1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 重点 从土壤中分离分级纤维素的微生物 二 研究思路 一 筛选菌株 aq细菌能忍受93OC左右的高温 是美国微生物学家托马斯 布鲁克于1966年在美国黄石国家公园的一个热泉中发现的 这说明寻找目的菌株时 要根据他虽生存环境的要求 到相应的环境中去寻找 2 实验室中微生物筛选的原理 人为提供目的菌株的生长的条件 包括营养 温度 PH等 同时抑制或阻止其他微生物的生长 选择培养基 在微生物学中 将允许特定种类微生物生长 同时抑制其他种类微生物生长的培养基 称作选择培养基作用 主要应用于菌种分离 分析本课题使用的培养基 KH2PO4Na2HPO4MgSO4 7H2O葡
2、萄糖尿素琼脂碳源 葡萄糖 氮源 尿素 无机盐 KH2PO4Na2HPO4MgSO4 7H2O凝固剂 琼脂该培养基的选择作用主要是通过尿素来实现的 原因 在这个培养基中 尿素是唯一的氮源 只有能够利用尿素的细菌才能在这种培养基上正常生活 二 统计菌落数目 常用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目 原理 当样品的稀释度足够时 培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌 注 1 为保证结果准确 一般选择菌落数在30 300的平板进行计数 2 为增强实验准确性 一定要涂布至少3个平板 作为重复组 4 显微镜直接计数法 镜检计数 也是测定微生物数量的常用方法 另外也可采用滤膜法 三 设置对照1
3、 目的 排除试验组中非测试因素对实验的结果的影响 提高实验结果的可信度 注 对照实验的分类 空白对照 不给对照组任何处理因素条件对照 给对照组部分对照因素 但不是所要研究的处理因素 自身对照 对照和实验都在同一研究对象上进行 相互对照 不单设对照组 而是几个试验组相互对照 分析 P23A同学出现不同试验结果的原因 土样不同 培养基被污染或操作有误对照组设置 方案一 其他同学取与A同学相同的图样进行培养 若结果与A相同 则说明A无误 反之 则有误 方案二 将A同学配置的培养基在不加土样情况下进行培养 作为空白对照 以证明A的培养基是否受到污染 三 实验设计 一 土壤取样 注 有机物含量高 土质肥
4、 一般其中微生物含量高 土壤中微生物大约70 90 是细菌 而细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生活 因此 在距地表3 8cm的土壤层分布较多 取土样用的小铁铲及装土样的信封要事先灭菌 二 样品稀释 注 分离不同的微生物要采用不同的稀释度 原因 土壤中各类微生物的数量是不同的 采用不同的稀释度以保证获得菌落数在30 300之间适于计数的平板 三 涂布平板 四 微生物的培养与观察注 细菌一般在30 37OC的温度下培养1 2天 放线菌一般在25 28OC温度下培养5 7天 而霉菌一般在25 28OC温度下培养3 4天 每隔24小时统计一次数目 防止因培养时间不足而导致遗漏菌落数目一般来说 在一定条件下 同种微生物表现出稳定的菌落特征 鉴别分解尿素的微生物的方法 在以尿素作为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂 培养一段时间 若PH上升 指示剂将变红 则该菌种可以分解尿素
