1、常 用 层 析 方 法,按分离原理分为：* 吸附层析：利用吸附力的差别进行分离。* 分配层析：利用二种不互溶的溶剂中分配比不同进行分离。* 离子交换层析：利用阴阳离子的交换作用达到分离。* 凝胶层析：利用分子量大小进行分离。* 电泳：利用在同一电场的作用下泳动的方 向和速度不同而分离。,按分离形式分为：,薄层层析（Thin Layer Chromatography) 普通TLC；高效TLC； 制备TLC； 离心TLC； 柱层析（Column Chromatography) 普通C C；制备C C ( 快速CC; 低压CC； 中压CC；高压CC）电泳（Electrophoresis) 纸电泳(P
2、E)； 毛细管电泳(CE), 含水量% 氧化铝的活性 0 I 级 3 II 级 6 III 级 10 IV 级 15 V 级 ,氧化铝的适用性,* 碱性氧化铝：应用于碳氢化合物的分离，以 及中性、碱性物质的分离，不适用于酸性 成分的分离。* 中性氧化铝：属于碱性吸附剂范畴，对于分 离碱性中草药成分颇为理想，使用范围最广 泛，不适合于酸性成分的分离。 * 酸性氧化铝：表面常带有NO3-或Cl-，具有离 子交换剂的性质，适合于酸性成分的层析。,汉防己甲素 汉防己乙素,对甲氧基偶氮苯 苏丹红, 含水量% 硅胶的活性 0 I 级 5 II 级 15 III 级 25 IV 级 38 V 级 ,硅胶的适
3、用性,能用于非极性化合物，也能用于极性化合物。适用于芳香油、萜类、甾体、生物碱、强心甙、蒽醌类、酸性、酚性化合物、脂肪酸、氨基酸以及合成产品如：有机金属化合物等。,聚酰胺的适用性,分离极性和非极性物质，如：黄酮体、酚类、醌类、有机酸、生物碱、萜类、甾体、甙类、糖类、氨基酸衍生物、核苷类等。尤其对黄酮体、酚类、醌类物质的分离。,凝胶层析同义词：,凝胶过滤层析(gel filtration chromatography)分子筛过滤层析(molecular seive filtration -)阻滞扩散层析(restricted diffusion -)排阻层析(exclusion chromato
4、graphy)凝胶渗透层析(gel permeation chromatography),Sephadex 葡聚糖凝胶,Sephacryl 凝胶,Sepharose 琼脂糖凝胶,分子筛的适用性,水溶性的高分子化合物，如：蛋白质，多肽，核酸，多糖等。 Sephadex LH20 适用于水溶性差的有机物质的分离，如：脂类、固醇类、黄酮类、大环内酯类等分子量差别大的化合物。,离子交换层析适用性,能在水溶液或含水极性溶剂中产生游离离子基团的酸、碱及两性成分。可用于氨基酸、肽类、生物碱、有机酸、酚类等水溶性成分的分离。,使用离子交换剂使物质分离表 中药煎剂 强酸型(磺酸型) 稀NH4OH洗脱 通过液 酸
5、性、中性化合物 解离型、两性化合物 稀NaOH洗脱 强碱型(季铵型) 强碱型 稀HCl洗脱 通过液 通过液 酸性化合物 中性化合物 解离型物质 两性化合物 (盐、生物碱),1.溶剂槽 2. 高压泵 3. 进样器 4. 层析柱 5. 检测器 6. 收集器 7. 记录仪 8. 梯度淋洗 HPLC 主要流程方块图,超临界流体萃取Supercritical Fluid Extraction SCFE,当一种物质处于临界温度与临界压力以上的状态下，形成即非液体又非气体的单一相态，称超临界流体。 利用一种物质在超临界区域形成的流体进行提取的方法称SCFE。,SCF 与常温常压下的气体和液体比较流体 密度
6、(g.ml-1) 粘度 (g.cm-1s-1) 扩散系数 (cm2.s-1) 气体 0.62 103 13 10-4 0.10.4 SCF 0.20.9 19 10-4 0.20.7 10-3 液体 0.61.6 0.23 10-2 0.22 10-5,大孔树脂的基本结构,常用大孔树脂吸附剂性能一览表, 树脂结构 极性度 比表面(m2/g) 孔径(A) 交联剂 备注Amberlite系列 XAD-1 苯乙烯 非极性 100 200 二乙烯苯 美国:Rohm- XAD-2 苯乙烯 非极性 330 90 二乙烯苯 Haas XAD-4 苯乙烯 非极性 750 50 二乙烯苯 XAD-7 -甲基丙烯
7、酸甲酯 中极性 450 80 双(-甲基丙烯酸)乙二醇酯 XAD-9 亚 砜 极 性 250 80 XAD-10 丙烯酰胺 极 性 69 350 XAD-12 氧化氮类 强极性 25 1300 ,Diaion系列 HP10 苯乙烯 非极性 400 二乙烯苯 日本三菱化学 HP20 苯乙烯 非极性 600 二乙烯苯 公司 HP30 苯乙烯 非极性 500-600 二乙烯苯 HP40 苯乙烯 非极性 600-700 二乙烯苯 HP05 苯乙烯 非极性 400-500 二乙烯苯GDX104 苯乙烯 非极性 590 二乙烯苯 中国天津试剂GDX401 乙烯、吡啶 强极性 370 二乙烯苯 二厂GDX501 含氮极性化合物 极 性 80 二乙烯苯GDX601 带强极性基团 强极性 90 二乙烯苯Duolite s-30苯酚甲醛缩合物 极 性 128 美国Diamond Alkali Co.Lewapol G-7318 苯乙烯 非极性 42 440 德国,本章要求：,掌握天然药物化学的研究内容；认识天然药物化学在中药现代化中的地位；了解研究方法；了解结构鉴定程序；掌握常用层析方法的基本原理和应用。（氧化铝层析；硅胶层析；聚酰胺层析；纸层析；凝胶层析；离子交换层析）,
