有显著性(Plt;0.05)。诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性实验结果提示 IL-15/Lysate-DC 疫苗对于特异性杀伤肿瘤细胞作用优于Lysate-DC 疫苗及 GFP/lysate-DC 疫苗(Plt;0.05)。 结论： 成功构建了含 mIL15 基因的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒；IL-15/Lysate-DC 可以有效上调 DC 表面特异性共刺激分子表达，促进 DC 成熟；IL-15/
40、Lysate-DC 可以有效刺激同基因型 T 细胞增值能力；能诱导特异性 CTL 分化并对 RM-1 细胞有显著杀伤作用。目的： 探讨 IL-15 基因转染联合肿瘤抗原负载的新型前列腺癌树突状细胞疫苗(IL-15/lysate-DC)的免疫生物学特性。 方法： 1.以小鼠肾脏 cDNA 为模板用 pfx DNA ploymerase 扩增 mIL-15 目的基因，将扩增得到的 mIL-15 目的基因片段克隆到 pGEM-T Easy Vector 上，得到 mIL15-T 克隆载体。从 mIL-15-T 克隆载体上 EcoRI 酶切得到 mIL-15 基因，连接到 pShuttle-GFP-C
41、MV 载体上组装成 pShuttle-GFP-mIL-15，再转移到 pAdxsi 载体上，得到 Ad-GFP-mIL-15病毒质粒，并完成腺病毒的大量扩增和纯化。 2.从 C57BL/6 小鼠骨髓分离树突状细胞(dendritic cells，DCs)前体细胞，经 rmGM-CSF、rmIL-4 诱导分化制备骨髓源性 DC。光镜下观察形态学变化，流式细胞仪检测未成熟 DC 表面共刺激分子表达。收集培养的第 5 天未成熟 DC，通过 Ad-GFP-mIL-15 转染联合 RM-1前列腺癌细胞裂解产物(lysate)上清共同修饰 DC，制备 IL-15/Lysate-DC 疫苗。流式细胞仪检测
42、IL-15/Lysate-DC 疫苗细胞表面共刺激分子表达。检测 IL-15/Lysate-DC 瘤苗刺激同基因型 T 淋巴细胞增值能力、诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性。 结果： 1.将所构建的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒经酶切、电泳、测序及 RT-PCR 鉴定证实病毒质粒构建正确，插入片段包含 mIL-15 基因序列。 2.经流式细胞仪检测 IL-15/Lysate-DC 疫苗 DC 细胞表面共刺激分子CD80、CD86、CD40、CD11c 及 MHC-分子表达上调。其细胞表面共刺激分子CD80、CD40 与其它各组 DC 比较差异有显著性(Plt;0.05)。IL-15/L
43、ysate-DC 疫苗刺激同基因 T 淋巴细胞增殖能力明显增高，较 GFP/Lysate-DC、Lysate-DC 差异有显著性(Plt;0.05)。诱导 CTL 及其杀伤肿瘤细胞活性实验结果提示 IL-15/Lysate-DC 疫苗对于特异性杀伤肿瘤细胞作用优于Lysate-DC 疫苗及 GFP/lysate-DC 疫苗(Plt;0.05)。 结论： 成功构建了含 mIL15 基因的 Ad-GFP-mIL-15 病毒质粒；IL-15/Lysate-DC 可以有效上调 DC 表面特异性共刺激分子表达，促进 DC 成熟；IL-15/Lysate-DC 可以有效刺激同基因型 T 细胞增值能力；能诱
44、导特异性 CTL 分化并对 RM-1 细胞有显著杀伤作用。特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。“垐垯櫃 换烫梯葺铑?endstreamendobj2x 滌?U 閩 AZ箾 FTP 鈦X 飼?狛P? 燚?琯嫼 b?袍*甒?颙嫯?4)=r 宵?i?j 彺帖 B3 锝檡骹笪 yLrQ#?0 鯖 l 壛枒l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛渓?擗#?“?# 綫 G 刿#K 芿$?7. 耟?Wa 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 皗 E|?pDb 癳$Fb 癳$Fb癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$F?責鯻 0 橔 C,f 薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵秾腵薍秾腵%?秾腵薍秾腵薍秾腵薍
