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检测生物组织中还原糖脂肪和蛋白质.doc

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1、检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质一、实验原理(1)鉴定实验设计的理念:某些化学试剂 + 生物组织中有关有机化合物 产生特定的颜色反应。(2)具体原理:可溶性还原糖 + 斐林试剂 砖红色沉淀。脂肪小颗粒 + 苏丹 染液橘黄色小颗粒。蛋白质 + 双缩脲试剂 紫色反应。二、目标要求初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。三、实验材料1.可溶性还原糖的鉴定实验:选择含糖量较高、颜色为白色或近白色的植物组织,以苹果、梨为最好。2.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子,以花生种子为最好。3.蛋白质的鉴定实验:可用浸泡 1d2d 的黄豆种子(或用豆浆、或用鸡蛋蛋白)。四、仪器、试剂1.仪

2、器:双面刀片,试管,试管架 ,试管夹,大小烧杯,小量筒,滴管,酒精灯,三脚架,石棉网,火柴,载玻片,盖玻片,毛笔,吸水纸,显微镜。2.试剂:斐林试剂(0.1g/L 的 NaOH 溶液+ 0.05g/mL 的 CuSO4溶液) ;苏丹染液;双缩脲试剂; 体积分数为 50%的酒精溶液;蒸馏水。五、方法步骤(一) 、还原糖的鉴定1、实验流程:取材加试剂加热观察2、鉴定步骤:选材: 梨:洗净、去皮、切小块,取5g 放入试管中(图1) 加斐林试剂: 2ml(由斐林试剂甲液和乙液充分混合而成,不能分别加入)水浴加热:煮沸 2min观察溶液颜色变化:浅蓝色棕色砖红色。结论:还原糖与斐林试剂在加热煮沸的过程中

3、生成砖红色沉淀(图2) 图1 图2 3、改进后优点简化了用榨汁机榨汁这一步,节省了操作时间,以及对榨汁机的清洗等步骤;另外小梨块可以在实验过程中切取,不需提前切好,不易因时间太长而褐化,从而避免对反应现象的干扰,使实验现象更明显。(二) 、脂肪的鉴定1、实验流程:取材挤压加液观察2、鉴定步骤: 取材:花生种子挤压:在纸上用力按压,显出油斑(图3)加液:在油斑上滴2-3 滴苏丹染液观察:油斑出被染成橘黄色(图4)结论:细胞中的圆形脂肪小颗粒已经被染成橘黄色。图3 图43、实验成功的要点:.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子,以花生种子为最好。该实验成功的关键是获得油斑或只含有单层细胞理想薄片。滴

4、苏丹 染液染液染色2-3min ,不需要用酒精洗去浮色(三) 、蛋白质的鉴定1、实验流程:选材加样加液观察2、实验步骤:选材:鸡蛋白或卵清稀释液或黄豆(浸泡1-2d) 、豆浆、滤液等,加样:取鸡蛋白切成小块,放入试管中。加液: 先加入 A 液(即0.1 g/ml 的 NaOH 溶液) ,约十分钟,再加入双缩脲试剂 B 液(即0.01g/ml 的 CuSO4 溶液 )。观察:在 NaoH 溶液中鸡蛋白逐渐变性成透明的胶状,并开始溶解,加入双缩脲试剂 B 液后溶液变成紫色。图5 图6结论:蛋白质与双缩脲试剂发生紫色反应。3、实验成功的要点:蛋白质的鉴定实验:用鸡蛋蛋白小块,不会因为蛋清液稀释不够而黏附在试管上,试管易清洗。双缩脲试剂的使用,一定要先加入 A 液(即0.1 g/ml 的 NaOH 溶液),再加入双缩脲试剂 B 液(即0.01 g/ml 的 CuSO4 溶液) 。还可设计一只加底物的试管,不加双缩脲试剂,进行空白对照,说明颜色反应的引起是蛋白质的存在与双缩脲试剂发生反应,而不是空气的氧化引起。

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