1、分光光度法,测定饲料中维生素B12的含量,一、实验目的,探讨饲料中维生素B12的含量测定方法学会正确使用紫外可见分光光度计提高同学们自己学习、查阅资料的能力,二、实验原理,维生素B12是含钴的有机药物，为深红色结晶，是唯一含有主要矿物质的维生素。 本实验采取紫外可见分光光度法测饲料中维生素B12的含量。将精密称定后的饲料样品研磨，并加水溶解，利用微孔滤膜过滤得到滤液，作为供试品溶液。利用该方法得到的样品溶液，按中国药典规定波长361 nm测定吸光度，以标准曲线法为测定含量依据，,三、仪器与试剂,仪器：紫外可见分光光度计 比色皿 分析天平 试剂： 饲料样品,四、实验步骤,1.选择测定波长 维生素
2、B12吸收光谱上有三个吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。维生素B12在361 nm的吸收峰干扰因素少，吸收又最强，本实验选择361 nm为测定波长，以标准曲线法为计算含量依据。,2. 溶液的制备参比溶液：在分析天平上精密称取维生素B12 0.0025 g，置于25 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。将溶解后的溶液备用。待测溶液：称取饲料样品50克，研磨样品，置于50 mL容量瓶中，加水35 mL，充分振摇使其溶解，加水稀释至刻度，密塞，再用力振摇，静置，取上清液，用0.8 m的微孔滤膜滤过，得到滤液。,3.标准曲线的绘制 取等量的参比溶液分别放入五支比色管中，分别用蒸馏水稀释2、4、6、8、10倍，摇匀。在361 nm波长处测定吸光度，记录结果。以吸光度A与质量浓度c绘制标准曲线。,4、测定含量 以蒸馏水为空白，取试样溶液，摇匀，设定吸收波长为361 nm测定吸光度，按标准曲线法为计算含量依据。,五、实验结果,标准曲线法：在工作曲线上求出待测溶液中维生素B12的含量。,六、注意事项,1、应将饲料研细，减小干扰，使 溶解度增高。 2、因紫外可见分光光度法所需样 品量少，本实验采用注射器过滤器进行过滤，得到试样溶液。,谢谢观看！,监测1033班,
