1、 一 实验目的 二 实验原理 三 实验器材 四 实验方法 五 实验作业 培养基的配制和灭菌 一 实验目的 1 明确培养基的配制原则 2 掌握配制培养基的一般方法和步骤 3 了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围 4 掌握高压蒸汽灭菌技术 了解几种常用灭菌方法 二 实验原理 培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质 用人工方法配制而成的一种基质 它包括碳源 氮源 能源 生长因子 无机盐和水六类营养要素 由于不同微生物细胞组成不同 因而所需营养基质不同 为了分离 培养和鉴定不同的微生物 必须根据其需要 配制合适的培养基 培养基的种类繁多 根据培养基的成分 物理性状不同 可分为天然培
2、养基 合成培养基 半合成培养基 固体培养基 半固体培养基和液体培养基 常用加热灭菌法 1 干热灭菌 用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌2 湿热灭菌 高压蒸汽灭菌法 间歇灭菌法 煮沸消毒法 灭菌是指应用物理或化学的方法 杀灭物体表面和内部一切微生物营养体 芽孢和孢子 灭菌方法很多 可分为加热 过滤 照射和化学药品法等 三 实验器材 1 药品和试剂 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 5 NaOH溶液 5 盐酸溶液 生理生化培养基 2 器材 天平 药匙 瓷缸 玻璃棒 pH试纸 试管 三角瓶 牛皮纸 棉花 线绳 干燥箱 高压锅 1 称量按照培养基配方 准确称量各成份放于瓷缸中 配方 牛肉膏5 0g 蛋白胨
3、10 0g NaCl5 0g 琼脂粉20 0g 自来水水1000ml pH7 0 生理生化用培养基 四 实验方法 培养基的制备过程称量 溶解 调节pH值 过滤 分装及包扎 灭菌 灭菌后试管摆放斜面 2 溶解加入所需要的水量 搅拌 使其溶解 3 调节pH值用玻璃棒沾少许液体 测量pH值 用氢氧化钠和盐酸调节pH 4 过滤用滤纸或多层纱布过滤 一般无特殊要求可省去 5 分装及包扎根据不同的需要 可将制好的培养基分装入试管内 用分装漏斗 或三角瓶内 管 瓶 口塞上棉塞 最后用牛皮纸将棉塞部分包好 6 灭菌 高压蒸汽灭菌 1210C灭菌20分钟 7 灭菌后试管摆放斜面 8 灭菌后倒平板 注意事项 1 称取药品时严防药品混杂 一把牛角匙称一种药品 2 蛋白胨极易吸湿 称取时动作要迅速 2 配制固体培养基时 先将其他药品加热溶解到快沸时 再将称好的琼脂加入 继续加热至琼脂完全熔化 此过程要不断搅拌 以免琼脂糊底 并控制火力 防止沸腾外溢 4 分装量根据试管大小和实际需要而定 固体培养基装量约为管高的1 5 液体培养基的装量约为管高的1 4 三角瓶的装量不超过瓶体的1 2 5 分装过程中注意不要将培养基沾在管 瓶 口上 以免沾污棉塞而引起污染 返回
