1、 酶的专一性及影响酶促反应的因素一 实验目的 通过本实验,证明酶对底物催化的专一性,以及PH、温度、激活剂、抵制剂对酶促反应速度的影响。二 实验原理 唾液淀粉酶能专一的催化淀粉水解,生成一系列水解产物,即糊精、麦芽糖、葡萄糖等。麦芽糖或葡萄糖都属于还原糖,能使班氏试剂中的二价铜离子还原成亚铜,并生成砖红色的氧化亚铜。淀粉酶不能催化蔗糖水解,且蔗糖本身不是还原糖,所以不能与班氏试剂作用呈色。以此证明酶催化底物的专一性。淀粉或淀粉的水解产物遇碘会呈现不同的颜色,淀粉遇碘变蓝色;糊精遇碘则根据其分子量的大小依次呈现紫色、褐色、红色;而麦芽糖、葡萄糖遇碘不呈色。通过颜色变化可以了解淀粉的程度,以观察P
2、H、温度激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。三 药品器材 试管、试管夹、样品杯、滴瓶、温度计、恒温水浴箱,冰箱等。1.1%淀粉溶液 称取可溶性淀粉1g,加5ml蒸馏水调成糊状,徐徐倒入80ml煮沸的蒸馏水中,不断搅拌,待其溶解后,加蒸馏水至100ml。此液应新鲜配制,防止细菌污染。21%蔗糖溶液 称1g蔗糖,加蒸馏水至100ml溶解。3PH6.8 缓冲液 取 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 154.5ml,0.1mol/L 柠檬酸溶液 45.5ml混合即可。4PH4.8 缓冲液 取 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 98.6ml,0.1mol/L 柠檬酸溶液101.4ml混合即可。5PH8.0
3、缓冲液 取 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 194.5ml,0.1mol/L 柠檬酸溶液 5.5ml混合即可。6班氏试剂 溶解结晶硫酸铜 17.3g于 100ml热的蒸馏水中,冷却后加水至150ml为 A液。取柠檬酸钠 173g和无水碳酸钠 100g,加蒸馏水 600ml ,加热溶解,冷却后加水至 850ml为 B液。将 A液缓慢倒入 B液中,混合即可。7稀碘液 称取碘 1g,碘化钾 2g ,溶于 300ml蒸馏水中。809%NaCl 溶液。909%CuSO4 溶液。1001%Na2SO4 溶液。11稀释唾液 用清水漱口,清除食物残渣。再含蒸馏水 30ml作咀嚼运动,2分钟后将稀释唾液收集于样
4、品杯中备用。四 实验方法1酶的专一性 取二支试管,编号,按下表操作。加入物(滴) 1号管 2号管PH6.8缓冲液 20 201%淀粉溶液 10 1%蔗糖溶液 10稀释唾液 5 5将各管混匀,置 37度水浴箱保温 10分钟后取出班氏试剂 15 15将各管混匀,置煮沸水浴箱煮沸 35分钟,观察结果2PH 对酶促反应速度的影响 取三支试管,编号,按下表操作。3加入物(滴) 1号管 2号管 3号管PH4.8缓冲液 20 PH6.8缓冲液 20 PH8.0缓冲液 201%淀粉溶液 10 10 10稀释唾液 5 5 5将各管混匀,置 37度水浴箱保温 510分钟后取出稀碘液 1 1 1观察各管的颜色3.温
5、度对酶促反应速度的影响 取三支试管,编号,按下表操作。加入物(滴) 1号管 2号管 3号管PH6.8缓冲液 20 20 201%淀粉溶液 10 10 10将 1、2、3 号管分别置于 0、37、100预温 5分钟稀释唾液 5 5 5继续将 1、2、3 号管分别置于 0、37、100预温 510分钟稀碘液 1 1 1观察各管的颜色4激活剂、抵制剂对酶促反应速度的影响 取四支试管,编号,按下表操作。加入物(滴) 1号管 2号管 3号管 4号管PH6.8缓冲液 20 20 20 2010 10 10 10 10蒸馏水 10 09%NaCl 10 09%CuSO4 10 01%Na2SO4 10稀释唾液 5 5 5 5将各管混匀,置 37水浴箱保温 510分钟后取出稀碘液 1 1 1 1观察各管的颜色五 注意事项1唾液淀粉酶的活性存在个体差异,同时受唾液稀释倍数影响,收集唾液时应事先确定稀释倍数,或收集 24人的混合唾液。2酶促反应的保温时间,直接影响本实验的效果。根据各实验条件通过预试,确定最佳保温时间。六 思考题 结合本实验说明 PH、温度、激活剂、抵制剂对酶促反应速度的影响。