1、纸层析,一、实验目的1.掌握纸层析分离氨基酸的操作技术；2.了解纸层析法的基本原理。,纸层析法，是根据不同物质在两相中的分配比不同而进行分离的一种微量分离方法。,二、实验原理,载体层析纸（滤纸）；固定相滤纸上的吸湿水分；流动相有机溶剂（展开剂）。,由于滤纸纤维素上的羟基和水分子有较大的亲和力, 其吸附的水相为固定相, 有机溶剂相为移动相。 由于物质的极性大小不同,在两相中分配比例有所差异。极性小的物质在有机相中分配较多,随有机相移动较快；而极性大的物质在水相中分配较多,移动相对较慢,从而将极性不同的物质分开,纸层析的原理,在相同的条件下，每种物质都有其固定的Rf值。 Rf值的定义为： 原点到层
2、析斑点中心的距离 Rf = 原点到溶剂前沿的距离,Rf值相差越大越好。一般要求Rf值在0.2-0.8之间，各组分Rf差应该大于0.05，否则斑点容易重叠。,在相同的条件下，每种物质都有其固定的Rf值。 相同条件指： 1. 展层所用溶剂系统； 2. 展层剂pH值； 3. 温度； 4. 滤纸； 5. 展层的方向(横向，上行或下行)。用纸层析鉴定样品时，一般都与标准品相比较。若没有标准品，可选择文献记载的该物质层析条件，根据文献Rf值进行鉴定。,主要试剂：（1）展开剂 正丁醇:水:醋酸 = 4:5:1。（2）茚三酮 2 gL-1乙醇溶液。（3）甘氨酸(5g. L-1) 亮氨酸(5g. L-1) 两种
3、氨基酸混合液,三、使用试剂,四、实验步骤,点样,展开分离,显色,计算比移值,1、用铅笔将层析色谱轮廓和中心点描出来。 2、测量原点至色谱中心和至溶剂前沿的距离，计算各种已知氨基酸和未知氨基酸色谱的Rf值。 3、分析混合样品中未知氨基酸的组分。,五、结果处理,六、注意事项 (1) 在整个操作过程中，手只能接触滤纸边缘，否则会造成滤纸上众多斑点。 (2) 在点样时，不要将毛细管插错了试剂瓶。 (3) 点样斑点不能太大（其直径应小于0.5cm）(4) 展层剂接触滤纸时一定要均匀、保持前沿线与滤纸平行。(5) 吹风温度不宜过高，否则斑点变黄。 (6) 展层结束后，切勿忘记用铅笔描出溶剂前沿。(7) 展开过程不要打开缸盖。否则滤纸会吸水，溶剂也会挥发，使整个系统的组分发生改变从而改变极性。,错误操作：,1.滤纸触壁,2.点样量过多,
