1、T细胞免疫功能检测平台的建立与临床应用 北京协和医院感染内科 T细胞免疫功能与感染 T细胞免疫功能的抗感染作用正常人的免疫功能T细胞免疫的抗感染作用T细胞免疫功能的测定T细胞亚群T细胞功能T细胞免疫功能测定的临床意义 机体的免疫系统 非特异免疫皮肤粘膜 吞噬细胞 NK细胞 补体 正常菌群特异性免疫细胞免疫 CD4 细胞 CD8 细胞体液免疫 B细胞 机体的免疫系统 CD4 细胞的免疫中枢指挥功能 CD4 细胞的免疫中枢指挥功能 CD4 细胞的产生和分群 纯真 纯真和记忆 效应 4细胞亚群的产生 记忆 效应 凋亡 胸腺 效应 效应 效应 纯真CD4和记忆CD4细胞 细胞免疫功能的抗感染作用 感染
2、发生的两个基本要素 病原体和机体免疫功能免疫功能对疾病转归的影响 对免疫功能正常的人不起致病作用的病原体 在免疫功能低下的人身上可发生致命性的感染 免疫功能正常的人发生某种感染后可很快恢复 而在免疫功能紊乱的人则成为慢性状态 对同样的病原体所导致的感染 给予同样的抗感染治疗 转归完全不一样 细胞免疫功能的抗感染作用 为什么 乙肝病毒感染 有人为乙肝病毒携带者 也有人成为慢性乙肝病人 HPV感染 多数人表现为无症状的HPV潜伏感染者 少数人表现为复发性HPV CMV感染 90 的正常人隐性感染终生带病毒 但免疫功能低下时可致死 HIV感染的自然史 CD4细胞 cell mm3 800400 急性
3、感染期 无症状期 艾滋病前期和艾滋病期 CD4 病毒载量 抗HIV的CTL HIV抗体 HIV感染者的三种临床转归 Virus CD4 CD8aHIV CD4 CD4 CD8 CD8aHIV Virus Virus Standard8y Fast 4 5y 2 CCRgenes HLAB35 Slow 10y 2 CCRgenes HLAB57 免疫功能与机会性感染相关性 years 200 CD4counts 白念菌 Zona 卡波济肉瘤 淋巴瘤 PCP 弓型体 CMV MAIC 4 8 艾滋病期 HIVload 2 10 细胞免疫功能的抗感染作用 不重视机体免疫功能的后果 化疗药物的滥用耐
4、药菌的产生二重感染的发生进一步损害免疫功能 细胞免疫功能与感染 细胞免疫功能的抗感染作用正常人的免疫功能细胞免疫的抗感染作用T细胞免疫功能的测定T细胞亚群T细胞功能细胞免疫功能测定的临床意义 细胞免疫功能与感染 免疫功能测定方法 体内 PPD试验 体外 体液免疫 B细胞数量 免疫球蛋白定量细胞免疫 T细胞亚群的数量和功能 流式细胞仪 ELISA ELISPOT T细胞免疫功能的测定 Acytometerlookslikeaneasy to usemachine butlookinside It sacomplexlasermachine PMT PMT PMT PMT4 Dichroic Fi
5、lters Bandpass Filters FlowCytometryPrinciple Laser 1 2 3 4 Flowcell T细胞免疫功能的测定 淋巴细胞免疫表型检测指标 不同年龄组正常 细胞亚群的建立 细胞免疫功能测定方法 T细胞功能的测定 T细胞增殖功能同位素H3掺入试验BrdU Ki67CFSUT细胞毒试验 CTL 和细胞介素测定同位素Cr51四联体ELISA流式细胞仪ELISPOT ELISPOT方法 ELISPOT方法是目前国际上广泛应用的较新的体外测定特异性抗体分泌细胞和细胞因子分泌细胞的方法 该方法可在单细胞水平检测淋巴细胞对特异性抗原的反应能力及计数特异性抗原刺激
6、下细胞因子分泌细胞的频数 优点 敏感 能检测产生细胞因子频率极低的细胞 灵敏度高达1 1000000 特异直观 可直接在显微镜下人工计数斑点或通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数 1个斑点代表1个特异性抗体分泌细胞或细胞因子分泌细胞 ELISPOT原理 PBMC 刺激原 孵育16 18h或40 48h ELISpot结果 阴性对照 阳性对照 样本孔 样本孔 图中的每个斑点代表一个能分泌IFN 的抗原特异性CD4 T细胞或CTL T细胞免疫功能与感染 T细胞免疫功能的抗感染作用正常人的免疫功能T细胞免疫的抗感染作用T细胞免疫功能的测定T细胞亚群T细胞功能T细胞免疫功能测定的临床意义 T细胞免
7、疫功能与感染 细胞免疫功能测定的临床意义 HIV感染和艾滋病其它各种感染性疾病 病毒感染 SARS HBV HCV EBV CMV HFRS HFMD 结核病 真菌感染 肿瘤和化疗病人的免疫功能监测器官移植病人的免疫监测自身免疫病和过敏性疾病 细胞免疫功能与感染 细胞免疫功能测定的临床意义 中国HIV AIDS的免疫病理改变和免疫重建 艾滋病的主要免疫病理改变 CD4 T细胞数的减少 CD4 T功能的减低 异常的细胞免疫激活 HIV感染的自然史 CD4细胞 cell mm3 800400 急性感染期 无症状期 艾滋病前期和艾滋病期 CD4 病毒载量 抗HIV的CTL HIV抗体 HIV AID
8、S患者淋巴细胞亚群与正常对照比较 计数 个 mm3 比例 数值以中位数 上四分位数 下四分位数 表示 与正常对照组相比存在显著差异P 0 001 与正常对照组相比存在显著差异P 0 021 早中晚3组 患者淋巴细胞亚群的比较 组与 组相比P 0 001 组与 组相比P 0 001 组与 两组均存在显著差异P 0 001 组两组无显著差异 计数 个 mm3 比例 数值以中位数 上四分位数 下四分位数 表示 HIV AIDS的免疫病理改变 选择性纯真T4细胞的减少 正常人 HIV感染者 AIDS病人 HIV AIDS的免疫病理改变 T4细胞辅刺激信号受体的表达减少 正常人 HIV感染者 AIDS病
9、人 CD28 T细胞辅刺激信号受体 HIV AIDS的免疫病理改变 异常的T细胞免疫激活 AIDS病人 HIV感染者 正常人 中国艾滋病病人的免疫改变特点 艾滋病病人有选择性的纯真T4细胞减少 CD4 CD28 是细胞免疫功能的标记指标 CD8 CD38 亚群是疾病进展和病毒复制的预测指标 HIV感染当CD4 T细胞计数低于200个 mm3时 CD28表达下降较感染早中期更为严重 纯真CD4 T细胞减少的速率较感染早中期明显加快 异常的免疫激活更为严重 T细胞免疫功能检测在SARS诊治中的应用 T细胞检测对SARS诊断的意义 SARS病人CD4 细胞 98 和CD8 80 细胞同时减少 发生在发病一周内 有些发生在胸片改变之前 T细胞检测有助于SARS的早期诊断 细胞免疫功能与感染 细胞免疫功能测定的临床意义 其它病毒感染结核病真菌感染 T细胞免疫功能与感染 细胞免疫功能测定的临床意义 HIV感染和艾滋病其它感染性疾病 病毒感染 HBV HCV EBV CMV HFMD HFRS 结核病 真菌感染 肿瘤和化疗病人的免疫功能监测器官移植病人的免疫监测自身免疫病和过敏性疾病 Thanks
