1、荧光光谱分析法实验一、荧光分光光度计用于定性测定一、实验原理：不同的荧光物质吸收的激发光和发射的荧光波长是不同的，同一荧光物质所发出的荧光强度与其浓度之间呈正比。因此可利用激发波长及发射波长对物质定性测定，利用荧光强度进行定量测定。二、实验步骤1仪器结构：2实验设备与实验药品日立 850 型荧光分光光度计 0.05M 硫酸 硫酸奎宁 3仪器基本操作（1）开机：（2）基本参数调整光标选择基本参数有：bandpass （带通） 、Scan Speed（扫描速度） 、response （响应时间）、PM Gain （增益） 、EM Filter（发射单色器） 、Recording（记录方式）（3）记
2、录仪定幅调整定辐参数：Ordinate （纵坐标） 、Abscissa（横坐标） 、Zero shift（零点位置） 。(4) 激发光谱扫描Ex 一侧 Go to 200 Pre-Scan 到达800nm 后 Pre-Scan Reture Start/Stop 到达 800nm 后 Start/Stop(5)发射光谱扫描Em 一侧 Go to 200 Pre-Scan 到达稳压器 Main Xe lamp CPU光源 激发单色器 样品池发射单色器检测器记录仪Instru paramater shift EnterREC SCALEshift Enter800nm 后 Pre-Scan Ret
3、ure Start/Stop 到达 800nm 后 Start/Stop(6) 差减扫描（扣背景扫描）DATA PROCESS SUDTRACTION BACKGROUND ENTER 按 EM 或 EX 一侧的 START/STOP 扫描完成后再按 START/STOP 停止 SHIFT SUBTRACTION ENTER 按 EM 或 EX 一侧的 START/STOP 开始差减扫描，自动停止。（7）关机CPU Main 关电源 实验二 分子荧光光谱法测定二氯荧光素一、实验目的1了解分子的电子结构、振动结构和转动结构2. 掌握荧光光谱分析法的基本原理, 学会利用工作曲线进行荧光定量分析的方
4、法。二、实验原理二氯荧光素的化学式为 C20H10C12O5,可以用荧光光度法定量测定。对于稀溶液，在实验条件相同的情况下，同一物质的荧光强度与其浓度成正比。本实验用工作曲线法分析试样中的二氯荧光素含量。具体方法是：配制一系列不同含量的标准溶液，测其荧光强度，然后以浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标绘制工作曲线。在与标准溶液相同的条件下测未知试样的荧光强度，从工作曲线上即可查出试样中荧光物质的浓度。三、仪器和试剂1.仪器（1）M-850 荧光光度计（2）1.00cm 石英测定池（3）25ml 容量瓶 8 个（4）移液管：2.0ml 1 支 5.00ml 1 支 10.00ml 1 支（5）刻度管：
5、10ml 1 支2. 试剂二氯荧光素标准溶液储备标准液(25µg/ml): 称取 0.0125g 二氯荧光素（A.R ） ，用 0.01mol·L1 NaOH 溶液溶解后移入 500ml 容量瓶中并用 0.10 mol·L1 NaOH 稀释至刻度。四、实验步骤1. 二氯荧光素系列标准溶液及未知试样溶液的配制：取 5 个 50ml 容量瓶，分别加入上述二氯荧光素溶液配置成0.00，1.00，2.00 ，4.00，6.00µg/ml 2 .启动荧光光度计3. 发射光谱和激发光谱的绘制在熟悉荧光分析仪的性能和操作方法的基础上，根据本实验所用的标准溶液及未知式样溶液的实际情况，测取发射光谱和激发光谱并找出最大发射波长和最大激发波长。4. 荧光强度的测量根据绘制的发射光谱和激发光谱，学生自行设计定量分析的仪器参数，绘制工作曲线，求出未知溶液的浓度。五、结果处理将打印的未知溶液的两个结果取平均值，在由平均值求出原始试样中的浓度。
