1、用 2-Ct 法分析 real-time PCR 数据-联合应用 LightCycler Data Analysis 软件和 MS ExcelBy netmee，引用请注明作者。1、打开存取的数据文件，点击2、依次点击 ， ，这是适合 SYBR green 为染料的选项。点击step1：Baseline 下的“change graph settings”小图标 。取消弹出的Customize Graph 选项卡中的 Logarithmis 选项 ，点击“OK”按钮，退出选项卡。3、点击 下的“change graph settings”小图标，取消弹出的 Customize Graph 选项卡
2、中的 Logarithmis 选项 ，点击“OK”按钮，退出选项卡。4、在 选项卡中拖动红色标记线，选取个条曲线都为直线上升部位。5、可以在 选项卡中观察是否需选取的是曲线直线上升部分。观察绿线部分与 S 型曲线交叉的部分是否为直线。6、如果确为直线，则左侧的“Crossing Point ”值为所需要的 Ct 值。7、依次选取下图菜单：将数据导出为文本文件。8、打开所保存的文本文件，如图选取9、将数据粘贴入新建的 excel 文件， “Crossing Point”列即是 Ct 值，删除“Standard ”和“Calculated Concentration”列。10、将目的基因，本例中为
3、“iNOS”的 Ct 值按标本对应剪切入 beta-actin 值右侧一列。分别标记两列数据为“beta-actin”和“iNOS” 。11、设置所有 Ct 值的单元格格式12、数字选项卡，分类选择为数值，点击确定。13、将 E 列（目的基因 Ct 值右侧一列）输入公式 “=D4-C4”，求出目的基因与同管 beta-actin Ct 值之差，即 Ct。14、向下拉复制公式，将Ct 列数值计算出。15、在Ct 列右侧一列插入公式“=POWER(2,(0-E4)” ，此即目的基因相对 beta-actin 的相对表达量，即 2-Ct （2 的-Ct 次方） 。16、在 2-Ct 列右侧插入公式 “=F4/$F$4”，此列即“2-Ct”列，复制公式填满所有标本对应的 2-Ct 空格。17、至此，2-Ct 法计算的各标本目的基因的相对表达量完成，2- Ct 列的数据可以用统计软件进行分析。
