1、国 内 猪 流 行性 腹 泻 防 治研 究 进 展 金清 郭 利伟 长 江 大学 动 物科 学 学院 摘 要： 猪流行性腹泻是一种高度接触性肠道传染病, 各日龄猪均易感, 发病急、传播 快、 流行广、 治愈率低、 病死率高, 严重影响养猪业的健康发展。 近年来, 该病 在我国范围内的流行 呈明显上升趋势。 对该病防治方面的国内外研究进展进行了 综述。 关键词 ： 猪流行腹泻; 防治; 研究进展; 作 者简 介： 金清 (1994-) , 女, 硕士生, 研究方向为中兽药学。 作 者简 介： 郭利伟, 。 基 金： 国家自然科学基 金青年项目 (31602099) 猪流行性腹泻 (Porcin
2、e epidemic diarrhea, PED) 是由冠状病毒科 -冠状病 毒属的PEDV 引起的一种以呕吐、腹泻和脱水等为主要特征的急性肠道传染病 1 。目前, 该病在各个季节均有发生, 但仍以冬季和初春发病率最高, 不同年 龄的猪只均可感染, 其发病严重程度视年龄而定, 无品种和地域选择性。 哺乳仔 猪感染后通常引起腹泻脱水造成死亡, 发病率为 100%, 死亡率可达 80%100%, 给养猪业造成巨大的经济损失2。 自1971 年英国首次报道 PED 后, 比利时、德国、瑞士、日本等许多国家相继报 道了该病的发生。 我国于 1973 年发生该病, 但是直到1984 年, 才经荧光抗体试
3、 验和血清中和试验证实该病在我国的存在2 。近年来PED 的流行呈爆发趋势, 2013 年在美国迅速发病并在全美范围内流行, 给30 个州8200 多个猪场带来严 重的经济损失3。2014 年1 月该病在加拿大开始流行, 随后扩散到多米尼加等 拉美国家。在 欧洲的意大利、德国等国, 亚洲的韩国、日本、越南等地, PED 疫 情也日趋严重4。2010 年以来, 该病在我国多个省份暴发流行, 2011 至2014 年的PEDV 流行病学调 查显示, 中国大陆除西藏地区外均检测到PEDV, PEDV 阳性 样品检测率为62.10%78.49%, 阳性猪场比率为 71.43%83.47%。PEDV 感
4、染以及 与其他肠道病毒的共感染已成为最近猪病毒性腹泻流行的主要诱因5 。因此, 当前该病已成为我国养猪业的重要猪病之一, 严重影响了我国养猪行业的健康发展。 面对近年来的腹泻疫情, 很多因素导致猪流行性腹泻的防治成为后一段时 间内牲猪集约化养殖面临的亟待解决的问题之一。 1 PEDV 疫苗 疫苗免疫是预防动物传染病的有效方式, 也是亚洲国家 PED 防疫控制的主要方 式之一。PED 的不断流行及其病毒的变异, 使得人们越来越多地关注 PEDV 疫苗 的研制。 虽然临床上有多种灭活疫苗和弱毒疫苗可供选择, 但至今尚无特别有效 的疫苗可以完全预防或控制猪流行性腹泻的发生。在 我国, PEDV 疫苗
5、主要有灭 活疫苗、 弱毒疫苗以及基因工程疫苗。 临床应用以灭活疫苗为主, 弱毒疫苗为辅 6 。 灭活疫苗在动物疫病防控方面发挥了非常重要的作用, 其主要优点是安全、 易于 运输和保存。我国最初用的 PEDV 疫苗就是灭活疫苗。1993 年, 王明等7采用 感染PEDV CV777 株的仔猪小肠组织及内容物制备出能够有效预防母猪和哺乳仔 猪的组织灭活苗, 该疫苗保护 力可达85%以上。但是灭活苗免疫效果与 PEDV 毒 株及抗原含量有关。 近年来对 PEDV 流行毒株的基因组序列测定和分析结果显示, 我国广泛流行的PEDV 毒株在不同的基因位点发生了明显和特征性的变异, 相比 于经典或先前的毒株
6、, 这些基因突变造成的蛋白位点的改变可能导致 PEDV 抗原 位点发生变异, 影响 PEDV 的毒力和致病性, 从而造成养殖一线反复应用灭活疫 苗或弱毒株疫苗免疫母猪群, 也不能为新生仔猪提供强有力的被动免疫保护, 以致新生仔猪PED 的发生愈演愈烈8。 弱毒疫苗由于使用了能够正常增殖的弱毒株, 能够刺激机体产生持续的免疫, 是临床上使用最多的疫苗, 但国内对PED 弱毒疫苗的研究相对较少, 国内市场 上主要是以PED-RV-TGE 三联活疫苗为主, 用于猪场对 PED 的防控。与灭活疫苗 相比, 弱毒疫苗的安全更为受到关注, 弱毒苗的使用存在毒力返强的可能性, 也可能使PED 阴性猪场转阳6
7、。 除灭活苗和弱毒苗外, 目前还有基因工程疫苗, 如乳酸杆菌疫苗在预防 PED 的 同时还 可调节机体状态, 提高免疫力;转基因疫苗, 以转基因植物等表达外源蛋 白, 进而将其作为口服疫苗刺激黏膜免疫, 预防肠道传染病, 如以烟草表达 PEDV 的中和表位基因, 可大大提高抗原表达量。但是当前基因工程疫苗尚处于 研究阶段, 多数基因工程疫苗需要持续长时间、 多次接种才能诱导动物机体产生 有效的免疫力, 这在养殖一线是不便捷的, 而当前新生仔猪发生腹泻后将迅速 脱水致死, 显然对生后仔猪使用此类疫苗不能达到及时有效免疫的目的。此外, 使用此类疫苗免疫母猪使生后仔猪获得被动免疫的动物试验研究较少,
8、 因此此 类疫苗大量 应用于养殖一线尚待时日9。 2 PED 的预防 对母猪进行疫苗免疫是在 PED 流行或呈地方流行时一个最基本的预防及根除策 略, 目的是使得仔猪能够从初乳和母乳中获得母源抗体10。在生产中, 由于PED 与TGE 存在交叉感 染, 很容易并发而且症状极为相似, 因此较多采用二联疫 苗来预防PED 的发生11。但是, 市面上能够买到的所有 PEDV 疫苗都不能明显 减少腹泻的发病率12 。 对抗肠道疾病主要依赖于肠粘膜上分泌型 Ig A 的存在, 但是疫苗的功效可能与维持血清和初乳中高水平的 PEDV 特异性中和抗体有关 13 。 除了直接接种疫苗, 另一个重要的保护策略是
9、从母乳中获得被动免疫, 即 保证新生仔猪从母猪初乳及母乳中获得充足的保护性抗体10。 一旦猪场有PEDV 感染, 可以考虑返饲以防止疾病的扩散。即用腹泻的新生仔猪 粪便或者将其肠道内容物绞碎后感染妊娠母猪, 这将人为刺激母猪快速产生对 该病的免疫力并且有可能缩短该病在猪场中的暴发时间。 此法有一定的效果, 但 是也存在一些隐患, 因为在母猪或仔猪的肠道内容物或粪便中可能包含 PRRS 和 PCV2 病毒, 容易造成这些疾病的传播, 同时该法并不能保证肠内容物中PEDV 的 含量或效价可以提供足够的免疫效果14。 3 PED 的治疗 PEDV 能够导致仔猪脱水, 小肠上皮绒毛严重萎缩, 因此能够
10、刺激干细胞繁殖从 而缩短肠上皮细胞再生时间的药理、生物或天然药物都有可能成为一种治疗 PEDV 的策略15。 3.1 中药 治疗 根据中医理论, 辨证仔猪腹泻为湿热毒邪内蕴所致。湿热上蒸, 精神沉郁;胃失 和降, 故发生呕吐; 湿热犯脾, 则食欲减退; 湿热下迫, 水湿不能分利, 肠道传 导失职, 故泻如注, 粪便腥臭, 尿短少。 因此, 治疗以芳香化浊、 健胃醒脾、 除 湿止泻、补中益气、清热解毒、调理肠道微生态环境、增强免疫力的中药为主。 中药及其复方具有调节免疫功能、 抑制病毒复制、 阻止病毒致细胞病变、 抗炎镇 痛、 解热等功效, 某些中药成分还可以刺激机体的免疫系统产生干扰素、 肿瘤
11、坏 死因子、 白细胞介素等细胞因子, 一方面直接杀伤病毒, 另一方面保护机体, 减 轻病毒产生的毒素对机体的损害16。 潘光建等用中药提取物 (金银花、黄连、栀子、大青叶、白头翁、山楂、乌梅、 麦芽等) 治疗仔猪流 行性腹泻, 其试验总体治愈率 94.44%, 死亡率 5.56%, 对 其病毒性腹泻具有很好的治疗效果16。沈永恕17使用冠能注射液 (生石膏、 板蓝根、 人参、 丹参、 双花、 连翘、 大黄、 黄 芪) 对不同地区流行性腹泻的猪群 进行治疗, 对不同生长期猪群, 包括哺乳仔猪、 断奶仔猪、 育肥猪的 治愈率分别 为97%、98%、100%, 总治愈率为98%。 朱买勋等18探讨复
12、方术芩提取液体外抗 PEDV 感染 Vero 细胞作用效果, 结果表明复方术芩提取液在体外抗 PEDV 主要是 通过对病毒的直接灭活和对病毒复制抑制而达到抗病毒功效。 冉茂钊19以穿心 莲注射液、 硫酸黄连素注射液于猪后海穴进行注射, 对PED 予以预防 (每千克体 重各0.4mL) 和治疗 (每千克体重各0.2mL) , 结果表明, 预防组20 头仅有1 头出现轻微腹泻, 治疗组治愈率可达 100%。 还有研究报道, 槲皮素-7-鼠李糖苷 在抑制PEDV 复制方面非常有效;从山茶花中提取的十五齐墩果烷型三萜成分能 够通过抑制病毒蛋白质复制过程来抑制PEDV, 也是一种潜在治疗PEDV 的药物
13、制剂;中药防风中的三种香豆素被验证对PEDV 合成如GP6 等关键结构蛋白的基因有 显著抑制作用;银杏果皮中的多糖细胞毒性较小且可显著抑制病变发生, 阻止 PEDV 吸附入侵宿主细胞, 在病毒感染的早期阶段发挥作用20。 3.2 其他 药物治 疗 研究报道, 表皮生长因子 (EGF) 能刺激肠隐窝上皮细胞的增殖, 并可以减轻由 PEDV 感染仔猪所导致的萎缩性肠炎, 这一发现表明EGF 将可以用来治疗PEDV 的 感染。广谱抗病毒药物如利巴韦林能够抑制 PEDV 在体外的感染, 因此也可以用 来治疗PED。鼠源单克隆抗体的单链可变区 (single chain variable fragmen
14、t, sc Fv) 大肠杆菌表达的 sc Fv 具有中和PEDV 的功能, 说明大肠杆菌表达的重组 sc Fv 具有成为抗 PEDV 感染的新型预防治疗药物的潜质10。2013 年, Guo 等 21 利用噬菌体随机肽库经过三轮淘选, 选出 5 条能够与PEDV 受体结合的噬菌 体短肽。这5 条噬菌体短肽通过 MTT 试验验证其能够在细胞水平上抑制 TGEV 感 染, 这对于以后抑制 PEDV 作用的研究具有重要意义。 郭楠12的研究结果表明, 抗菌肽Caerin1.1 对PEDV 不同毒株都有十分显著的抑制效果且抑制 呈剂量依赖, 其抑制作用主要表现为对 PEDV 病毒粒子的直接杀伤效果,
15、破坏囊膜完整性, 对 PEDV 的复制组装无抑制作用, 但可抑制后代病毒的释放。这一结果为抗菌肽在 猪病临床的实际应用奠定了基础。 此外, 为新生仔猪提供充足的营养来增强抵抗 力从而抵抗PEDV 也是非常 有必要的。 3.3 对症 疗法 在发生PED 时可以进行一些对症疗法, 对发病情严重的仔猪进行补液, 还可添 加一些广谱抗生素 (如粘杆菌素) 控制继发感染, 防止脱水引起酸中毒, 提高 治愈率。补液的方式有 3 种:口服补液、综合输液、腹腔补液, 其中腹腔注射 最 迅速省力。对于病猪给予注射的 5%碳酸氢钠和葡萄糖生理盐水, 应用肠道抗菌 药如痢特灵、 新诺明、 庆大霉素、 黄连素, 在一
16、定积度上能够预防继发感染22。 4 饲养管理 目前, PEDV 的防控主要采取综合性防制措施, 重视免疫预防, 加强对猪只的饲 养管理, 提高饲料营养水平, 杜绝饲喂变质饲料, 保持营养平衡, 从而提高猪 只健康水平及其抵抗力;保持圈舍干净通风换气, 做好母猪产前乳房清洁和消毒 以及产房的保温工作, 同时应该降低湿度, 给予充足而干净的饮水, 不要频繁 地更换饲料;坚持自繁自养、全进全出原则23。 发生PED 时首先要将病猪隔离, 注意圈舍的消毒, 尤其是被仔猪腹泻污染的地 面, 并在干净的食槽里添加淡盐水或补液盐, 或灌服口服补液盐溶液, 这样有 助于缩短病程, 降低死亡率。 并且应加强管理
17、人员和猪只的流动, 防止疾病的传 播与蔓延, 保持优良的生长环境, 减少应激。 采取减饲、 饥饿疗法, 减轻发病猪 胃肠道的负担10,20 。 制定严格的生物安全原则是预防和控制急性PED 暴发的一项重要措施。 虽然PEDV 能够被大多数的消毒剂灭活24, 但是消毒之后通过RT-PCR 仍能够 检测到PEDV 的RNA13 。 因此, 为了选择合适的消毒剂并制定恰当的消毒程序, 需要对在体 内或者在不同环境状况下的消毒剂进行评估, 尤其是在冬季。 建议按以下步骤对 运输工具及产房进行 消毒: (1) 用超过 70 的温水进行彻底的高压冲洗; (2) 按照使用说明选择恰当的消毒剂进行消毒; (3
18、) 消毒后干燥过夜。 其他的生物安 全措施包括:限制育肥舍和保育舍的人员流动;限制装卸过程中司机与猪场工作 人员的接触;所有新引进或者替换的猪只在进入猪场之前都应隔离一段时间检查 其健康状态;限制任何有可能携带病毒的个人或物资进入猪场;对所有非生物媒 介、人员以及可能携带 PEDV 的外来参观人员进行全面消毒10。 总而言之, 对养猪场应严格执行管理措施, 定期消毒, 加强隔离检疫。 饲喂高能 量的饲料, 进行免疫接种, 并将中兽医疗法渗入其中, 可以使猪群最大程度地 得到保护, 在发病期内采取相应的对症治疗手段, 尽可能将损失减少到最小。 参考文献 1 陈溥言, 王川庆, 姜平, 等. 兽医
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