1、1孙婷 主管药师 药物分析、药品检验 您好！本文已通过本刊编辑部和有关专业审稿人审阅，意见如下：1. 本文格式请严格按照本刊第三周刊（原第四周刊） “药物分析与检定” （原“基本药物检定” ）栏目已刊出文章和本刊稿约（点击中国药房网首页底部“投稿须知”链接可查看）要求加以规范；2. 请标明本文的中图分类号和文献标志码；3. 本文所有量符号（如 t、V、m 等） 、变量（如 X、 Y 等）和统计学符号（如 P 等）均请以斜体表示；4. 文中所有数字及其单位之间请用 1 个空格隔开，如 8 h、10 ml、20 L；5. 文中所有数字（包括图表） ，小数点前或后每 3 位请用 1 个空格隔开，如
2、1 000、0.000 1；6. 文中首次出现的英文缩写均请写明中文含义；7. 本文所有单位符号请按本刊要求修改，如 mgL-1应改为 mg/L，具体可参考本刊最新稿约；8. 文中如果有表格，请一律做成网格表的形式；9. 本文参考文献请严格按照本刊要求在文中引用处按顺序标注，并在文末以规范的格式列出，同时核对无误；10. 请仔细通读全文，对表述不准确、不清楚、不完整、不流畅或不规范之处加以全面修改和完善，进一步提升文章质量；11. 文中的标注和提示修改时请特别注意；12. 全文图表、数据、公式、符号、名称等请仔细核对，确保无误；13. 修改完毕务请再次复核全文，确保无遗留问题；14. 请补充或
3、完善第一作者个人简介（如果有通讯作者也需要） ，含学历、职称、研究方向、办公和移动电话、E-mail 和详细的通讯地址；15. 如需变更作者（增加、删减、调整顺序） ，请开具单位证明寄给我们；16. 修改稿电子文件仍请上传至系统中；17. 请将稿件处理系统附件中的著作授权书打印填写后同单位介绍信（介绍信上必须有“本文未一稿多投，内容真实可信，不涉嫌抄袭”类似的语句，如果没有需要您手写添加）以及一份修改稿一起寄给我们存档，若本文属于课题项目，还需一并提交基金证明材料复印件。谢谢！2孙婷 主管药师 药物分析、药品检验 高效液相色谱法测定洛伐他汀分散片的有关物质孙 婷 1 ，杨浩天 2 ，刘红莉 1
4、， 盖宾杰 1， 耿 韫 1 ，盖 成 1（1.河北省药品检验研究院 河北 石家庄 050011 2.河北医科大学药物分析教研室 河北 石家庄 050017）摘 要 目的： 建立测定洛伐他汀分散片中洛伐他汀有关物质含量的方法。方法： 采用高效液相色谱法。色谱柱为 C18(250 mm4.6 mm, 5 m)；以 0.01磷酸溶液为流动相 A，乙腈为流动相 B，流速为 1.0 ml/min，进行梯度洗脱；柱温为 40；检测波长为 238 nm。结果： 回归方程 A =3.3104 C 8.010 -9， 线性范围为 17.5700 g/ml ( r= 0.999 9) ，该方法平均回收率为 99
5、.3%100.7% ，RSD 为 0. 4%( n= 9) 。结论： 方法重现性好，准确度高，适于洛伐他汀分散片的质量控制。 关键词 高效液相色谱法；洛伐他汀分散片；有关物质 中图分类号 R927. 2 文献标识码 A Determination of lovastatin Related substances in lovastatin dispersible tablets by HPLCSun ting1，Yang hao tian 2 ，Liu hong li 1， Ge bin jie1， Geng yun1， Ge cheng1 ( 1. Hebei institute for d
6、rug control , shijiazhuang 050011, China;2 Department of pharmaceutical Analysis,School of Pharmacy,Hebei Medical University , shijiazhuang 050011, China)ABSTRACT:OBJECTIVE HPLC method was described to determine lovastatin related substances in lovastatin dispersiblet ablets. METHODS C18 column (250
7、mm4.6mm, 5m) ; Using gradient elution, The A of the mobile phase of 0.01% phosphoric acid solution, the B of the mobile phaseacetonitrile, flow rate 1.0ml/ml; column temperature is 40 ; the detection wavelength was 238 nm. RESULTS Calibration curve was linear over the range of 17.5700g/ml ( r= 0.999
8、 9); for potency assay the mean recovery was 99.3%100.7% with RSD as 0.4% ( n=9) . CONCLUSION The method is sensitive, accurate and rapid. It is suitable for quality control of simvastatin disper sible tablets.KEY WORDS: HPLC; lovastatin dispersible tablets; determination洛伐他汀（Lovastatin）为美国默克公司研发，是
9、20 世纪 80 年代上市的第一个他汀类调血脂药，由于其独特的疗效，被誉为治疗心血管系统疾病的里程碑，深受广大患者的欢迎。该药主要作用部位在肝脏，在体内可竞争性地抑制胆固醇合成过程中的限速酶羟甲戊二酰辅酶 A 还原酶，使胆固醇合成减少，并使低密度脂蛋白 受体合成增加，从而使血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平降低，由此对动脉粥样硬化和冠心病具有防治作用。同时，该药3孙婷 主管药师 药物分析、药品检验 还可降低血清三酰甘油水平和增高高密度脂蛋白水平 1。洛伐他汀系发酵产品，发酵液中含有的与其结构功能相似的同类化合物较多，在现有的提取工艺下，洛伐他汀原料药中常含有美伐他汀、加氢洛伐他汀、脱水洛伐他
10、汀和洛伐他汀二聚体等杂质。同时，由于其片剂在生产过程中需经过混料、压片等工艺，可能使原料药降解或带入一些其他杂质。通过对洛伐他汀分散片的研究发现，其中有关物质无论是单个杂质还是杂质总和，比照原料药都有所增加，故测定该制剂中的有关物质对于控制该制剂的生产和贮存期质量有十分重要的意义。为此，参考相关文献 2-8，本试验建立了以高效液相色谱（HPLC ）法测定洛伐他汀分散片的有关物质的方法。1 材料1.1 仪器LC-20AT 型岛津高效液相色谱仪，包括 LC-20AT 二极管阵列检测器（DAD）及Labsolution色谱工作站；SartoriusBP211D 型电子天平（德国 Sartorius
11、公司） ；X105 型电子天平（瑞士Mettler 公司） 。 1.2 药品与试剂甲醇、乙腈为色谱纯，来源：德国 Fisher Scientific 公司；水为超纯水；磷酸为优级纯 来源：天津市风船化学试剂科技有限公司。洛伐他汀对照品( 中国药品生物制品检定所, 批号 100600-200502, 纯度 99.4% ) ；洛伐他汀分散片( 山东某企业有限公司，批号：090101、090102、090103)；洛伐他汀原料药(山东某企业有限公司, 批号 00323026) 。2 方法与结果2.1 色谱条件 色谱柱：Waters XTerraMS C18 色谱柱（250mm4.6 mm， 5m）
12、；流动相：流动相 A 为0.01磷酸溶液，流动相 B 为乙腈，采用梯度洗脱（梯度洗脱程序见表 1） ；流速：1.0 ml/min；检测波长：238nm；柱温：40；进样量：10l 。表 1 梯度洗脱程序Tab 1 Gradient elution program时间（分钟） 流动相 A(%) 流动相 B(%)6 40 6024 5 954孙婷 主管药师 药物分析、药品检验 2.2 溶液的制备2.2.1 供试品溶液的制备 精密称取样品细粉适量，加乙腈溶解并稀释制成每 1ml 中约含洛伐他汀 0.4mg 的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液。2.2.2 对照溶液的制备 精密量取“2.2.1”项下供
13、试品溶液 1ml，置于 100ml 量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。2.2.3 空白辅料溶液的制备 精密称取生产厂家处方所有辅料适量，按“2.2.1”项下方法进行操作，制备空白辅料溶液。2.2.4 对照品溶液的制备 精密称取洛伐他汀对照品适量，加乙腈溶解并稀释制成每 1ml 中约含洛伐他汀 2mg 的溶液，作为对照品溶液。2.2.5 对照品储备溶液的制备 精密称定洛伐他汀对照品 350 mg，置于 100 mL 量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度, 摇匀后作为对照品储备溶液。2.3 专属性试验2.3.1 辅料干扰试验 取“2.2”项下的空白辅料溶液、对照品溶液和供试品溶液适量，分别按
14、“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图 1。结果表明，供试品色谱在与对照品色谱相应位置显相同的色谱峰，各成分与主成分间分离良好。 34 5 9540 40 6050 40 605孙婷 主管药师 药物分析、药品检验 图 1 高效液相色谱图A.对照品 B.供试品 C. 空白辅料Fig 1 HPLC chromatogramsA. reference substance B. test sample C. blank control2.3.2 破坏试验（1） 酸破坏样品 取洛伐他汀原料药 10mg，加入处方比例的辅料，置于 25ml 量瓶中，加乙腈 2ml 溶解，加 0.1mol/L 盐酸
15、溶液 1ml，室温放置 10 min，用 0.1mol/L 氢氧化钠溶液调至中性，加乙腈稀释至刻度，摇匀。（2）碱破坏样品 取洛伐他汀原料药 10mg，加入处方比例的辅料，置于 25ml 量瓶中，加乙腈 2ml 溶解，加 0.1mol/L 氢氧化钠溶液 0.1ml，室温放置 10 min，用 0.1mol/L 盐酸溶液调至中性，加乙腈稀释至刻度，摇匀。（3）高温破坏样品 取洛伐他汀原料药 10mg，加入处方比例的辅料，在 150下加热 3 h，转移至 25ml 容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。6孙婷 主管药师 药物分析、药品检验 （4）光照破坏样品 取洛伐他汀原料药 10mg，加入处方
16、比例的辅料，置于 25ml 量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。在紫外灯（4500Lx ）中放置约 24h。（5） 氧化破坏样品 取洛伐他汀原料药 10mg，加入处方比例的辅料，置于 25ml 量瓶中，加乙腈 2ml 溶解，加 30%过氧化氢溶液 2ml，室温放置 6 h，加乙腈稀释至刻度，摇匀。（6）未破坏样品 精密称取洛伐他汀分散片原料药 10mg，置于 25ml 量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。作为未破坏样品溶液。分别取上述各破坏样品溶液和未破坏样品溶液10l，注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图 2。由图2 可见，破坏后的样品与未破坏的样品图谱
17、比较，主峰面积有所下降，杂质峰有所增多，其中高温破坏杂质较多，强光破坏降解产物较少。各破坏条件下辅料均未对杂质分离造成影响，主峰与相邻杂质之间分离度均大于 1.5，符合分离度要求，表明本方法专属性良好。7孙婷 主管药师 药物分析、药品检验 8孙婷 主管药师 药物分析、药品检验 图 2 专属性试验高效液相色谱图A.酸破坏样品 B.碱破坏样品 C.高温破坏样品 D.氧化破坏样品E.光破坏样品 F.未破坏样品；1.洛伐他汀Fig 2 HPLC chromatograms of specificity testA.sample treated with acid B. sample treated w
18、ith alkaliC. sample treated with high temperature D. sample treated with OxidationE. sample treated with Light F. untreated sample; 1. lovastatin2. 4 线性关系考察 分别精密量取“2.2.5”项下对照品贮备液 0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0ml，置 10ml 量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度摇匀。分别精密量取 10l，照“2.1”项下色谱条件，注入HPLC 仪，记录色谱，以质量分数为横坐标（x） 、峰面积为纵坐标（y） ，进行线性回
19、归，得洛伐他汀的回归方程为 y =3.3104 x 8.010 -9， r= 0.999 9。结果表明，洛伐他汀浓度在17.5700g/ml 范围内均与其峰面积呈良好的线性关系。2. 5 精密度试验 精密量取“2.2”项下对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件重复进样 6 次。结果，洛伐他汀峰面积的 RSD 为 0.3%，表明仪器精密度良好。2. 6 稳定性试验 2.6.1 对照品溶液 精密量取“2.2.2”项下对照品溶液适量，于室温放置0、2、4、6、8、12h 时分别按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果，洛伐他汀按峰面积计算 RSD 为 0.3%，表明对照品溶液在 12h 内质量基本稳
20、定。2.6.2 供试品溶液 按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液（批号：090101） ，精密量取适量，9孙婷 主管药师 药物分析、药品检验 于室温放置 0、2、4、6、8、12h 时分别按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果，洛伐他汀按峰面积计算 RSD 为 0.9%，表明供试品溶液在 12h 内质量基本稳定。2. 7 重复性试验按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液（批号：090101） ，共 6 份，分别精密量取 10l，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果，洛伐他汀按峰面积计算 RSD 为 0.6%。表明该方法的重复性良好。2.8 回收率试验 按处方量取空白辅料 9 份，分别置于
21、50ml 量瓶中，每 3 份精密加入“2.2”项下洛伐他汀对照品储备溶液 4ml、5ml、6ml，分别加乙腈适量，振摇使溶解，并加乙腈稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算回收率，结果见表 1。表 2 回收率试验结果 ( n= 9)Tab 2 The results of recovery ( n= 9)加入量（mg） 测得量（mg） 回收率（%） 平均回收率(%) RSD(%)7.98 8.01 100.387.98 7.97 99.877.98 7.98 100.009.94 9.97 100.309.94 9.89 99.5
22、09.94 9.87 99.3012.03 12.01 99.8312.03 12.11 100.6712.03 12.05 100.17100.0 0.42. 9 样品有关物质测定分别取 3 批样品及 1 批原料各适量，按“2.2”项下方法制备对照溶液和供试品溶液，并按“2.1”项下色谱条件进样测定，采用自身对照法计算洛伐他汀有关物质的含量。结果详见表 3。表 3 有关物质含量测定结果 ( n= 3)Tab 3 Related substances determination results ( n= 3)批号 单个最大杂质（ %） 杂质总和（% ）090101 0.28 0.9409010
23、2 0.23 0.8910孙婷 主管药师 药物分析、药品检验 090103 0.21 0.9200323026 0.20 0.873 讨论3.1 流动相的选择、等度洗脱与梯度洗脱的选择 流动相选择了磷酸和乙腈，有效避免了因缓冲盐沉积对高效液相色谱仪的损耗。且该流动相配制更为便捷，有效提高了检验效率。通过对比试验，表明与等度洗脱相比梯度洗脱能够洗脱出更多的杂质，且杂质之间，杂质与主峰之间分离度均能达到要求。因此，本试验最终选择梯度洗脱方式。3.2 耐用性的考察 分别以 Waters MS C18 色谱柱（5 m， 4.6250mm） 、Agela C18 色谱柱（5 m ， 4.6250mm）
24、、DiamonsilC 18 色谱柱（5 m ， 4.6250mm）3 根不同厂家、不同填料、不同柱长的 C18 色谱柱进行试验，发现均可对洛伐他汀样品进行有效分离，表明本文中建立的洛伐他汀有关物质测定方法耐用性良好。3.3 本研究的价值 经查询，美国药典 37 版、英国药典 2014 版、欧洲药典 8.0 版和日本药局方均未收载该剂型。通过方法学研究，可证明该色谱条件适合测定洛伐他汀分散片的有关物质，能够较好地控制产品质量，保证药品安全性。参考文献1 国家药典委员会 . 中华人民共和国临床用药须知.2005 版R.2005:224. 2 纪红 ,郭威早,严之红. 洛伐他汀对心肌细胞外信号调节
25、激酶信号传导水平及心脏营养素-1 表达的影响J. 中国临床医学, 2011 ,6 , 18(3):3103 黄孝闻,陈平华,陈莉君,等. 法测定水溶性红曲中 的含量J. 浙江中医杂志,():6854 王丽娟,陈四喜,杨雁冰,等. HPLC 法测定血脂康胶囊中 Monacolin 类成分的含量 J. 中国疗养医学,2015,24(5):4795 陈东洋 ,冯家力 ,张昊,等 .不同前处理方法对保健食品洛伐他汀含量测定的影响J. 食品工业科技,2014,11(35):2956 李兰生,吴俊龙. 反相色谱法测定洛伐他汀含量的方法J.青岛化工学院报,1999,12,20(4)3537 吴永江 ,朱炜,邵青,等.高效液相色谱-质谱联用分析洛伐他汀中的杂质J. 分析化学,2006,1,1(34):115
