1、广州中医药大学中药学院本科毕业论文（设计）开 题 报 告题目：制川乌、制草乌配方颗粒的质量标准研究年级专业 2010 级中药学学 号 2010031083姓 名 王婷指导教师 严萍教师单位 中药资源科学与工程研究中心填表日期 2014 年 2 月 10 日中 药 学 院 本 科 毕 业 论 文 （ 设 计 ） 开 题 报 告学生姓名 王婷 学号 2010031083年级专业 2010 级 中药学 专业指导老师 严萍学历职称 副研究员工作单位 中药资源科学与工程研究中心论文题目 制川乌、制草乌配方颗粒的质量标准研究选题依据与研究意义：中药配方颗粒是以符合炮制规范的中药饮片为原料，经现代工业提取、
2、浓缩、干燥、制粒而成的中药系列产品，作为新的饮片形式替代中药饮片供临床辩证论治、随证加减、配方使用 1。中药配方颗粒具有剂量准确、卫生、即冲即服和贮存携带方便等特点,克服了传统中药饮片调配称量不够准确、服用剂量不易掌握、易污染、临床用煎煮候药时间较长和携带不方便等不足 2。虽然中药配方颗粒比传统中药饮片有许多优势,但配方颗粒没有了传统饮片赖以判别优劣的外形、气味等性状特征，为保证具有传统饮片水煎剂的效能，完善的质量标准显得尤为重要 3。目前有 500 多种中药配方颗粒制定了质量标准,但多为企业自己或委托有关科研单位按照或参照中国药典制定。国家正在出台中药配方颗粒的管理办法,质量标准体系的建立也
3、在进行之中 4。川乌为毛茛科植物乌头的干燥母根，草乌为毛茛科植物北乌头的干燥块根，均为临床常用的祛风湿、止痛类中草药，具有十分悠久的历史。二者常相互配伍使用，用于治疗风寒湿痹、诸痛等证。临床应用广泛，疗效显著。川乌、草乌生品有大毒，须经炮制加工使其所含双酯类生物碱成分水解而减毒后方可入药。其中生物碱是主要有效成分，具有抗炎、镇痛、镇静、解热、免疫抑制、抗肿瘤作用及强心、降血压、扩张血管等作用，具有较高的药理活性和药用价值。制川乌和制草乌两者都含有乌头碱、次乌头碱等生物碱类物质，是药材主要有效成分，也是剧毒成分。因炮制方法、产地及采收时间不同，其剧毒成分含量相差甚大。川乌和草乌原植物基源相近、饮
4、片特征相似，功效主治相近，炮制原理相同，二者均含有相同剧毒类生物碱成分，二者常相互配伍使用，但二者在毒性和用法用量等方面的差异比较明显，因此，二者很有必要放在一起研究。配方颗粒具有现代化大批量生产的特点，但目前尚未有文献报道制川乌制草乌相关的质量标准研究，川乌草乌作为临床应用广泛的毒性药，对其含有的剧毒类生物碱含量的控制是非常有必要的。为保证制川乌和制草乌配方颗粒的临床用药安全，建立和完善这两种配方颗粒的质量标准显得尤为重要。因此，本实验对中药制川乌制草乌配方颗粒的质量进行分析，建立专属性强、重现性好的中药配方颗粒质量控制方法，为其配方颗粒的质量控制提供理论依据，提高其质量控制水平。文献综述（
5、结合阅读的参考文献，概述国内外研究现状及发展趋势，要求不少于 1200 字）：川乌、草乌均为临床常用药,分别来源于毛茛科植物乌头 Aconrtum carmichaelii Debx.的干燥母根；草乌为毛茛科植物北乌头 Aconitum kusnezoffii Reichb.的干燥块根。 始源于 神农本草经,早在 2000 年前就为我们祖先所了解。两者功效相似,具有祛风除湿，温经止痛的功效。现代药理研究表明,川乌、草乌均具有抗炎、镇痛、心血管系统、免疫系统、抗癌、降血糖等作用。川乌、草乌都属于毒性药材, 用药剂量与中毒剂量接近,使用不当容易导致严重心律失常与休克,甚至中毒死亡。其中所含的主要有
6、效成分为剧毒的双酯型乌头生物碱,如乌头碱(aconitine)、次乌头碱 (hypaconitine)、中乌头碱 (mesaconitine)。在炮制加工过程中,其双酯型生物碱会水解去掉一个酯基,转化成单酯型乌头生物碱,如苯甲酰乌头原碱(benzoylaconine)、苯甲酰次乌头原碱(benzoylhypaconine)和苯甲酰新乌头原碱(benzoylmesaconine),或继续水解去掉两个酰基转化为乌头原碱(aconine)。炮制水解使得川乌、草乌的毒性大大降低,但其药理活性亦随之减弱或消失 20。这就要求建立能够同时兼顾川乌、草乌安全性和有效性的科学、量化的质量控制标准。为保证临床用
7、药的安全性与有效性，必须控制生物碱含量，文献 1518 多报道对川乌、草乌中的双酯型生物碱（乌头碱、次乌头碱、新乌头碱）进行分离测定，孙兰 19等采用 HPLC 法同时测定附子中 6 种单酯和双酯型生物碱，药典也针对双酯型生物碱对制川乌、制草乌规定了限量检查项 15，同时对制川乌、制草乌中单酯型生物碱（苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头碱、苯甲酰新乌头碱）进行了含量测定。因此，以乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头碱、苯甲酰新乌头碱为指标性成分，对制川乌、制草乌配方颗粒进行定性与定量研究，是评价其安全性与有效性的重要手段。1.植物及药材性状1.1 原植物特征比较川乌 草乌来源 毛
8、茛科植物乌头 Aconitum Carmichaeli Debx 的干燥母根( 主根)毛茛科植物北乌头 Aconitum kusnezoffii Reichb 的干燥块根形态 多年生草本，高 60 120cm多年生草本，高 70 150cm根 块根通常 2 个连生，纺锤形至倒卵形，外皮黑褐色; 栽块根常 2 5 块连生，倒圆锥形，长 2.5 5cm，外皮黑褐培品的侧根( 子根) 甚肥大，直径达 5cm色茎 茎直立或稍倾斜，下部光滑无毛，上部散生贴伏柔毛茎直立，光滑叶 叶互生，革质，有柄; 叶片卵圆形，宽 512cm，3 裂几达基部，两侧裂片再 2 裂，中央裂片菱状楔形，先端再3 浅裂，裂片边缘
9、有粗齿或缺刻叶互生，有柄; 叶片近于革质，全形为卵圆形，长 614cm，宽 89cm，3 全裂，裂片菱形，再作深浅不等的羽缺刻状分裂，最终裂片线状披针形或披针形，先端尖，二面均光滑，或有时微被毛花 总状圆锥花序，花序轴有贴伏的柔毛; 萼片 5，蓝紫色，外被微柔毛，上萼片盔形，长 15 18mm，宽约 20mm，侧萼片近圆形; 花瓣2，无毛; 雄蕊多数，花丝下半部扩张成宽线形的翅; 心皮 35 个，离生，密被灰黄色的短绒毛总状花序，或有时为紧缩的圆锥花序; 花萼 5，紫蓝色，上萼片盔形，长 1.52cm，侧萼片长 1.4 1.7cm; 花瓣 2，无毛，有长爪，距长 1 4mm; 雄蕊多数，无毛;
10、 子房 5 个，稀有 34 个，无毛，花柱与子房等长果 蓇葖果长圆形，具横脉，花柱宿存，芒尖状。花期 67月。果期 78 月蓇葖果长 12cm，种子有膜质翅，花期 7 8 月，果期89 月1.2 饮片特征比较川乌 草乌形态 呈不规则的圆锥形，稍弯曲，中部多向一侧膨大，顶端常有残存的茎基，长 2cm 7.5cm，直径 1.2cm 3.5cm呈不规则长圆锥形，略弯曲，下端狭尖。长 2cm 7cm，直径 0.6cm 1.8cm。顶端常有残茎和少数不定根残基，有的顶端一侧有一枯萎的芽，一侧有一圆形或扁团形不定根残基表面 表面棕褐色或灰褐色，稍皱缩，散生有小瘤状突起的侧根及除去子根后的痕迹表面灰褐色或黑
11、棕褐色，皱缩，有纵皱纹、点状根痕和数个瘤状侧根，习称“钉角” 。无摘取附子的痕迹质地 质坚实，不易折断 质坚硬断面 横切面粉质，类白色或浅灰黄色。可见多角形的形成层环纹断面灰白色或暗灰色，有裂隙。形成层环多角形或类圆形，髓部较大或中空气味 气微，味辛辣而麻舌 无臭，味辛辣、麻舌 52.化学成分研究川乌及草乌中共同的化学成分有：双酯型生物碱，如乌头碱（Aconitine） 、新乌头碱（Mesaconitine） 、次乌头碱(Hypaconitine)；胺醇类生物碱，如尼奥灵(新乌宁碱，Neoline) 、塔拉乌头胺（ Talatizamine） ；二萜类生物碱，如北乌碱（Beiwutine） 、
12、去氧乌头碱（Deoxyaconitine ） 。从毒性角度来看，乌头类中药中的主要毒性成分为双酯型生物碱，单酯型生物碱和胺基醇型生物碱。其中双酯型生物碱的毒性最大，主要有乌头碱、新乌头碱和次乌头碱三种，属于难溶于水的脂溶性成分；单酯型生物碱是双酯型生物碱 C8 位上的乙酰基水解失去一分子乙酸后的产物。属于亲水性成分，毒性较小，为双酯型生物碱的 1/2000；胺基醇型生物碱是酯型生物碱 C14 位上苯甲酯酰基水解失去一分子苯甲酸后的产物，属强亲水性成分，毒性甚微，仅是双酯型生物碱的 1/2 0001/4 000。通常认为这三类生物碱既是乌头类中药的有效成分，也是它们的毒性成分 6。制川乌、制草乌
13、分别是川乌与草乌的炮制品，经炮制后，双酯型生物碱转化为单酯型乌头碱或胺醇型乌头原碱，毒性大大降低，药效也随之变化。川乌与草乌炮制方法相同，据文献记载，二者的炮制方法都有 70 余种，当代有蒸、煮、黑豆甘草煮、生姜豆腐煮等炮制方法。2005、2010 年版中国药典一部制川乌、制草乌项下的炮制方法为：取净川乌，大小个分开，用水浸泡至内无干心，取出，加水煮沸 46h(或蒸 68h)，至取大个及实心者，切开内无白心，口尝微有麻舌感时，取出，晾至六成干，切片、干燥 15。但由于地域及用药习惯差异，不同地方炮制工艺各异。3.药理作用研究证明,乌头类及其复方制剂具有镇痛、抗炎、对免疫功能等作用。3.1 镇痛
14、黄衍民 7等观察乌头注射液镇痛作用的强弱及其药效等过程,用热板法测定小鼠疼痛反应的潜伏为痛阈指标,以吗啡为阳性对照药,进行药物镇痛作用的研究,具有肯定的镇痛、药效强度较高、时间长、其药效动力等参数可作临床用药参数。3.2 抗炎乌头碱的抗炎作用研究比较全面,从早期的乌头汤抗炎作用,从川乌中提取的总碱也发现显著地抑制角叉菜胶致小白鼠足肿胀,用总碱给大鼠灌胃给药,在抗炎方面有良好的量效关系数。3.3 对免疫功能的影响王贤等以小鼠免疫器官胸腺和脏为免疫指标,以及小鼠溶血斑细胞形成和小鼠溶血生成的影响三个方面进行免疫功能的研究,低剂量乌头碱 76.8Lg/kg 对实验小鼠胸腺和脏的重量有减轻趋势,表明乌
15、头碱对免疫器官的实体有抑制作用,从而降低免疫功能。汪泸双 8等认为,乌头属植物抗炎、镇痛和免疫抑制 PGE 合成环节,可以排除依赖垂体- 肾上腺轴的关系,其镇痛作用与脑内外 5-HT 水平有密切关系,而对免疫抑制作用则通过 T 细胞及其亚群产生抑制,从而影响 B 细胞功能。以上机理是乌头类用于抗风湿的药效学基础。4临床应用主要治疗痛证。孟氏 9认为乌头类中药具有显著镇痛作用,临床上常用于各种痛证如头痛、心痛、脘腹胁痛、痹痛、癌痛。此外,陈氏 10用生川乌、生草乌各 30 g,桂枝 15 g,研为细末,用布包熨压痛点,治疗坐骨神经痛效果满意。张氏用类风湿灵由桂枝、附子等中药组成,治疗类风湿性关节
16、炎,效果明显。杜氏 11 认为临床治疗骨质增生症,原发性高血压 3 期雷诺氏病,慢性肾炎,过敏性鼻炎,过敏性肠炎,阿狄森氏综合征等时,凡经辨证认为具有阳虚体征者,均不同程度地使用乌头、附子,效果满意。5中药配方颗粒的研究进展中药配方颗粒作为颗粒化的“固体汤剂”免于煎煮，且携带、贮藏、生产和运输各方面都比较方便，适应现代生活节奏，在市场竞争中有明显的优势。中药的汤剂固体化是传统中药现代化的一个方向。相对于海外流行的复方中药经典方制成的浓缩中药颗粒剂，中药配方颗粒从理论和实践上更符合传统中医辨证施治随症加减的用药习惯，对传统中药的可持续发展具有一定的促进和推动作用，有利于中药的普及和推广 3。在日
17、本、韩国和台湾等兴起的中药配方颗粒,虽然名称各异,用法不同,但均是作为中药临床调剂的一种形式,在某种程度上代替了中药饮片。在我国,中药配方颗粒的起步较晚,刚一起步就遭到前所未有的反对和质疑,风风雨雨的近 10 年间,中配方颗粒从”婴儿”成长为“青少年”,其名称也从”中药免煎颗粒”、 ”免煎中药饮片”、 “中药饮片浓缩颗粒”这些 ”乳名”中脱颖为中药配方颗粒 12。近年来有关于中药配方颗粒的研究 4有：制备工艺的研究，质量标准的研究，中药复方的单煎合并液与合煎液的对比研究等。虽然中药配方颗粒近年来得到了一定的肯定，但也应注重这样一些问题 12：药材品种问题，炮制品种问题，饮片入选标准问题，提取工
18、艺和制剂成型问题，中药配方颗粒的质量标准，药效学和安全性评价问题，市场监督问题等。目前制川乌、制草乌配方颗粒还没有统一的质量标准，作为临床应用广泛的毒性药，如果没有质量标准来控制剧毒类生物碱的含量，在临床应用中会存在一定的隐患。6.结语制川乌制草乌作为川乌草乌的炮制品，在临床应用中有一定的广泛性，而它们的炮制程度直接影响它们的成分，它们的毒性程度，因此，需要选择合适的指标性成分，对制川乌制草乌配方颗粒中的成分进行定性与定量研究，保证临床用药安全与有效。课题的研究内容、思路、方法及手段：中药配方颗粒的质量控制与标准研究主要集中在定性鉴别和定量分析两个方面3。现代色谱技术是中药配方颗粒质量控制的主
19、要手段。本次实验将围绕这两个方面，参考中国药典2010 年版一部和相关文献，对制川乌和制草乌这两味同科不同属的配方颗粒中的 6 种乌头类生物碱进行薄层鉴别，限量检查与含量测定，为进一步完善配方颗粒的质量标准提供依据。乌头类生物碱的研究：从毒性角度来看，乌头类中药中的主要毒性成分为双酯型生物碱，单酯型生物碱和胺基醇型生物碱。其中双酯型生物碱的毒性最大，主要有乌头碱、新乌头碱和次乌头碱三种，属于难溶于水的脂溶性成分；单酯型生物碱是双酯型生物碱 C8 位上的乙酰基水解失去一分子乙酸后的产物。属于亲水性成分，毒性较小，为双酯型生物碱的 1/2000；胺基醇型生物碱是酯型生物碱 C14 位上苯甲酯酰基水
20、解失去一分子苯甲酸后的产物，属强亲水性成分，毒性甚微，仅是双酯型生物碱的 1/2 0001/4 000。通常认为这三类生物碱既是乌头类中药的有效成分，也是它们的毒性成分 6。2010 年版中国药典一部川乌、草乌项下,就对川乌、草乌中新乌头碱、次乌头碱和乌头碱等 3 种双酯型生物碱的含量限度作出了明确的要求,其中川乌在0.5 1.7mgg-1 之间,草乌为 15 mgg-1 之间。 中国药典制川乌、制草乌项下乌头碱、次乌头碱及新乌头碱含量限度为含乌头碱、次乌头碱及新乌头碱总量不得过 0.040%，制川乌、制草乌的最大日服用量为 3 g，折算后乌头碱、次乌头碱及新乌头碱总量约为 1.2 mg，即为
21、最大安全日服量 21。定性鉴别的研究：配方颗粒失去了原药材的性状，采用薄层色谱法更适合配方颗粒的定性鉴别。查阅中国药典和相关文献，以制川乌制草乌中的单酯型生物碱（苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头碱，苯甲酰新乌头碱）作为对照品，进行薄层色谱鉴别。根据生物碱碱化游离后溶于有机溶剂的性质，比较加相同量氨试液的乙醚和乙酸乙酯作为提取溶剂，在相同的展开剂中有相同的展开效果，因此，考虑到乙醚的易挥发性和不安全性，结果以乙酸乙酯作为提取溶剂更适合供试品溶液的制备。定量鉴别的研究：乌头碱类含量测定的方法有：酸碱中和法 13，分光光度法 14，薄层扫描法，高效液相色谱法 15。但酸碱中和法适用于川乌、草乌、附子单味
22、药材乌头生物碱含量测定，不适合用于测定含有其他碱性成分的复方制剂；紫外分光光度法一般只能测定乌头生物碱总量；薄层扫描法不仅可用于单味药材川乌、草乌、附子中乌头碱的含量测定，还广泛应用于含有川乌的复方中药制剂中酯型生物碱含量测定；高效液相色谱法可分别测定乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的含量，且操作简便，结果准确、重现性好，是目前复方中药制剂中乌头类生物碱含量测定的首选方法 6。研究方法及手段：1. 提取方法：考察不同取样量（1g,1.5g） 、提取时间（20min,30min,40min） 、提取溶剂(乙醚，乙酸乙酯)、溶剂量（25ml,100ml）下的提取效率2. 薄层鉴别：按照药典方法，考虑到乙
23、醚易挥发性与不安全性，以乙酸乙酯作为提取溶剂，对 3 种单酯型生物碱（苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱）进行 TLC 研究3. 薄层耐用性考察：温湿度考察，不同产家薄层板考察4. 限量检查；在药典和相关文献的指导下，摸索色谱条件，采用 HPLC 技术对 3 种单酯型生物碱（苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱）进行限量检查。5含量测定：按照药典方法，比较减压回收与 40以下回收乙酸乙酯-异丙醇的提取效率，采用 HPLC 技术对 3 种单酯型生物碱（苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱）进行含量测定。6.方法学验证：重复性试验，线性关系考察，精密度试验，稳定性试验，加样回收实验实验流程如下：
