病毒学问答题.pdf

1、病毒 学复习 问答题部分 说明： 整理的问 答题为老师提问 内容，后面附上 了 0 7 、0 8 年问答题 答案根据 上课笔记结合英 文版的 p p t 整理， 时间仓促 ，难免出现错误 或者不完整的地 方， 请同学们 在群里提出，方 便大家复习哈 祝大家都 取得好成绩！加 油 赵晴川 2 0 1 3 . 6 . 2 2病毒学问答题复习 z q c 2 2 2 2 / 1 4 1 4 1 4 1 4 病毒 性肝炎 专题 1 . 1 . 1 . 1 . 体检后 ，医院的化验单 上显示： H B s A g - , H B s A g - , H B s A g - , H B s A g - ,

2、 H B e A g - , H B e A g - , H B e A g - , H B e A g - , H B s A b + , H B s A b + , H B s A b + , H B s A b + , H B e A b - , H B e A b - , H B e A b - , H B e A b - , H B c A b + H B c A b + H B c A b + H B c A b + 请问健 康状况如何？ 既往感染 已恢复 附：乙 肝两对半结果分 析 2 . 2 . 2 . 2 . 学校放 暑假期间，我不 慎用他人的杯子 喝过水，事后才 知道他患有

3、乙肝 ，请问我是否会 被感染？ 不会，乙 肝不通过消化道 传染，目前亦无 相似个案报道 附：乙 肝传播方式 1 1 1 1 ） 垂直传 播 垂直感染 是指周期内母子 间之传染，是乙 肝的最主要传播 方式 2 2 2 2 ） 水平传 播 水平感染 可能经由皮肤伤 口 、口腔黏膜 、 眼黏膜接 触带原的血液 、体液而感 染 ；另外性行 为 、针灸 、 刺青 、 穿耳洞也 有可能传染乙型 肝炎病毒。共用 的剃须刀，牙刷 ，指甲剪等都能 传播病毒。 3 . 3 . 3 . 3 . 实验室 如何检测和诊断 乙肝病毒？ E L I S A 法检测 H B s A g E L I S A 法检测 H B e

4、 A g R e a l - T i m e P C R 检测 H B V D N A C o p i e s病毒学问答题复习 z q c 3 3 3 3 / 1 4 1 4 1 4 1 4 艾滋 专题 1 . 1 . 1 . 1 . 为什么 H I V H I V H I V H I V 可以长 期潜伏 1 ）病毒感染 使免疫功能失效 2 ）病毒基因 组与宿主染色体 整合不表达，形 成前病毒 （最重要 原因） 3 ）病毒抗原 的高度变异性（ 逆转录酶保真性 差） 4 ）非特异性 免疫细胞 单核巨噬 细胞为病毒长期 储存的宿主 2 . 2 . 2 . 2 . 艾滋病 人能否与正常人 结婚？艾滋

5、病人 之间能否结婚？ H I V H I V H I V H I V 阳性母 亲能否生育小孩 （ 我国） 艾滋 病人 不能与 正常 人结 婚，艾 滋病 人之 间可以 结婚 。对 于 H I V 阳 性母亲 ，如 果尚 未怀孕 ， 则不 建议生 育；如果 已经怀 孕，则需 要进行 抗艾滋治 疗。在 孕期内， 血胎屏 障可以防 止胎儿 感染，临 近生 产降低母 亲外周血内病毒 可以防止婴儿感 染。 3 . 3 . 3 . 3 . 现有抗 艾滋病药物的作 用靶标是什么？ 逆转录酶 活性中心 （逆转录 酶抑制剂 ） 、 蛋白酶活 性中心 （蛋白酶 抑制剂 ） 、 H I V 表面配体（膜融合 抑制剂，

6、模拟细 胞表面受体，结 合在 H I V 表面，对 其产生封闭作用 ） 4 . 4 . 4 . 4 . 临床上 如何确诊艾滋病 人？ 临床确诊 艾滋病人四个指 标：抗体、病毒 蛋白 P 2 4 、 C D 4 + T 细胞计数 、病毒 R N A 拷贝数。 5 . 5 . 5 . 5 . H I V H I V H I V H I V R N A R N A R N A R N A 高变异 频率是否会影响 其蛋白质外壳的 编码序列，进而 影响自身生存？ 不影 响。 即便 在同一 个病 人体 内，病 毒也 是以 混合状 态存 在， 这些病 毒的 序列 不完全 相同 。病 毒复制 无高 保真机 制

7、，能够 产生多 种突变。 如果突 变影响了 病毒的 生存，具 有该序 列的病毒 就将被 淘汰，而 其他 序列的病 毒继续生存，所 以突变不会导致 病毒的生存障碍 。 流感 专题 1 . 1 . 1 . 1 . 如何扩 增流感病毒？有 哪些检测手段？ 扩增： 接种 9 日龄鸡胚 ，收获尿囊液； M D C K 细胞 ( 依赖胰蛋 白酶 ) 检测： 1 ）血球凝 集试验，鸡红细 胞 ( 快) 、豚鼠， 人红细胞 ( 慢 ) 2 ）E L I S A ( 需要流感 病毒抗体 ) 3 ）R T - P C R 检测病毒 的 R N A 4 ）R e a l - T i m e P C R 确定病毒 R

8、 N A 的数量 2 . 2 . 2 . 2 . 什么是 流感病毒的 v R N A v R N A v R N A v R N A 、 m R N A m R N A m R N A m R N A 、c R N A c R N A c R N A c R N A ？ v R N A ：病毒本 身的 R N A ，负义 m R N A ：以 v R N A 为模板合 成的，用来翻译 病毒蛋白质的 R N A ，正义 c R N A ：以 v R N A 为模板合 成的，病毒复制 的中间体，正义 ，用来合成 v R N A 3 . 3 . 3 . 3 . 临床有 哪些特异性抗流 感病毒药物？他

9、 们的作用机理是 什么 金刚烷胺 、金刚乙胺：离 子通道 M 2 抑制剂 达菲：神 经氨酸酶 N A 抑制剂（ N A 是水解细 胞表面受体特异 性糖蛋白末端的 N - 乙酰神经 氨酸，是病毒复 制完成后 脱离细胞表面的 工具 ） ，目前最 有效的药 病毒唑： 核苷酸类似物， 针对所有单链负 义 R N A 病毒 4 . 4 . 4 . 4 . 为什么 流感病毒在细胞 培养中传代后会 丧失感染性？如 何克服 原因： 病毒的 H A 0 水解为 H A 1 和 H A 2 两个亚单 位后才能高效结 合到细胞表面 ， 细胞培养 缺乏蛋白酶 ， 所以用 细胞扩增 的病毒活性会下 降 克服：在 上清中

10、加入胰蛋 白酶可以保持活 性病毒学问答题复习 z q c 4 4 4 4 / 1 4 1 4 1 4 1 4 第一 章 介绍 1 . 1 . 1 . 1 . 病毒是 什么？它们与其 它微生物有何不 同？ 病毒是亚 微观的专性寄生 生物，它们以组 装方式产生子代 颗粒其他生物 能生长，以分裂 方式产生 ， 缺乏能量 产生和蛋白合成 系统没有核糖 体 2 . 2 . 2 . 2 . 病毒学 的发展史及里程 碑事件 最早记录 的病毒感染：脊 髓灰质炎，古埃 及、 3 7 0 0 B C 古埃及法 老拉米西斯五世 木乃伊显示其生 前得了天花 中国古代 人痂接种预防天 花 E d w a r d J a

11、 n n e r 牛痘接种 预防天花 ，1 4 M a y 1 7 9 6 巴斯德发 明狂犬疫苗 、巴氏消毒 科赫与 科赫假 说 鉴定病 原体 1 ) 病原出现 于每一病例 2 ) 能从宿主 中分离病原体并 体外纯培养 3 ) 纯培养病 原接种健康个体 能致病 4 ) 回感宿主 能收到相同病原 体 伊万诺夫 斯基发现烟草滤 过性因子，贝杰 林克确定烟草花 叶病毒 J o h n E n d e r s 原代细胞 培养脊髓灰质炎 病毒 F r e d e r i c k T w o r t , F e l i x d H e r e l l e 首次发现 噬菌体 3 . 3 . 3 . 3 .

12、研究病 毒经常使用的技 术有哪些？ 1 ) 1 ) 1 ) 1 ) 活体寄 主系统 鸡胚扩增 病毒，痘斑实验 定量分析病毒 动物寄主 仍在使用 的方面： 不能在体 外培养细胞中繁 殖的病毒；病理 学试验；疫苗安 全性检测 缺点： 贵；复杂 ，结果难以解释 ；存在宿主个体 差异；动物伦理 学争议。逐步被 细胞培养分子生 物学所替代 。 2 ) 2 ) 2 ) 2 ) 噬斑 空斑试验 目前最准 确的病毒计数方 法，能排除假病 毒干扰，对具感 染性的病毒进行 计数。 3 ) 3 ) 3 ) 3 ) 细胞培 养 4 ) 4 ) 4 ) 4 ) 血清学 / / / / 免疫学 方法 是否为免 疫学方法的

13、判断 依据：是否有抗 原 - 抗体反应 具体方法 有 ： 补体固定 实验 ； 免疫荧光 法 ； 酶联免疫 实验 ； 蛋白质印 迹 ； 放射免疫 实验 （书本第五版 p 1 2 ） 单克隆抗 体制备 免疫小鼠 脾脏细胞与永生 B 细胞杂交 选择。 （第五版 p 1 4 ） 5 ) 5 ) 5 ) 5 ) 电镜观 察 6 ) 6 ) 6 ) 6 ) 分子生 物学方法 杂交技术 、分子克隆、凝 胶电泳、 P C R 、核酸测 序、芯片分析 第二 章 P a t i c l e P a t i c l e P a t i c l e P a t i c l e 1 . 1 . 1 . 1 . 病毒有

14、哪些结构 基本结构 分为螺旋对称， 二十面体和包涵 体结构 2 . 2 . 2 . 2 . 病毒基 本组成是什么 1 ）什么是 C a p s i d ？什么是 N u c l e o c a p s i d ？ C a p s i d 衣壳 = 结构蛋白 + 空间结构 N u c l e o c a p s i d 核衣壳 = 结构蛋白 + D N A / R N A病毒学问答题复习 z q c 5 5 5 5 / 1 4 1 4 1 4 1 4 2 2 2 2 ）什么是 E n v e l o p e ? E n v e l o p e ? E n v e l o p e ? E n v

15、e l o p e ? 什么是 V i r i o n V i r i o n V i r i o n V i r i o n ？ E n v e l o p e 囊膜 = 细胞膜 + 病毒表面 蛋白（通常为糖 蛋白） V i r i o n 病毒粒子 = N - C a p s i d + E n v e l o p e 是有感染 性的成熟病毒颗 粒 V i r u s ：病毒的通称、泛指； V i r i o n ：强调个体 第三 章 基因 组 1 . 1 . 1 . 1 . 病毒 的基因 组有哪些 类型？ 哪些类型 的基因 组 （ 核酸 ） 直接 导入细 胞后有感 染性？ 哪些没有 ？为

16、什 么没 有感染 性？ 七种类型 ： （1 ）d s D N A （2 ）s s D N A （3 ）d s R N A （4 ）s s R N A ( - ) （5 ）s s R N A ( + ) （6 ）s s R N A , 有 D N A 复制中间 体 （ R N A - D N A - R N A ，逆转录 病毒） （7 ）d s D N A , 有 R N A 复制中间 体 （ D N A - R N A - D N A ，e . g . 肝炎病毒 ） 其中 d s D N A 、 s s R N A ( + ) 直接导入 细胞有感染性 。 因为 d s D N A 与宿主遗 传

17、物质相似 ， s s R N A ( + ) 可以直接 被核糖 体识别 ， 而其他都 不能直接转录或 翻译 ， d s R N A 还会被宿 主细胞识别并切 除 ， R N A - D N A - R N A 与 D N A - R N A - D N A 都需要逆 转录酶。 2 . 2 . 2 . 2 . 两种病 毒共感染后，其 子代病毒之间会 发生哪些现象？ 遗传性相 互作用： 互补：共 感染后基因产物 互作，增强了其 中一种或两种病 毒，基因不被改 变 有基因内 互补、基因间互 补（更通常的情 况） 重组：共 感染后基因重组 ，产生与原来两 种病毒都不同的 重组型 有通过 链断裂 - 连

18、接的 分子内重组（ D N A 病毒、 有 D N A 中间体 的 R N A 病毒 ） 、通过 链拷贝 - 选择的 分 子内重组 （ R N A 病毒） 、重配（ 分节病毒） 非遗传性 的相互作用： H e t e r o z y g o s i s （杂合） 干扰：两 种病毒间的拮抗 作用，同种病毒 间产生 D . I . 颗粒 ( 缺损干扰 颗粒 ) 表型混合 ：一种病毒颗粒 含有了另一种病 毒的衣壳或包膜 成分，子代会恢 复为自身的衣壳 、包膜 3 . 3 . 3 . 3 . 什么是 I R E S I R E S I R E S I R E S ？有何 结构特点？在病 毒感染过程中的

19、 作用？在分子生 物学中重要应用 价值是什么？ I R E S ( I n t e r n a l R i b o s o m e E n t r y S i t e ) ， 内部核 糖体进入位点 ， （小 R N A 病毒） 5 T U R 上 可被核 糖体识别并启动 翻 译的 一段 序列 ，具 有三叶 草二级结 构， 使蛋 白质翻 译起始不 依赖于 5 帽结 构，从 而使直接 从 m R N A 中间 起 始翻译成 为可能 。 重要应用 价值： 常用构建 真核生物双顺反 子 （b i c i s t r o n i c m R N A ） ， 置于两个 蛋白编码基因中 间 ， 第一个蛋 白

20、靠 5 帽子结构 起 始翻译， 而第二个蛋白则 依靠 I R E S 起始翻译 。 4 . 4 . 4 . 4 . 现代分 子生物学发展进 程中，哪些病毒 扮演重要角色， 并发挥重要作用 ？ （仅举部 分例子作为参考 ） 逆转录病 毒 逆转录酶 T 4 噬菌体 D N A 连接酶 腺病毒 腺病毒载 体：表达目的蛋 白、基因治疗 杆状病毒 杆状病毒 表达载体：真核 表达系统，表达 大片段 D N A 的理想载 体 小 R N A 病毒 I R E S 构建真核 生物双顺反子病毒学问答题复习 z q c 6 6 6 6 / 1 4 1 4 1 4 1 4 M 1 3 噬菌体 使用 M 1 3 噬菌

21、体载 体得到单链 D N A （进行 D N A 测序） 噬菌体 构建文库 5 . 5 . 5 . 5 . 为什么 要构建感染性克 隆，感染性克隆 的应用价值？ 原因： 1 ）R N A 病毒基因 组高度变异 2 ）多数 R N A 病毒基因 组无感染性 应用价值 ： 1 ）用于实验 室研究：病毒基 因突变研究，基 因功能研究，耐 药研究 2 ）生产应用 ：快速制备疫苗 株（如流感） 第四 章 复制 1 . 1 . 1 . 1 . 两个著 名的实验 1 1 1 1 ）E l l i s E l l i s E l l i s E l l i s & & & & D e l b r u c k

22、, D e l b r u c k , D e l b r u c k , D e l b r u c k , 1 9 3 9 1 9 3 9 1 9 3 9 1 9 3 9 一步生 长曲线 意义 ：第一 次证明病 毒复制 包括三个 必须的 阶段：感 染的起 始、病毒 基因组 复制和表 达、成 熟病毒粒 子从 被感染的 细胞中释放出来 步骤 ：将噬 菌体加到 快速生 长的细胞 培养物 种，几分 钟后， 将培养基 稀释， 阻止噬菌 体颗粒 和未感染 的细 菌细 胞进一 步相互作 用。该 步骤目的 是使噬 菌体感染 细胞同 步化，最 大限度 地允许单 个细胞 被感染， 以便 于观察噬 菌体在细胞内

23、的 复制动力学效应 。在一定时间内 取样观察释放出 来的噬菌体数量 。 2 ）H e r s h e y & C h a s e , 1 9 5 2 证明 D N A 是遗传物 质 用 3 5 S （蛋白质 ） 、 3 2 P （核酸 ） 分别标记 的 T 2 噬菌体感 染大肠杆菌 ， 短时间后 搅拌使大肠杆菌 表面的噬菌体 衣壳脱离 ， 分析， 3 5 S 大部分存 在于上清 （病毒衣壳 ） ， 3 2 P 大部分存 在于沉淀 （ 细胞） 中，证明 D N A 作为遗 传物质进 入了大肠杆菌。 3 . 3 . 3 . 3 . 介绍一 种病毒的复制循 环 八个经典 的步骤：吸附、 穿入、脱壳、

24、表 达、复制、组装 、成熟、释放病毒学问答题复习 z q c 7 7 7 7 / 1 4 1 4 1 4 1 4 参考（可 能需要写得详细 一些 ） ： 1 ）H I V H I V H I V H I V 生命周期 ： 吸附 ，侵入，脱壳， 基因组 R N A 的逆转录 和整合， 复制，表 达（ 调控基因 的早期表达 、 结构基因 和酶类基因的晚 期表达 ） 以及毒粒 的装配和出芽释 放等几个环节 。 2 ）流感病 毒：吸附、侵入 、脱壳、表达、 复制、装配、释 放 3 ）乙肝病 毒（ H B V ） ：吸附、 侵入、脱壳、入 核形成 c c c D N A 、转录、 翻译、逆转录、 装配、

25、释放（见 下） 病毒进入 宿主肝细胞和释 放它的 D N A 在核内， 病毒 D N A 转变为共 价闭合环形 D N A （ c c c D N A ） c c c D N A 充当模 板参与 4 个 m R N A 片段转 录 ，然后由 后者形成 H B V D N A 、 病毒蛋 白 （ H B s A g , H B e A g , H B c A g , 等 ）和 H B V D N A 聚合酶 H B V D N A 聚合酶直 接包裹到核衣壳 中 。 部分核衣 壳通过内质网和 高尔基体输送到 细胞外而感染新 的 细胞。其 余的核衣壳停留 在细胞内而维持 病毒 D N A 群体数量

26、。 第五 章 表达 1 . 1 . 1 . 1 . 噬菌 体的调 控原件 P P P P L L L L ：顺式序 列，转录左端基 因（ N 、 c ）的启动 子 O O O O L L L L ：顺式序 列，短的非编码 区域（ 5 0 b p ） ，结合抑 制蛋白，关闭左 端表达 P P P P R R R R ：顺式序 列，转录右端基 因（ c r o 、c 、结构蛋 白基因）的启动 子病毒学问答题复习 z q c 8 8 8 8 / 1 4 1 4 1 4 1 4 O O O O R R R R ：顺式短 的非编码区域（ 5 0 b p ） ，限制右 端基因打开 c c c c ：有 自

27、己的 启动子。 重要的 负调控基 因：编 码 蛋白结合 O R 、 O L ， 阻止 c r o 转录同时 关闭左端基 因，允许 c 转录 c c c c 、 c c c c ：编码蛋 白帮助 c 转录 c r o c r o c r o c r o ：反式元 件，编码蛋白结 合 O R 使 c 不能结合 N N N N ：反式元 件，编码抗终止 子蛋白，使聚合 酶处于 活跃状态 Q Q Q Q ： 反式元件 ， 与 N 作用相当 ， 但只促进 P R 后转录 2 . 2 . 2 . 2 . 噬菌 体的溶 源 - - - - 裂解 转换如 何调控 感染细 菌后， N 、c r o 正常转 录。

28、 N 蛋白促 使噬菌体基因转 录，包括 c 、c 。当 c 、c 积累到 一定量 后， c 会开始转 录 。 通常情况 ， c 会被细胞 内的蛋白酶降解 ，所以从 P L 和 P R 的转录可 以维持，噬菌体 复制，细胞裂解 ； 但如果 c c c c 积累 到一定的 量，会 激活 c c c c 。c 抑制子 蛋白增加，结合 O L 和 O R ，关闭 P L 和 P R ，阻止除 了 c 外所有噬 菌体基因转录 。 噬菌体实 现溶源性转化 。 高浓度 c 可以结合 在自身的启动子 上 ， 维持稳定 的 溶源状态 。 外界刺 激下，细胞会产 生 R e c A R e c A R e c A

29、 R e c A 蛋白 ，能降解 一部分 c c c c 蛋白 ，使 c r o c r o c r o c r o 得以 转录 。C r o 蛋白阻 止 c 转录 ， 同时增强 自身转录。其他 噬菌体基因得到 转录，噬菌体进 入裂解循环。 3 . 3 . 3 . 3 . 各类 病毒的 编码策 略，对 细胞的 依赖程 度，以 及代表 病毒 1 1 1 1 ） d s D N A d s D N A d s D N A d s D N A 病毒 分为两类 ：病毒学问答题复习 z q c 9 9 9 9 / 1 4 1 4 1 4 1 4 专一的核 复制（ e . g . A d e n o v

30、i r i d a e 腺病毒, P o l y o m a v i r i d a e 多瘤病毒 , H e r p e s v i r i d a e 疱疹病毒 ） 细胞质复 制（ e . g . P o x v i r i d a e 痘病毒） 1 多瘤病毒 和乳头瘤病毒（ d s D N A 核复制） 多瘤病毒 在复制和基因表 达上都非常依赖 细胞的机制 多瘤病毒 编码的反式作用 因子（ t r a n s - a c t i n g f a c t o r s ： T - a n t i g e n s ）能够刺 激转录和基因组 复制 乳头瘤病 毒也非常依赖细 胞的复制机制， 主要体

31、现在末端 分化的角细胞中 2 腺病毒 对细胞的 转录装置很依赖 ，但本身也拥有 不同的调节机制 来调控基因表达 这些机制 包括反式作用的 转录激活蛋白（ E 1 A ）和转录 后的调节 腺病毒的 基因表达可分为 两个阶段：早期 和晚期，晚期表 达发生在复制后 3 疱疹病毒 很少依赖 细胞的酶类系统 编码很多 参与 D N A 代谢的酶 （入胸苷激酶） 和一些反式作用 因子，它们调节 不同的基因表达 和感染的不 同阶段 因为疱疹 病毒基因组很大 ，很复杂，基因 表达以一种连续 的、串联的方式 来进行调节 4 痘病毒 基因组复 制和基因表达几 乎不需要细胞的 机制（除了核糖 体） 痘病毒的 基因组

32、编码大量 的酶，来调节 D N A 代谢，病 毒基因转录及转 录后的 m R N A 修饰 许多酶都 被包裹在病毒的 颗粒中 （超过 1 0 0 个蛋白质 ） ， 这些酶的 存在 ，能够使病 毒的转录和复制 爱细胞 质中发生 ，由病毒本身来 控制 病毒的基 因表达分为两个 不同的阶段，由 位于病毒粒子核 心的酶来完成 在基因组 复制之前 ， 大约有 5 0 % 的基因组 （编码早期 基因 ） 在部分脱 颗核心颗粒中表 达 ， 产生 5 加帽， 3 加尾的非 剪接 m R N A 在基 因组复 制后，晚 期基因 在细胞质 中表达 ，但它们 的表达 也是依赖 于病毒 编码的蛋 白，而 不是细胞 的

33、 转录因子 2 2 2 2 ） s s D N A s s D N A s s D N A s s D N A 病毒 具有自主 复制能力和依赖 辅助病毒复制的 一类细小病毒的 复制和基因表达 都非常需要外部 环境的帮助 如细 小病毒 科（ P a r v o v i r i d a e ）依 赖病毒 属的一些 病毒是 复制缺陷 的，它 们的复制 完全需 要腺病毒 或疱疹 病毒的共 感染来帮助 。 对于腺病 毒来说 ， 在这一过 程中起帮助作用 的是早期转录出 来的调节蛋白 （如 E 1 A ） ， 而非完全 转录出的结构蛋 白 3 3 3 3 ） d s R N A d s R N A d s

34、 R N A d s R N A 病毒 R N A 病毒的基 因组在根本上是 不同于宿主基因 组的 基因组分 节且在细胞质中 完成复制表达 在感染早 期，在部分脱壳 亚病毒粒子中， 双链 R N A 片段被病 毒特异性的转录 酶转录 4 4 4 4 ） s s R N A ( + ) s s R N A ( + ) s s R N A ( + ) s s R N A ( + ) 病毒 H C V 、 S A R S 带包膜， 胞质复制 感染后， 病毒基因组可直 接作为 m R N A 翻译（基 因组类似多顺反 子） 对基因表 达控制的多样化 两种主要 的基因表达策略 亚基因组 产生 改变基因

35、组格局 更多蛋白 产生 直接切割 蛋白 转录 切割 F i g 5 . 7 F i g 5 . 8 亚基因组 R N A 产生，两 次 / 多次翻译病毒学问答题复习 z q c 1 0 1 0 1 0 1 0 / 1 4 1 4 1 4 1 4 5 5 5 5 ） s s R N A ( s s R N A ( s s R N A ( s s R N A ( - ) - ) - ) - ) 病毒 基因组分 节或不分节 分节的正 粘病毒复制的第 一步转录出单顺 反子的 m R N A ，同时也 可以作为模板进 行复制 病毒特异 性的转录 / 复制酶包 裹在核衣壳中是 必需的 F i g 5 .

36、9 5 . 1 0 6 6 6 6 ） 有 R N A R N A R N A R N A 复制中 间体的 d s D N A d s D N A d s D N A d s D N A 病毒 含有大量 重叠的读码框， 最大量的压缩其 编码能力 t h e x 基因编码 调节转录的顺式 激活因子 从独立 的启动子中转录 出至少两个 m R N A s ，每个 至少编码三个蛋 白质，较大的 m R N A 也是在 病毒颗粒形 成过程中 作为反转录的模 板 7 7 7 7 ） 逆转录 病毒 前病毒基 因组长的末端重 复序列中含有大 量的细胞转录因 子结合位点 启动子的 组成较复杂 启动子的 基本活

37、性较弱， 在 R N A 聚合酶作 用下，只有有限 的转录 F i g 5 . 1 4 依靠细胞 的转录因子，转 录活性很弱（启 动子活性很弱） 转录的正 调控因子， H T L V - t a x 蛋白和 H I V - t a t 蛋白，这 些转录因子增强 了转录效率至少 5 0 - 1 0 0 倍 t a x 蛋白和 t a t 蛋白都不 直接结合到各自 的 L T R ， 而是首先 结合细胞的转录 因子 ， 然后再结 合到启动子区域 4 . 4 . 4 . 4 . S V S V S V S V T - T - T - T - 抗原如 何调控自身基因 表达 根据其编 码蛋白质大小， S

38、 V 4 0 基因编码 两个 T - 抗原 宿主细胞 的 R N A 聚合酶转录其基 因组，但大的 T - 抗原调节 其转录 小的 T - 抗原非病 毒复制必需，但 能调节病毒 D N A 在核中的 聚集 两种蛋白 都含核定位信号 ，可以帮助在核 中聚集 5 . 5 . 5 . 5 . 简述核 糖体移码 核糖体移 码首先是在病毒 中被发现的，后 来在原核和真核 细胞中也发现了 此现象 对逆转 录病毒来说，其 基因组产生至少 两个 5 端加帽 的 3 多聚腺 苷酸 m R N A ，其中 一个长的，不剪 切的转 录本编码 g a g ，p r o 和 p o l y 蛋白，同 时也作为基因组 R

39、 N A 被包裹在 病毒粒子中。 这三个基 因交界处 ， 有一个特 殊的序列 ， 它们由重 复的 U U U A A A C 组成 。 在大多数 情况下 ， 当核糖体 经 过它 们时， 也会翻译 它们并 继续翻译 直到终 止密码子 ；但是 有很少的 比例的 核糖体在 继续翻 译前会向 后倒 退一个核 苷酸，这样就造 成了读码框的改 变。因为只有少 部分核糖体在经 过 S l i p p e r y s e q u e n c e 时会移码 ， 其 本身所导 致的移码效率很 低。但在 S l i p p e r y s e q u e n c e 下游有一 个倒转重复序列 ，可以形成茎环 结构，

40、同时 ， 在其下游 又有一段额外序 列可以和环区域 的碱基配对，形 成假结（ p s e u d o k n o t ） ，在 m R N A 上的这种 二级结 构导致了 核糖体在这个 S l i p p e r y s e q u e n c e 暂停翻译 ，增加了移码频 率。 6 . 6 . 6 . 6 . 蛋白翻 译区调控有哪两 种？如何完成？ 蛋白翻译 区调控有核糖体 移码和末端复制 （作用都是增加 基因组表达蛋白 的数量） 1 ） 核糖体移 码 ： 三个基因 交界处有一重复 序列 S l i p p e r y s e q u e n c e ， 下游有一 个倒转重复序列 ， 可以形

41、成 茎环结 构。同时，在其 下游又有一段额 外序列可以和环 区域的碱基配对 ，形成假结（ p s e u d o k n o t ） 。核糖 体 在经过 S l i p p e r y s e q u e n c e 时会移码 ，改变读码框。 2 ） 末端复 制： 有些 逆转录 病毒 中， p r o 基 因和 g a g 基 因间没 有 S l i p p e r y s e q u e n c e 和 p s e u d o k n o t ， 但有 U A G 终止 密码子 。大多数 情况下 ， m R N A 翻译 在 U A G 终止 ，产生 g a g 蛋白 ；有些 情况下， U

42、A G 终止 密码子 的终病毒学问答题复习 z q c 1 1 1 1 1 1 1 1 / 1 4 1 4 1 4 1 4 止功能被 抑制，导致翻译 继续进行，产生 g a g - p r o - g o l 多聚蛋白 ，然后切割形成 成熟蛋白。 第六 章 感染 1 . 1 . 1 . 1 . 植物体 内病毒如何传播 起始阶段 ，大多数植物病 毒在感染部分扩 增，引起感染位 点病变症状：出 现坏死斑点 随后通过 两种方式传播到 其他部分。 1 细胞到细 胞的传播：依靠 液泡系统，从而 导致系统感染 2 通过维管 系统 运动蛋白 修饰胞间连丝 植物细胞 壁间的通道 胞间连丝 允许细胞间的交 流

43、， 从而传送 代谢物质 ，但对于病 毒来说太窄了 两种分子 机制： A 烟草 花叶病毒 ( T M V ) ：亚 基因组 m R N A 编码 蛋白修饰 胞间连 丝，使基 因组 R N A 被 3 0 - k 蛋白 包裹着， 从感染的 细胞向邻近细胞 转移 B 豆花叶病 毒 ( C P M V ) ：5 8 - / 4 8 - k 蛋白质形 成管状结构，允 许完整的病毒颗 粒通过 2 . 抗病毒 转基因植物如何 抗病毒抗病毒转 基因植物 表达重 组病毒蛋白或核 酸，但不致 病。例如 ： 病毒 壳蛋白 （ v i r u s c o a t p r o t e i n ） 、 完整 或部分 病毒

44、复制 酶 、 小干 扰 R N A （干 扰病毒 表达的 R N A 水平 ） 、 有缺陷的病 毒基因组 、卫星序列、 具催化功 能的 R N A 序列、经过修饰 的运动蛋白 3 . 3 . 3 . 3 . 细胞免 疫三种机制 1 ）非特异 性杀死：无需抗 体介导，由 N K N K N K N K 细胞介 导 N K （干 扰素激活 ）裂解 靶细胞不 需要抗 原识别， 不受 M H C 提呈 限制，更 具广泛 的专一性 ，不需 要感应抗 体，是防 御病毒感染的第 一道屏障。 先天免疫 的一部分 C T L 免疫的补 充，后来被 C T L 免疫（获 得性）替代 活性被 M H C - I 抗

45、原抑制 ，允许识别自我 ，免除破坏正常 细胞 一些病毒 感染后，破坏了 正常细胞 M H C - I 表达，这 是 N K 细胞识别 被感染细胞的机 制之一病毒学问答题复习 z q c 1 2 1 2 1 2 1 2 / 1 4 1 4 1 4 1 4 N K 细胞细胞 毒性被 I F N - 激活，直 接指导 N K 细胞杀死 感染细胞 2 ）特异性 杀死：由 C T L s C T L s C T L s C T L s 介导 有细胞毒 性的 T - c e l l （C T L s ）通常为 C D 8 + 表型 C T L s 发挥主要 免疫功能，而且 受 M H C 限制 所有有核

46、细胞都表达 M H C - I ，具有提 呈功能的细胞才 表达 M H C - I I C T L s 通过 T C R 复合体识 别外源抗原，它 结合被 M H C - I 呈现的抗 原 C T L 反应动力 学比 N K 慢 3 - 7 天，二者 互为补充 C T L s 诱导依赖 免疫系统对 T - 细胞抗原 决定簇的识别 ， 它不同于 体液免疫中免疫 系统对 B - 细胞抗原 决定簇 的识别 3 ）依赖抗 体的细胞毒作用 （ A D C C A D C C A D C C A D C C , a n t i b o d y - d e p e n d e n t c e l l u l

47、 a r c y t o t o x i c i t y ） A D C C 依赖于效 应细胞表面的抗 体对靶细胞表面 抗原的识别 A D C C 需已有的 抗体反应，在病 毒感染早期不发 挥功能，是获得 性免疫的一部分 A D C C 对病毒感 染总体贡献尚不 清楚 4 . 4 . 4 . 4 . 细胞凋 亡与坏死的区别 凋亡 ：受 免疫系统 严格控制 ， 避免炎症 产生。产 生 凋亡体 被吞噬 坏死 ： 由于免疫 系统作用 ， 从坏死细 胞中释放出的细 胞因子引起 局部炎症 ， 很多情况 下导致了 附近细胞 或组织的 损坏 。 0 7 年问答 题 1 逆转 录病毒与 D N A 肿瘤病 毒

48、都可以引起细 胞转化，请比较 两类病毒引起细 胞转化的机制有 何不同。 能够转化 细胞的逆转录病 毒分为三类：转 换、顺式作用 和反式作 用。 （1 ） 转换 ： 来自复制 缺陷 、急性转化 的逆转录病毒所 产生的原癌蛋白 都是融合蛋白 ， 包含有源 于病毒基因 的附加 序列，一般病毒 的 g a g 序列位 于蛋白质的 N 末端。 这些附加序列可 能改变蛋白质的 功能或细胞内的 定位，这 些改变可能导致 转化。 （2 ）顺式作 用 慢性转化 逆转录病毒不含 有致癌基因，它 们通过插入激活 细胞中癌基因表 达产生转化作用 。 （3 ）反式作 用 病毒编码 一种转录激活物 蛋白如 t a x 基

49、因编码 蛋白，通过反式 作用来刺激细胞 内癌基因的转录 D N A 肿瘤病毒 通过与 P 5 3 和 R b 相互作用 ，改变细胞周期 ，从而使细胞转 化 2 病毒 入侵宿主细胞， 在遭受免疫系统 的攻击后，有哪 些策略逃避免疫 应答？ ( 1 ) M H C 1 型抗原递 呈的抑制，逃脱 C T L 反应 ( 2 ) M H C I I 型抗原递 呈的抑制 ( 3 ) N K 细胞溶细 胞作用的抑制 ( 4 ) 细胞因子 作用的抑制（病 毒编码受体，病 毒因子） ( 5 ) 阻断干扰 素引发的信号转 导 ( 6 ) 对体液免 疫的逃逸，病毒 蛋白的变异 ( 7 ) 对补体联 级反应的逃逸 3 请画 图描述病毒的一 步生长曲线，并 解释曲线的不同 阶段所代表的意 义 将适 量病毒 接种于高 浓度敏 感细胞培 养物， 或高倍稀 释病毒 细胞培养 物，或 以抗病毒 血清处 理病毒细 胞培病毒学问答题复习 z