1、叶黄素的测定方法A1.原理美国分析化学协会的分析方法AOAC43.01843.023“关于干燥植物和饲料中叶黄素的测定方法”是国际上通用的测定叶黄素的分析方法直接应用 AOAC 方法，会导致金菊黄 复合预混合饲料中 1020%叶黄素的破坏。这是由于金菊黄 复合预混合饲料在生产过程中已经皂化，AOAC 方法的皂化过程会使叶黄素水解和变性。故采用下列简易方法：A2.仪器分析天平（准确到 0.0001 克）,恒温水浴锅,50ml、100ml 棕色容量瓶,5ml、10ml 移液管，50ml、100ml 烧杯，分光光度计。A3.试剂丙酮（分析纯） ，无水酒精（分析纯） ，甲苯（分析纯） ，正己烷（分析纯
2、） ，异丙醇（分析纯）。提取剂（正己烷：丙酮：无水酒精：甲苯=10：7：6：7 体积比）丙酮异丙醇混合液（丙酮：异丙醇=1：1 体积比）苏丹 I 标准溶液A4.实验步骤A4.1 称取 0.5 克金菊黄 复合预混合饲料样品，于 100ml 棕色容量瓶中，精确到 0.0001g加入约 50ml 提取剂，用胶塞塞紧，摇匀。A4.2 用水浴锅加热 10min，然后用自来水冷却至室温。用提取剂定容至刻度，摇匀，静止10min。A4.3 取上清液 10ml 至 100ml 棕色容量瓶，加入 30ml 正己烷、20ml 提取剂，然后用 10%的硫酸钠溶液定容至刻度，剧烈振荡 10min，置于暗处静止至澄清（
3、 15min） 。A4.4 取上清液 5ml 至 50ml 棕色容量瓶中，加正己烷定容至刻度，摇匀，测定溶液于 474 nm 处的吸光度。A4.5 计算A474×F×5000叶黄素（克/公斤）= m×236注释：A474：474nm 处的吸光度。F：仪器偏离因子=0.561/A474(工作液)苏丹 I 标准溶液（工作液）的制备：（1）称 0.0248 克经过重结晶处理的苏丹 I 于 100ml 棕色容量瓶中，加丙酮异丙醇混合液溶解，摇匀，定溶至刻度。 （2）取 2ml 于 50ml 棕色容量瓶，加丙酮异丙醇混合液溶解，摇匀，定溶至刻度。 （3）于 474 nm 处测的吸光度，即可求得 F。
