1、作 者 简 介 :陈 宝 增 (1983 - ) ,河 北 沧 州 人 ,在 读 硕 士 研 究 生 ;研 究 方 向 :水 生 生 物 学 ,河 北 大 学 生 命 科 学 学 院 ;康 现 江 (1964 - ) ,河 北 邯 郸 人 ,教 授 ,博 士 研 究 生 导 师 ;研 究 方 向 :生 殖 生 物 学 ,河 北 大 学 生 命 科 学 学 院 。实 验 室 斑 马 鱼 的 繁 育 与 养 殖 技 术陈 宝 增 李 凤 超 康 现 江(河 北 大 学 生 命 科 学 学 院 ,河 北 保 定 071002)摘 要 作 为 一 种 重 要 的 脊 椎 模 式 动 物 ,斑 马 鱼
2、在 分 子 发 育 生 物 学 、 遗 传 学 、 环 境 毒 理 学 、 免 疫 学 等 学 科的 应 用 日 益 广 泛 。 本 文 结 合 作 者 实 验 室 人 工 繁 育 及 养 殖 斑 马 鱼 的 经 验 ,对 斑 马 鱼 生 态 习 性 、 人 工 繁 殖 、 受 精 卵发 育 、 幼 体 培 育 以 及 日 常 管 理 和 疾 病 防 治 等 方 面 做 了 详 细 介 绍 ,旨 在 为 斑 马 鱼 的 人 工 繁 育 提 供 基 础 资 料 ,以 便更 好 的 发 挥 这 种 优 秀 模 式 动 物 的 潜 力 。关 键 词 斑 马 鱼 繁 殖 人 工 授 精斑 马 鱼 (
3、D anio rerio) 属 鲤 科 短 担 尼 鱼 属 ,俗称 蓝 条 鱼 、 花 条 鱼 、 斑 马 担 尼 鱼 ,是 原 产 于 印 度 、 孟加 拉 国 等 水 域 的 一 种 小 型 热 带 鱼 。 其 身 体 细 长 、尾 部 稍 侧 扁 从 微 尖 ,臀 鳍 较 长 ,尾 鳍 呈 叉 形 1 。 体侧 有 像 斑 马 一 样 的 纵 向 条 纹 ,其 背 部 呈 橄 榄 色 ,条纹 为 银 蓝 色 ,在 体 侧 从 鳃 盖 后 直 伸 到 尾 末 梢 ,在 臀鳍 上 也 有 与 体 侧 相 似 的 条 纹 ,体 长 为 4 6 cm。斑 马 鱼 是 近 些 年 发 展 起 来
4、的 一 种 脊 椎 动 物 模式 生 物 ,由 于 其 具 有 个 体 小 、 产 卵 多 、 发 育 快 、 体 外受 精 、 胚 胎 透 明 、 易 于 观 察 、 饲 养 简 便 等 优 点 ,很 快成 为 分 子 发 育 生 物 学 、 遗 传 学 、 环 境 毒 理 学 、 免 疫学 等 学 科 的 模 式 生 物 ,斑 马 鱼 也 因 此 成 为 仅 次 于小 鼠 第 二 优 先 的 脊 椎 模 式 动 物 2 。1 斑 马 鱼 的 生 态 习 性 与 营 养 需 求1. 1 养 殖 用 水 的 化 学 参 数对 于 实 验 室 养 殖 来 说 ,摸 索 出 斑 马 鱼 最 适 养
5、殖 环 境 参 数 对 于 实 验 过 程 可 以 起 到 事 半 功 倍 的 效果 ,在 非 适 宜 环 境 下 ,斑 马 鱼 要 损 耗 部 分 能 量 来 维持 自 身 的 动 态 平 衡 ,而 这 部 分 能 量 恰 恰 是 从 正 常的 生 长 、 发 育 繁 殖 以 及 机 体 免 疫 过 程 中 抽 调 而 来的 3 。 非 适 宜 环 境 往 往 会 降 低 斑 马 鱼 的 生 长 速度 ,影 响 子 代 的 数 量 和 质 量 ,降 低 其 成 活 率 4 。 斑马 鱼 适 宜 的 生 长 温 度 为 24 30 5 ,能 够 忍 受 的温 度 为 6. 7 41. 7 6
6、,在 低 温 环 境 下 的 忍 受 能力 要 强 于 高 温 环 境 。 其 最 适 的 生 长 和 繁 殖 温 度 为28. 5 7 ,11 时 出 现 死 亡 ,自 然 条 件 下 在 北 方不 能 越 冬 。 一 般 斑 马 鱼 养 殖 用 水 的 p H 值 应 在 7 8 范 围 内 ,属 于 淡 水 鱼 养 殖 的 适 宜 范 围 。 不 同地 区 水 质 差 别 很 大 ,如 果 当 地 的 水 质 合 适 ,可 以 用曝 气 水 养 殖 ,否 则 就 要 用 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 加 入适 量 的 矿 物 质 盐 ,也 可 以 配 置 Hank s 液 进 行 养殖
7、 。 斑 马 鱼 具 有 较 高 的 代 谢 速 度 ,因 此 每 单 位 体重 所 消 耗 的 氧 气 要 高 于 大 型 的 鱼 类 8 。 在 斑 马 鱼孵 化 的 不 同 时 期 对 氧 气 需 求 不 同 ,其 孵 化 期 几 乎不 需 要 氧 气 ,鳔 充 气 时 开 始 需 要 氧 气 的 供 应 ,随 着鱼 不 断 长 大 ,氧 气 的 需 求 量 逐 渐 增 加 。 在 养 殖 过程 中 ,水 体 中 充 氧 有 利 于 斑 马 鱼 的 发 育 。 水 体 中过 多 的 含 氮 废 物 会 对 斑 马 鱼 造 成 毒 害 作 用 ,在 实验 室 养 殖 斑 马 鱼 时 ,及
8、时 清 理 水 体 的 粪 便 ,勤 换 水是 非 常 必 要 的 。1. 2 斑 马 鱼 饵 料 及 其 营 养 成 分斑 马 鱼 对 饵 料 的 要 求 不 高 ,人 工 配 合 饵 料 及各 种 鲜 活 饵 料 均 可 。 但 为 保 证 斑 马 鱼 较 好 的 繁 殖和 生 长 ,最 好 多 种 饵 料 结 合 投 喂 。 人 工 饵 料 可 以用 软 颗 粒 饲 料 或 者 全 价 硬 颗 粒 饵 料 ,也 可 以 用 片状 或 粉 末 状 的 成 品 观 赏 鱼 饵 料 。 所 用 配 合 饵 料 的蛋 白 质 含 量 要 高 于 40 % ,粗 脂 肪 高 于 3. 5 % ,水
9、 分低 于 4 % ,钙 、 磷 含 量 分 别 为 0. 9 % 1. 6 %和0. 8 % 1. 4 % ,如 果 培 育 亲 鱼 ,配 合 饵 料 中 应 添 加一 些 促 进 性 腺 发 育 的 元 素 ,如 VA 、 VD 、 VE 以 及 微量 元 素 锌 、 铁 等 。 在 不 同 的 发 育 时 期 选 用 鲜 活 饵料 的 种 类 不 同 。 在 斑 马 鱼 仔 鱼 阶 段 ,可 以 投 喂 草履 虫 、 轮 虫 、 酵 母 等 作 为 其 开 口 饵 料 ;在 幼 体 阶 段 ,可 以 投 喂 卤 虫 的 无 节 幼 体 ;随 着 斑 马 鱼 的 长 大 ,饵料 也 变 得
10、 丰 富 起 来 ,可 以 投 喂 大 型 的 浮 游 动 物 枝-15- 河 北 渔 业 2008 年 第 4 期 (总 第 172 期 ) 苗 种 繁 育角 类 以 及 桡 足 类 ,或 者 果 蝇 幼 虫 、 摇 蚊 幼 虫 、 水 蚯蚓 等 ,也 可 以 投 喂 捣 碎 的 小 鱼 小 虾 。 活 体 饵 料 对斑 马 鱼 的 性 腺 发 育 可 以 起 到 一 定 的 促 进 作 用 ,因此 在 亲 鱼 培 育 时 ,适 量 增 加 活 体 饵 料 会 缩 短 其 性腺 发 育 周 期 。2 斑 马 鱼 的 繁 殖2. 1 亲 鱼 培 育2. 1. 1 斑 马 鱼 亲 鱼 雌 雄 鉴
11、 别 斑 马 鱼 体 型 为 纺锤 形 ,雌 雄 容 易 鉴 别 。 雌 鱼 的 蓝 色 条 纹 偏 蓝 而 鲜艳 ,间 以 银 灰 色 条 纹 ,身 体 比 雄 鱼 粗 壮 ,尤 其 是 腹部 膨 大 ,各 鳍 均 比 雄 鱼 短 小 ,但 不 明 显 ;雄 鱼 蓝 色条 纹 偏 黄 ,间 以 柠 檬 色 条 纹 ,身 体 细 长 扁 平 ,没 有明 显 突 出 的 腹 部 。 雌 鱼 的 体 高 / 体 长 比 要 明 显 高于 雄 鱼 。2. 1. 2 斑 马 鱼 产 卵 亲 鱼 的 培 育 斑 马 鱼 在 繁 殖时 通 过 光 周 期 作 用 ,在 日 出 后 产 卵 。 为 促 进
12、斑 马鱼 的 成 熟 ,我 们 在 水 族 箱 内 按 照 雌 雄 1 2 1 3的 比 例 放 入 斑 马 鱼 ,控 制 光 周 期 为 14 :10 (光 照 14h ,黑 暗 10 h) ,如 有 必 要 可 以 用 黑 布 将 水 族 箱 罩住 ,增 加 水 体 温 度 至 28. 5 ,增 加 投 喂 次 数 ,可 以由 原 来 的 每 天 投 喂 2 3 次 增 加 为 4 次 ,并 且 增 加鲜 活 饵 料 的 投 喂 。2. 2 斑 马 鱼 的 繁 殖2. 2. 1 自 然 产 卵 斑 马 鱼 一 般 10 12 周 即 可 达到 性 成 熟 ,但 最 好 用 17 18 月
13、龄 的 亲 鱼 进 行 大 规模 繁 殖 。 斑 马 鱼 为 异 体 体 外 受 精 ,繁 殖 周 期 短 (一般 7 d 左 右 ) 。 温 度 适 合 时 一 年 四 季 都 可 产 卵 ,卵量 300 1 000 粒 ,为 非 粘 性 沉 性 卵 。 在 繁 殖 的 前一 天 ,天 黑 前 (如 是 人 工 控 制 光 周 期 ,则 指 暗 周 期前 )用 隔 板 将 繁 殖 的 亲 鱼 分 开 ,并 在 水 箱 底 部 平 铺一 层 玻 璃 珠 或 者 隔 离 网 以 防 止 亲 鱼 产 卵 后 吞 卵 。次 日 清 晨 ,将 水 族 箱 中 的 隔 板 拆 掉 ,在 光 照 的 刺
14、激下 ,雄 鱼 开 始 追 逐 雌 鱼 ,并 用 身 体 冲 撞 雌 鱼 的 腹部 ,这 时 雌 鱼 产 卵 ,雄 鱼 排 精 ,受 精 卵 落 入 玻 璃 珠间 隙 或 者 隔 离 网 下 。 结 束 后 将 亲 鱼 捞 出 ,用 虹 吸的 方 法 收 集 受 精 卵 。 将 虹 吸 出 的 受 精 卵 以 及 各 种污 物 (包 括 成 鱼 的 粪 便 ,破 碎 的 卵 粒 等 ) 一 同 倒 入培 养 皿 中 ,用 滴 管 (滴 管 口 部 一 定 要 圆 滑 并 且 直 径要 大 于 卵 径 ) 将 卵 依 次 吸 出 ,并 用 培 养 液 清 洗 数次 ,然 后 放 入 培 养 箱
15、中 进 行 孵 化 。2. 2. 2 人 工 授 精 由 于 科 学 研 究 需 要 大 量 同 步发 育 的 斑 马 鱼 胚 胎 时 ,可 以 用 人 工 授 精 的 方 法 获得 。 在 人 工 授 精 的 前 一 天 挑 选 出 一 个 月 以 上 没 有进 行 过 人 工 授 精 且 发 育 良 好 的 亲 鱼 ,并 准 备 好 纱布 和 冰 块 (麻 醉 斑 马 鱼 用 ) ,配 置 新 鲜 的 Hank s液 。 次 日 清 晨 ,将 雄 鱼 浸 入 冰 水 中 ,待 其 不 动 时 捞出 ,鱼 体 洗 净 后 ,用 纱 布 擦 干 ,特 别 是 生 殖 孔 周 围 ,然 后 轻
16、轻 挤 压 雄 鱼 腹 部 ,当 有 乳 状 精 液 流 出 时 ,用吸 管 轻 轻 吸 出 ,连 续 收 集 数 尾 鱼 精 液 后 ,将 精 液 用预 冷 的 Hank s 液 稀 释 ,精 子 在 冷 却 的 Hanks 液中 可 保 持 90 min 甚 至 更 长 的 授 精 能 力 。 由 于 雄斑 马 鱼 的 性 腺 不 很 发 达 ,不 容 易 采 集 精 液 ,也 可 以采 取 解 剖 取 性 腺 的 方 法 ,取 出 精 巢 后 ,在 Hank s液 中 剪 碎 ,可 收 到 同 样 的 效 果 。 卵 子 同 样 在 清 晨采 集 ,前 期 处 理 与 雄 鱼 相 同 。
17、 冷 水 麻 醉 后 ,轻 轻 挤压 鱼 腹 部 ,如 鱼 发 育 良 好 ,可 以 轻 易 挤 出 卵 子 ,将鱼 卵 收 集 入 小 培 养 皿 中 ,注 意 卵 子 不 能 沾 水 ,否 则卵 吸 水 膨 胀 ,会 阻 碍 精 子 进 入 卵 子 。 成 熟 的 卵 子为 黄 色 ,半 透 明 状 。 如 果 卵 内 有 较 多 的 白 点 ,则 表明 卵 在 雌 鱼 体 内 的 时 间 过 长 已 经 腐 化 ,会 大 大 影响 受 精 率 。 卵 子 取 出 后 ,迅 速 将 稀 释 的 精 子 与 卵子 混 匀 ,然 后 加 入 少 量 清 水 或 者 鱼 用 生 理 盐 水 ,授
18、精 时 间 从 加 水 时 开 始 计 算 。 人 工 授 精 的 难 点 在 于掌 握 斑 马 鱼 的 发 育 时 期 ,一 定 要 在 最 合 适 的 时 期收 集 精 卵 ,这 样 可 以 大 大 提 高 受 精 率 ,人 工 授 精 的斑 马 鱼 亲 鱼 要 再 培 育 3 4 周 后 才 能 再 次 用 于 人工 授 精 。2. 3 斑 马 鱼 卵 的 孵 化斑 马 鱼 的 受 精 卵 及 时 冲 洗 干 净 后 ,将 受 精 卵中 内 部 呈 白 色 的 死 卵 剔 除 。 孵 化 水 温 一 般 2528 ,在 这 个 温 度 范 围 内 温 度 越 低 ,孵 化 所 需 要的
19、时 间 相 应 越 长 。 水 温 25 时 ,受 精 卵 经 4872 h 孵 出 仔 鱼 ;水 温 28 时 ,经 36 h 孵 出 仔 鱼 。水 温 太 低 或 太 高 ,就 会 造 成 受 精 卵 的 死 亡 。 实 验室 孵 化 时 可 以 在 培 养 皿 中 进 行 ,可 以 不 充 气 。 为预 防 鱼 卵 被 细 菌 感 染 可 以 加 入 几 滴 1 的 亚 甲 基蓝 溶 液 。 孵 化 过 程 中 ,要 定 期 观 察 ,随 时 剔 除 死卵 。 每 5 6 h 换 一 次 水 ,水 温 不 宜 相 差 太 大 ,可以 提 前 将 新 水 放 置 入 培 养 箱 中 备 用
20、 。 斑 马 鱼 的 胚胎 发 育 可 分 为 7 个 时 期 ,即 受 精 卵 期 、 卵 裂 期 、 囊胚 期 、 原 肠 胚 期 、 体 节 期 、 咽 部 期 、 孵 化 期 。2. 4 斑 马 鱼 幼 体 的 培 育在 28 下 ,大 约 36 h ,斑 马 鱼 幼 体 破 膜 孵 出 ,仔 鱼 仅 在 受 到 刺 激 时 才 会 产 生 应 激 反 应 ,游 动 一段 距 离 后 又 静 止 到 水 底 。 2 3 d 后 仔 鱼 卵 黄 囊消 失 ,鳔 充 气 后 就 可 以 平 游 并 摄 食 。 这 一 时 期 是仔 鱼 成 活 的 高 危 时 期 ,水 中 的 水 霉 菌
21、、 水 温 的 剧 烈变 化 以 及 溶 解 氧 不 足 均 会 造 成 仔 鱼 的 死 亡 。 斑 马鱼 的 开 口 期 也 是 一 个 高 危 期 ,鱼 平 游 后 ,如 果 饵 料不 适 合 或 者 投 喂 时 间 过 晚 ,均 会 造 成 仔 鱼 的 死 亡 。大 约 半 数 以 上 仔 鱼 能 够 平 游 水 面 时 就 可 以 投 饵 ,-25- 河 北 渔 业 2008 年 第 4 期 (总 第 172 期 ) 苗 种 繁 育可 以 用 筛 绢 包 裹 住 煮 熟 的 蛋 黄 在 水 中 来 回 漂 洗 几下 投 喂 ,也 可 以 投 喂 用 筛 绢 网 过 滤 过 的 动 物
22、性 饵料 或 者 配 合 饵 料 ,此 时 投 喂 密 度 应 该 稍 微 大 些 ,因为 仔 鱼 的 游 泳 能 力 较 弱 ,活 动 范 围 较 小 ,仅 能 摄 食身 边 的 饵 料 。 在 饵 料 中 还 应 适 当 加 入 土 霉 素 等 ,这 样 可 以 提 高 鱼 苗 的 成 活 率 。 由 于 饵 料 容 易 污 染水 质 ,应 该 定 期 换 水 ,防 止 水 质 恶 化 。 一 周 以 后 可以 投 喂 轮 虫 、 酵 母 以 及 一 些 单 细 胞 藻 类 等 ;大 约 三周 左 右 可 以 投 喂 卤 虫 的 无 节 幼 体 ;一 个 月 可 以 投喂 大 型 浮 游
23、动 物 如 枝 角 类 、 桡 足 类 、 摇 蚊 幼 虫 等 。整 个 斑 马 鱼 幼 体 培 育 过 程 也 可 以 都 用 配 合 饵 料 ,注 意 初 期 应 该 尽 量 使 饵 料 颗 粒 适 口 。3 斑 马 鱼 的 日 常 管 理斑 马 鱼 对 于 水 质 的 要 求 不 高 ,如 果 每 天 吸 出水 族 箱 中 的 残 饵 和 粪 便 ,并 换 水 1/ 3 左 右 ,可 以 不使 用 滤 水 设 备 。 如 果 使 用 滤 水 设 备 ,可 以 每 周 换水 1/ 2。 实 验 室 内 可 以 用 自 来 水 养 殖 ,但 是 养 殖和 换 水 时 要 注 意 ,所 用 自
24、 来 水 要 曝 气 1 d 以 上 ,换水 时 要 将 水 温 调 节 到 和 水 族 箱 中 的 水 温 相 同 。 每天 投 喂 2 3 次 ,繁 殖 亲 鱼 可 以 加 喂 一 次 ,投 喂 量以 5 min 内 吃 完 为 准 。 投 喂 次 数 不 要 太 多 ,否 则鱼 的 身 体 发 胖 会 影 响 其 性 腺 发 育 。 如 果 投 喂 活 体饵 料 ,可 以 先 用 高 锰 酸 钾 消 毒 或 用 盐 水 浸 泡 ,自 来水 冲 洗 后 再 投 喂 。 冷 冻 饵 料 必 须 解 冻 后 方 可 投喂 ,否 则 解 冻 渗 出 的 液 体 会 污 染 水 质 ,饵 料 过
25、冷 也容 易 引 发 斑 马 鱼 消 化 道 疾 病 。只 要 饲 养 条 件 合 适 ,斑 马 鱼 很 少 得 病 。 但 是如 果 水 质 条 件 不 好 ,或 换 水 不 勤 ,也 会 出 现 细 菌 感染 ,主 要 表 现 为 烂 尾 、 烂 鳃 、 烂 鳍 、 脱 鳞 、 竖 鳞 以 及皮 肤 充 血 发 炎 等 症 状 。 病 鱼 应 及 时 挑 出 ,用 高 锰酸 钾 稀 释 液 进 行 药 浴 。 如 果 要 用 斑 马 鱼 进 行 毒 理学 或 者 药 理 学 实 验 ,病 鱼 要 及 时 淘 汰 ,因 为 药 物 治疗 会 对 斑 马 鱼 产 生 一 定 的 副 作 用 ,
26、影 响 实 验 结 果 。不 过 斑 马 鱼 繁 殖 力 强 ,在 实 验 开 始 前 要 注 意 多 养殖 一 些 斑 马 鱼 备 用 ,以 防 止 因 淘 汰 病 鱼 而 影 响 实验 进 度 。 在 日 常 的 养 殖 中 ,所 用 的 日 常 用 具 ,如 水族 箱 、 鱼 网 、 滤 水 设 备 等 都 应 及 时 消 毒 ,避 免 用 具的 交 叉 使 用 。 用 具 用 完 后 要 先 用 水 洗 净 ,然 后 用高 锰 酸 钾 溶 液 或 盐 水 溶 液 浸 泡 消 毒 ,也 可 以 用 紫外 线 或 者 日 晒 灭 菌 ,以 备 下 次 再 用 。参 考 文 献 1 刘 伟
27、成 ,李 明 云 . 斑 马 鱼 及 其 人 工 繁 殖 . 水 利 渔 业 . 2006 , 26(1) :31 2 Christian L . The husbandry of zebrafish (Danio rerio) : A re2view. Aquacult ure ,2007 ,269 :1 - 20 3 Wooton R J . The Ecology of Teleost Fishes , 2nd edition.Chapman and Hall ,London. 1998 :404 4 Haywood G P. Ammonia toxicity in teleost fi
28、sh :a review. CanTech Rep Fish Aquat Sci. 1983 ,1177 :135 5 Matt hews M , Trevarrow B , et al. Avirtual tour of t he guidefor zebrafish users. LabAnim ,2002 ,31 :3440 6 Cortemeglia C ,Beitinger T L . Temperature tolerances of wildtype and red transgenic zebra danios. Trans Am Fish Soc ,2005 ,134 :14
29、31 - 1437 7 Westerfield M. The Zebrafish Book. A Guide for t he Labora2tory Use of Zebrafish (Danio rerio) ,3rd edition. University ofOregon Press ,Eugene OR. 1995 ,385 8 Helf man G , Collette B , Facey D. The Diversity of Fishes.Black well Science ,Malden ,MA. 1997 ,528(收 稿 日 期 :2008 - 01 - 08)(上 接
30、 第 50 页 ) 2 李 芳 柏 ,万 洪 富 ,李 定 强 . 新 丰 江 水 库 欧 洲 鳗 网 箱 养 殖 对 水 质的 影 响 J . 重 庆 环 境 科 学 ,1999 ,21 (6) :36 - 38 3 崔 毅 ,陈 碧 鹃 ,陈 聚 法 . 黄 渤 海 海 水 养 殖 自 身 污 染 的 评 估 J .应 用 生 态 学 报 ,2005 ,16 (1) :180 - 185 4 杨 宇 峰 ,姜 胜 ,王 朝 晖 , 等 . 中 国 海 水 养 殖 发 展 状 况 与 养 殖 海域 赤 潮 生 态 防 治 J . 海 洋 科 学 ,2004 ,28 (7) :71 - 75
31、5 林 钦 ,林 燕 棠 ,李 纯 厚 , 等 . 我 国 海 水 网 箱 养 殖 环 境 氮 磷 负 荷量 的 评 估 A . 海 洋 水 产 科 学 研 究 文 集 C ,广 州 : 广 东 科 技 出版 社 ,1999. 217 - 225 6 李 玉 成 . 淮 河 流 域 贝 类 生 物 地 球 化 学 研 究 与 水 污 染 治 理 J .安 徽 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 ) ,2004 ,28 (6) :64 - 70 7 曲 克 明 ,李 秋 芬 ,陈 碧 鹃 , 等 . 对 虾 养 殖 池 生 态 环 境 的 人 工 调控 及 其 特 征 J . 黄 渤 海 海
32、洋 ,2000 ,18 (3) :72 - 80 8 晏 小 霞 ,唐 文 浩 . 养 殖 水 环 境 生 物 修 复 研 究 进 展 J . 热 带 农 业科 学 ,2004 ,24 (2) :69 - 72 9 Tomotada Iwamoto , Masao Nasu. Current bioremediationpractice and perspective J . Journal of Bioscience and Bioen2gineering ,2001 , 92 (1) :1 - 8 10 吴 益 春 ,赵 元 凤 ,吕 景 才 ,等 . 海 水 养 殖 环 境 生 物 修
33、复 研 究 进展 J . 生 物 技 术 通 报 ,2006 年 Z1 :133 - 13711 晏 小 霞 ,唐 文 浩 . 养 殖 水 环 境 生 物 修 复 研 究 进 展 J . 热 带 农业 科 学 ,2004 ,24 (2) :69 - 72 12 韦 受 庆 . 藻 、 虾 、 蟹 混 养 的 研 究 . 海 洋 学 报 ,1990 ,12 (3) :388 - 394 13 Fujita R M. The role of N status in regulation transient am2moni2um uptake and N storage by macroalgae
34、Gracilaria te2mustipita2taJ . J Exp Mar Ecol ,1985 ,92 :283 - 301 14 Martina Milanese , Elisabetta Chelossi , Renata Manconi ,Antonio Sara , Marzia Sidri , Roberto Pronzato. BiomolecularEngineering 2003 , 20 (4 - 6) :363 - 368 15 袁 秀 堂 . 刺 参 Apostichopus japonicus ( Selenka)生 理 生 态 学及 其 生 物 修 复 作 用 的 研 究 D . 青 岛 :中 国 科 学 院 海 洋 研 究所 , 2005 (收 稿 日 期 :2007 - 12 - 27)-35- 河 北 渔 业 2008 年 第 4 期 (总 第 172 期 ) 苗 种 繁 育
