1、实验四微生物细胞大小的测定及显微镜下直接计数 主要实验内容 显微镜下细菌细胞大小的测定血球计数板测定微生物细胞的数量 显微镜下直接计数 一显微镜下细菌细胞大小的测定 1实验目的2实验原理3实验材料实验方法步骤5实验报告 1实验目的 学习用镜台测微尺校正目镜测微尺的方法 学习并掌握用目镜测微尺测定细菌细胞大小的方法 巩固显微镜油镜的使用方法 2实验原理 测定微生物细胞大小是在显微镜下利用测微尺进行 测微尺可分为目镜测微尺和镜台测微尺 目镜测微尺是特制的圆形玻片 中央有一刻度尺 100等分 可放入目镜镜筒内 用于测定细胞大小 镜台测微尺为一载玻片 上贴有圆形盖片 中央有总长度为1mm 100等分
2、每小格长0 01mm 10um 目镜测微尺每小格大小随显微镜放大倍数不同而改变 使用目镜测微尺进行测量之前必须用镜台测微尺标定 以求出在某一放大倍数下目镜测微尺每小格所代表的长度 然后用标定好的目镜测微尺进行测量 3实验材料 枯草杆菌标本片 4实验方法步骤 1 用镜台测微尺标定目镜测微尺 2 用目镜测微尺测定枯草杆菌大小 1 用镜台测微尺标定目镜测微尺 放置目尺 取出目镜 旋开接目镜 将目尺放在目镜镜筒的中间隔板上 有刻度的一面朝下 旋上接目镜 并插入镜筒 放置台尺 将台尺放置于显微镜的载物台上 使刻度面朝上 标定目尺 先用低倍镜观察 找到台尺刻度 转动目镜使目尺与台尺的刻度轴线相平行 移动台
3、尺使目尺与台尺某一区间的两对刻度线完全重合 然后计数出两重合线间各自所占格数 通过如下公式计算 标定低倍镜目尺每小格所代表的实际长度 2 用目镜测微尺测定枯草杆菌大小 取下台尺 将染色片放在载物台上 先用低倍镜观察 后换油镜观测 计量细菌长和宽所占小格数 将测得格数乘以已标定的目尺每小格长 即得菌体实际大小 测定20个菌体求出平均值 5实验报告 1 目镜测微尺标定结果记录 2 在油镜下测量枯草杆菌大小结果记录 二血球计数板测定微生物细胞的数量 1实验目的2实验原理3实验材料4实验方法步骤5实验报告 1实验目的 掌握血球计数板测定微生物细胞数量的原理 学习用血球计数板测定微生物细胞数量的方法 2
4、实验原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数 是将菌悬液放入血球计数板与盖玻片之间的计数室中 然后在显微镜下计数 因为计数室容积一定 所以可根据测定值推算出菌悬液单位体积所含微生物的总数量 血球计数板的结构 它是特制的厚载玻片 中央区域有四条凹槽而形成三个平台 中间平台较宽 它又被一短横槽分隔为两部分 每一部分均有一个方格网 每一方格网可分为九个大方格 中央大方格就是计数室 大方格分为16个中方格 每个中方格又可分为25个小方格 每个大方格共含有400个小方格 计数室大方格边长为1mm 底面积为1mm2 高0 1mm 所以每个计数室固定容积为0 1mm3 计数方法 在计数时 用含16个中方格的计
5、数板 要按对角线方位计数左上 左下 右上 右下等四个中方格 100个小方格 所含有的菌数 由此可计算得出每个小方格所含有的菌数的平均值 计数室每个小方格容积为 0 1 10 3 400 1 4 10 6 ml 计算公式 每ml菌液含菌数 N K d N 每个小方格含菌数平均值 d 菌液稀释倍数 K 4 106 3实验材料 稀释100倍的酵母菌菌悬液 即d 100 实验方法步骤 1镜检计数室 对计数室进行镜检 若内有污物 清洗后才能计数 2加样液 先在血球计数板两个计数室部位加盖玻片 再用无菌玻棒或滴管沾取待测菌悬液稀释液 已摇匀 从盖玻片边缘滴加 使菌液沿缝隙靠毛细作用自行进入计数室内 静置5
6、min 3显微镜计数 将血球计数板置于载物台上 先用低倍镜观察 后换高倍镜观察计数 位于格线上菌体只计上边线和左边线上的 如果出芽酵母芽体大小达到母细胞一半时 可计作两个菌体 选择五个视野 在每个视野内任意选择五个小方格计数 求出每个小方格菌体数量平均值 4根据公式计算每ml菌液含菌数 5测量完毕后 取下盖玻片用水冲洗血球计数板 严禁用硬物刷洗 晾干 放入盒内保存 注意事项 1 取待测稀释菌悬液向血球计数板加样前 须将菌悬液充分摇匀 2 加样过程中 应避免将菌液滴在盖玻片 3 由于菌体在计数室中处于不同空间位置 须在不同焦距下才能观察到 故观察时须不断调节微调 计数菌液中全部菌体 尽量避免遗漏 实验报告
