1、Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册目录： 1 系统的组成 系统组成及光路示意图 实物照片说明 2 系统的使用 2.1 开机顺序 2.2 软件的快速使用说明 2.3 显微镜的触摸屏控制 2.4 关机顺序 3 系统的维护 1 系统的组成 激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。 系统组成及光路示意图： 电脑工作站 激光器 电动荧光显微镜 扫描检测单元 实物照片说明： 电动荧光显微镜 扫描检测单元 CO2 培养系统控制器 激光器 电脑工作站 2 系统的使用 2.1 开机顺序 （1）打开稳压电源（绿色按钮） 等待 2 分钟（电压稳定）后
2、，再开其它开关 （2）主开关 MAIN SWITCH “ON” 电脑系统 SYSTEMS/PC “ON” 扫描硬件系统 COMPONENTS “ON” （3）打开 电动显微镜开关 打开 荧光灯开关 （注：具有 5 档光强调节旋钮） （4）Ar 离子激光器主开关 “ON” 顺时针旋转钥匙 至 “” 预热等待约 15 分钟， 将激光器 扳钮 由“Standby”扳至 “Laser run”状态，即可正常使用 （5）打开 电脑开关 ，进入操作系统 注：键盘上也具有 电脑开关 2.2 软件的快速使用说明 （1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件 ZEN 图标 （2）进入 ZEN 界面，弹出
3、对话框： “Start System”初始化整个系统，用于激光扫描取图、分析等。 “Image Processing”不启动共聚焦扫描硬件，用于已存图像数据的处理、分析。 （3）软件界面： 1 功能界面切换：扫描取图（Acquisition） 、图像处理（Processing） 、维护（Maintain） （注：Maintain 仅供 Zeiss 专业工程师使用） 2 动作按钮； 3 工具组（多维扫描控制） ；4 工具详细界面； 5 状态栏；6 视窗切换按钮；7 图像切换按钮；8 图像浏览 /预扫描窗口；9 文档浏览/处理区域；10 视窗中图像处理模块 动作按钮： Single 扫描单张图片、
4、并在图像预览窗口显示。 Start 开始扫描单张图片或一个实验流程（ 1 组图片，如 XYZ、XYT 等） 。 Stop 暂停 /结束扫描。 New 建立一个新图像扫描窗口/文档。 激光连接状况检查 眼睛观察/相机/共聚焦 LSM 光路切换（ZEN 软件界面右上角）： Ocular 通过观察筒用眼睛观察。 （激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛。 ） Camera 光路切换至相机。 LSM 共聚焦扫描成像光路。 显微镜设置： “Ocular” “Light Path” 点击物镜图标，选择物镜 样品聚焦。 透射光控制（Transmitted Light Control） 反射光光闸控制（Ref
5、lected Light Shutter） 荧光激发块选择（Reflector） 共聚焦 LSM 扫描设置 点击“LSM” （ZEN 软件界面右上角） ，系统切换至共聚焦扫描光路： 光路设置： Smart Setup 自动预设光路 选取“荧光探针 ”、 “颜色” 、扫描方法， 应用“Apply”。 （注：Fastest 为最快速扫描，多条激光谱线同时扫描。Best signal 为最佳信号扫描，多条激光谱线顺序扫描。Best compromise 为兼顾速度与信号的折中式扫描。 ） 扫描图像参数设置： 每个通道的精细调节： 包括： （1）Pinhole 的调节（一般设为 1AU。该值越大，则信
6、号越强，但共聚焦图像效果会降低。原则上， 在保证图像质量的前提下，该值越接近于 1AU 越好） ； （2）Master Gain 的调节（增大则信号和噪音都增强，减小则信号和噪音均减小。原则上，在保证图像质量的前提下，Gain 值越小越好） ； （3）Digital Offset 的调节（可扣除背景噪音，但标本信号也有一定程度的扣除。原则上，在保证图像质量的前提下，Digital Offset 值越接近于 0 越好） ； （4）Digital Gain 的调节（增大则信号和噪音都增强，减小则信号和噪音均减小。原则上，在保证图像质量的前提下，Gain 值越接近于 1.01.2 越好） ； （5）
7、另外，对于每个通道，需要灵活调节激光的强度（激光强度越高，则信号越强，但噪音也相应增强，同时标本更容易被漂白或淬灭。原则上，在保证图像质量的前提下，激光强度越低越好。 ） 选择可连续扫描、一边预览图像效果、一边精细调节各个通道的扫描参数。 如果预览图像的效果可以，则先“Stop” ，再点击“Single” 或“Start” 即可完成图像的扫描。 图像的保存： 三种方法： （1） “File”菜单下， “Save” 或者“Save AS”。 （2）点击右下角按钮。 （3）点击工具栏按钮。 （如图所示） 另外，通过“File” 菜单下的“Export” ，也可将图像以其它格式输出。 2.3 显微镜
8、的触摸屏控制 显微镜可由 TFT 液晶触摸屏进行控制： 由触摸屏“Home/主页” 进入“Control/显微镜控制”界面， 触摸屏常用控制界面： TFT 触摸屏控制 直观、便捷。 Objectives 物镜控制 TL 透射光光闸 RL 反射光光闸 Reflector 荧光激发块控制 荧光观察时，需要选择相应的荧光激发块 （或者激发波长、发射波长相近的荧光激发块） Light path 光路设置 触摸控制，可将光路切换至“Eyepiece” 目镜观察筒，或者将光路切换至左侧共聚焦光路“Sideport L”，或者将光路切换至前侧“Frontport”相机。 2.4 关机顺序： （1）关闭软件：
9、主菜单“File” “Exit”，退出共聚焦软件 ZEN。 （2）关闭主电脑操作系统、显示器电源。 （3）关闭 荧光灯电源 。 （4）关闭 电动显微镜电源。 （5）关闭 Ar 激光器： 先将 扳钮 从 “Laser run” 扳到 “Standby” 状态； 再将 钥匙 逆时针从“ ”旋转到“O” 状态； 等待约 8-10 分钟、激光器风扇停止转动后（切记！） ， 将 主开关 按钮按到“OFF”。 （6）扫描硬件系统 COMPONENTS “OFF” 电脑系统 SYSTEMS/PC “OFF” 主开关 MAIN SWITCH “OFF” （7）等 灯箱 充分冷却后，再放防尘罩。 （8）如果系统
10、长时间（超过 5 个小时）不使用，则关闭稳压电源。 3 系统的维护 主要注意事项如下： （1）打开稳压电源时，应等待 2 分钟（电压稳定）后，再开其它开关。 （2）严格遵守激光器 的开、关流程（详见“2.1、2.4 开/关机顺序”） 。 （3）如果使用过油镜 ，或者物镜表面较脏，则需用擦镜纸 擦干净物镜的前表面（清洁液使用无水乙醇和无水乙醚的混合液，混合比例：无水乙醇 30%、无水乙醚 70%） 。 （4）不使用荧光时，不打开荧光灯。避免频繁开/ 关荧光灯。 （5）必须等灯箱充分冷却后，再小心地盖上防尘罩。 （6）显微镜可由TFT 触摸屏控制，使用触摸屏时注意： 手指保持清洁、干燥状态，并且为了保证他人使用安全，触摸时严禁配戴有可能接触污染物或危险样品的手套； 触摸屏已足够灵敏，不要大力按压触摸屏； 不要旋转、插拔触摸屏。 （7）刻录图像数据资料：应使用刻录光驱刻录，实验前应准备好刻录光盘。 切记：为了防止计算机病毒，严禁在共聚焦电脑上使用 U 盘、硬动硬盘或者上网！ （8）未经授权，严禁自行安装任何软件！ （9）实验室温度应保持在 222，湿度 40%-60%。 （10）避免空调直接对着显微镜吹风。 （11）整个实验过程应注意保持显微镜周围环境清洁。
