1、a-淀粉酶的固定化与淀粉水解作用的检测,知识结构,二、a-淀粉酶的固定化与淀粉水解作用的检测,一、固定化技术基础知识,一、固定化技术基础知识,固定化技术：利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括吸附法、包埋法、化学结合法（将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到载体上）。,包埋法,化学结合法,物理吸附法,细胞多采用包埋法固定,酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定化,反应方式,不管是固相柱还是固相悬浮体，回收后，在一定条件下贮存，还可以利用。,1.使底物溶液通过装有固相酶的柱，柱留出液即为酶催化的产物。,2.有时也可将固相酶或固定化细胞悬浮于底物溶液中，一定时间后溶液即成酶催化的产物
2、。,实验原理,-淀粉酶,-淀粉酶,糖化淀粉酶,淀粉,糊精,麦芽糖,葡萄糖,二、-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测,运用吸附法将-淀粉酶的固定在石英砂上。一定浓度的淀粉溶液经过固定化的-淀粉酶催化后，生成糊精，使流出液加入KI-I2指示液后呈红色，表明水解产物糊精生产。,固定化装置层析柱,实验材料制备,5mmol/L KI-I2溶液称取0.127g碘和0.83g碘化钾。加蒸馏水100ml。,a-淀粉酶的固定化在烧杯中将5mg a-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中。再加入 5g石英砂，不时搅拌，30分钟后装入层析柱中。用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱以除去未吸附的游离淀粉酶，流速控制为1ml/min。,
3、可溶性淀粉溶液取50mg可溶性淀粉溶于100ml热水中，搅拌均匀。,实验步骤,2.试验后，用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱，放置在4冰箱里，几天后再重复上述实验，看是否有相同结果。,1.将灌注了固定化酶的层析柱放在铁架台上，用滴管滴加淀粉溶液，使淀粉溶液已0.3mL /min的流速过柱。在流出5mL后接收0.5mL流出液，加入1-2滴KI-I2 溶液，观察颜色。用水稀释1倍后再观察颜色。,HST,层析住,实验结果,1 2 3 41、2mL水+12滴KI-I2溶液、2mL淀粉液+12滴KI-I2溶液、2mL淀粉滤液+12滴KI-I2溶液、2mL淀粉滤液+12滴KI-I2溶液+稀释1倍,实验注意事
4、项,a.控制滴灌流速。0.3mL/min的流速，我们就可以控制每分钟滴管流出量为每分钟6滴（6=0.3mL/ 50uL）。这样做的目的是控制流速让淀粉和淀粉酶充分接触，反应。,b.显色。在流出5mL后接取0.5mL过滤液，然后向试管中加入1-2滴KI-I2 溶液。切记，KI-I2 溶液不要加入太多，以免碘液颜色覆盖糊精淀粉反应后的颜色。,谢谢！,螺蛳粉 螺蛳粉 vzg79wcv 无存恐怕已经是确信无疑的事情了。而回家探亲的张老乡还全然不知道这里已经遭受到如此大的灾难，还在兴致勃勃地准备携家眷前来呢。即使听到这里已经遭难的消息时，大概也已经是在南下的途中了。如果他一定要来看个究竟，到时候全家人
5、可如何在这个遭受了如此大劫难的汉口镇上落脚啊！想到这些，耿老爹不禁潸然泪下。大水退去之后，耿家父子们首先是清理开楼梯，然后下得楼来将门里的淤泥铲开一个空间。打开门后，再将一楼内地板上和窗台上的淤泥全部清理到门外面的路边儿上。最后，耿英拿钥匙好不容易打开抽屉上的小锁子，用力拉开抽屉将零用的散碎银子和铜板全部取出来，用一小块布包了拿到楼上清理干净。只可惜了多半店铺的粮油米面，全部都给毁掉了。再继续清理到小院儿里，发现驴和平车，以及简易车棚早已没了踪影，而且水井已经被浑水倒灌，恐怕在短期内不能再用了。说起来，耿家父子四人应该是很幸运的了。无情的洪水虽然冲走了立下汗马功劳的毛驴和平车，损失了一楼店铺内
6、所有的粮油米面，但四个人全都安然无恙，而且手里还尚有一些银两，不至于两手空空的。此外，二楼上还存有一些粮油米面和一大水缸的饮用水，勉强维持几日问题还不算太大。接下来的几天，幸存下来的一些人开始清理街道，而更多的人则已经在准备或开始纷纷外逃了。原来，这次长江决堤只发生在北岸，南岸一点儿没有受到损害，这些人是准备渡江南下谋生的。前思后想一番之后，耿老爹和三个孩子商量：“这场大水，已经使周围数百里今年不可能再有多少收成了，而且镇上的人口也损失了一大半。看来，咱们的粮油零售店已经不可能在这里继续维持下去了。我想啊，现在唯一的办法只能是过江去再做打算了。”耿正兄妹三人面面相觑。听爹爹说得在理，都点头称是
7、。于是，耿老爹当即拍板：“事不宜迟，那我们及早准备动身。”没有了毛驴和平车，耿老爹和耿正只能四处寻找扁担和箩筐。但是，在这场罕见的大洪灾之后，偌大的汉口镇已经被洗劫一空，像扁担和箩筐这一类的家伙什儿，大多已经随着洪水漂走了。父子俩人转了大半天，好不容易才寻得一副，耿老爹不惜重金买了下来。由于小二楼的房主已经在这场大洪灾中遇难了，所以，耿老爹不需要交涉退房事宜，收拾好自己的东西抬腿走人即可。想到张老乡在临别时曾经说，待十一月里返回来之后要亲自到店铺送书信来，耿老爹的心里一阵阵作痛。他找出纸墨和笔，为张老乡写了一纸留言贴在门上。尽管明知张老乡即使真得返回汉口镇，也是百日之后的事情了。这期间风吹日晒雨淋的，加上楼房易主，张老乡到时候能够看到留言的机会是极小的，但耿老爹还是很认真地写了。耿老爹在留言上仔细说明，自己在这里,
