1、实验五苔黑酚法测定酵母中RNA的含量 一 目的掌握用苔黑酚法测定RNA含量的原理和方法 二 实验原理核糖核酸与浓盐酸共热时 即发生降解 形成的核糖继而转变为糠醛 后者与3 5 二羟基甲苯 苔黑酚 反应呈鲜绿色 该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂 反应产物在670nm处有最大吸收 RNA在20 250 g范围内 光吸收与RNA的浓度成正比 苔黑酚反应特异性较差 凡戊糖均有此反应 DNA和其他杂质也能给出类似的颜色 因此测定RNA时可先测定DNA含量 再计算出RNA含量 三 实验器材粗制RNA 试管 吸管 分光光度计 水浴锅 四 实验试剂标准RNA母液 准确称取RNA10 0mg 用少量蒸馏水溶解
2、 如不溶 可滴加浓氨水 调pH7 0 定溶至10 0ml 此溶液每ml含RNA1mg 标准RNA溶液 称取母液1 0ml 置于10ml容量瓶中 用蒸馏水稀释至刻度 此溶液为100ugRNA ml 样品溶液 将一定量的RNA粗品用蒸馏水溶解并定溶 RNA浓度在10 100ug ml范围内 苔黑酚试剂 五 操作标准曲线绘制取试管6支 按下表编号并加入试剂 加毕 混匀 置沸水中加热45min 冷却 测定各管A670nm 以A670nm为纵坐标 RNA量 ug 为横坐标作图 样品的测定取1 0ml样液置试管内 加蒸馏水1 0ml及苔黑酚试剂2 0ml 沸水浴中保温45min 冷却 测定其A670nm 根据标准曲线求RNA的质量 ug 式中 RNA的质量分数 m1 样液中测得RNA的质量 ug m2 样液中样品的质量 ug
